細胞計數(shù)與存活測試

來源：上海加科生物科技有限公司 2015年06月17日 13:30

0.4 % w/v trypan blue (GibcoBRL 15250-061)

Erythosin bluish stain

取0.1 gram Erythrosin bluish (Sigma E-9259) 及0.05 gram preservative methyl paraben (Sigma H-3647) 溶于100 ml Ca /Mg free saline

血球計數(shù)盤及蓋玻片(Hemocytometer and coverslip)

計數(shù)器(counter)

低倍倒立顯微鏡

粒子計數(shù)器(Coulter counter, Coulter Electronics)

1 取50ml 細胞懸浮液與50ml trypan blue (or Erythrosin bluish) 等體積混合均勻于1.5ml 小離心管中。

2 取少許混合液(約15ml) 自血球計數(shù)盤chamber 上方凹槽加入，蓋上蓋玻片，于100 倍倒立顯微鏡下觀察，活細胞不染色，死細胞則為藍色(或
紅色- Erythrosin bluish)。

3 計數(shù)四個大方格之細胞總數(shù)，再除4，乘以稀釋倍數(shù)(至少乘以2，因與trypan blue等體積混合)，zui后乘以10⁴ ，即為每ml 中細胞懸浮液之細
胞數(shù)。若細胞位于線上，只計上線與右線之細胞(或計下線與左線之細胞)。

4 大格*細胞總數(shù)x 2 x 10⁴ / 4= 細胞數(shù)/ml*每一大格的體積= 0.1cm x 0.1cm x 0.01cm = 10^-4 ml

4 若不用血球計數(shù)盤，可用Coulter counter 作自動計數(shù)，惟無法辨別死細胞或活細胞。

5 范例：T75 monolayer culture 制成10ml 細胞懸浮液，取0.1 ml 溶液與0.1ml trypan blue 混合均勻于試管中，取少許混合液加入血球計數(shù)盤，計數(shù)四大方格內之細胞數(shù)目。

活細胞數(shù)/方格：55 ,62, 49, 59

死細胞數(shù)/方格：5, 3, 4, 6

細胞總數(shù)= 243

平均細胞數(shù)/方格= 60.75

稀釋倍數(shù)= 2

細胞數(shù)/ml：60.75 x 104 x 2 = 1.22 x 10⁶

細胞數(shù)/flask： 1.22 x 106 x 10ml = 12.2 x 10⁶

存活率：225/243﹦92.6 %

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