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對(duì)肽樣品的質(zhì)譜分析前使用SPE小柱脫鹽的操作方法
SPE脫鹽操作對(duì)于LC-MS分析很重要，對(duì)于常規(guī)LC-UV分析不是必需操作。
試劑和設(shè)備：所有的試劑應(yīng)在使用前新鮮配制。
當(dāng)使用1 mL C18 SPE柱時(shí) (貨號(hào)：218SPE1000)時(shí)，推薦的操作方法是：
- 用1.0 mL 乙腈預(yù)活化小柱。
- 用0.5 mL 0.1% TFA水溶液預(yù)平衡小柱。然后用0.5mL再重復(fù)一次。
- 將0.2 mL 含有0.1-0.2% TFA的肽樣上樣到SPE柱上，肽被SPE保留。
- 用0.5 mL 0.1% TFA水溶液清洗SPE小柱，除去弱保留的雜質(zhì)。
- 用0.2 mL 75:25 (或甚至 90:10) 不含任何TFA的乙腈/水溶液將肽從SPE柱上洗脫下來。
- 使用氮?dú)饬鳎ɑ蚴褂谜婵针x心管，加熱不應(yīng)超過30攝氏度）將洗脫收集物揮發(fā)至約10 μL。
- 加入190 μL 含有0.2% 甲酸和 0.01% TFA的 5:95 乙腈/水溶液。
- 渦旋混合后，樣品存放在冰箱中。此樣品即可用于LCMS進(jìn)樣分析。
注意：要讓溶液流過SPE小柱，可在SPE柱管上方施加正壓。施加正壓的辦法可以是將一個(gè)1000μL 塑料吸液槍頭(pipet tip)加在氮?dú)夤苈飞希缓髮⒋宋簶岊^摁在SPE小柱的頂端開口端。
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