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單細(xì)胞凝膠電泳的實(shí)驗(yàn)原理

來源:上海一研生物科技有限公司   2015年07月03日 11:58  

實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)胞核中,DNA是環(huán)狀附著在核基質(zhì)上,細(xì)胞裂解過程中,核基質(zhì)被溶解、抽提,DNA的結(jié)構(gòu)則未發(fā)生變化。如果DNA鏈上存在缺口,則使DNA超螺旋變的松弛,DNA環(huán)向外展,同時由于暴露了陰電荷,在電場力的作用下,松動的DNA環(huán)向陽極遷移,但是由于這種松動的DNA環(huán)一端仍附著于核DNA,其遷移距離受到限制,因此尾長并不總是真實(shí)反映鏈缺口的多少。實(shí)際應(yīng)當(dāng)依靠尾長與尾部的熒光強(qiáng)度同時來進(jìn)行分析。

鏡檢和分析:
   1) 在熒光顯微鏡下觀察,綠光激發(fā)吸收濾片590nm。必要時照相記錄。
   2) 記數(shù)觀察的細(xì)胞,記錄彗星細(xì)胞出現(xiàn)的頻率,用目鏡測微尺測頭長與全長,計算核DNA遷移距離。

使用兩層凝膠法,經(jīng)裂解、DNA解旋、電泳和中和得到濕瓊脂糖凝膠片。將濕瓊脂糖凝膠片置于冰冷無水乙醇中脫水10分鐘,后置于空氣中自發(fā)干燥。全部操作在采血后8小時內(nèi)完成,操作過程中注意避光。使用50μl 30μM的溴乙錠溶液染色、照相。使用單細(xì)胞凝膠電泳軟件分析所有照片,隨機(jī)測量100個以上細(xì)胞的尾長和olive尾矩,以尾長和olive尾矩的算術(shù)均數(shù)代表個體DNA損傷情況。

英文名稱 Homo sapiens (Human) 囊泡乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VAChT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 囊泡單胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(VMAT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 耐氧化性能蛋白1(OXR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 耐扭蛋白3A(TOR3A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
細(xì)胞英文名稱 Homo sapiens (Human) 耐扭蛋白2A(TOR2A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 耐扭蛋白1B(TOR1B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T

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