国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>工作原理>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

細(xì)胞遷移以及侵襲實驗

來源:北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司   2015年07月31日 10:49  

  遷移實驗(cell migration assay)

 實驗材料
(1)ThinCert插入式細(xì)胞培養(yǎng)器: 24-well, 8.0-μm pore membranes (Greiner662638)

(2)細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑:無血清培養(yǎng)基,10%血清培養(yǎng)基,PBS,0.02%EDTA

(3)固定液:甲醇

(4)染色液:Giemsa染液

(5)封片劑:中性樹膠

(6)其他:小鑷子,棉棒,載玻片,蓋玻片

 操作步驟

(1)所有細(xì)胞培養(yǎng)試劑和ThinCert放在37℃溫育;

(2)待測細(xì)胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期,消化細(xì)胞,用PBS和無血清培養(yǎng)基先后洗滌一次,

 用無血清培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞,計數(shù),調(diào)整濃度  為2×105 /ml;

(3)在下室(即24孔板底部)加入600-800μl 含10%血清的培養(yǎng)基,上 室加入100-

 150μl細(xì)胞懸液,繼續(xù)在孵箱培養(yǎng)24小時;

(4)用鑷子小心取出ThinCert,吸干上室液體,移到預(yù)先加入約800μl甲醇的孔中,室溫固定30分鐘;

(5)取出ThinCert,吸干上室固定液,移到預(yù)先加入約800μl Giemsa染液 的孔中,室溫染色15-30分鐘;

(6)輕輕用清水沖洗浸泡數(shù)次,取出ThinCert,吸去上室液體,用濕棉棒小 心擦去上室底部膜表面上的細(xì)胞;

(7)用小鑷子小心揭下膜,底面朝上晾干,移至載玻片上用中性樹膠封片;

 (8)顯微鏡下取9個隨機(jī)視野計數(shù),統(tǒng)計結(jié)果。

  注意事項

(1)根據(jù)待測細(xì)胞體積大小選擇合適孔徑的ThinCert。常用的為8.0-μm孔徑(如

  AGS細(xì)胞),如果細(xì)胞體積較大可以考慮用10-μm孔徑;

(2)根據(jù)待測細(xì)胞的遷移能力強(qiáng)弱調(diào)整細(xì)胞數(shù)和遷移時間。常規(guī)24-well  ThinCert接種細(xì)胞數(shù)約

 為2≈5×104/well, 遷移時 間 12≈36小時;

(3)由于Greiner公司的24-Transwell內(nèi)含24個獨立的ThinCert,為了避免操作污染,

 每次實驗可預(yù)先另準(zhǔn)備一塊24孔普通培養(yǎng)板(Greiner);

(4)如果細(xì)胞遷移能力較弱,下室液體可用3T3細(xì)胞無血清培養(yǎng)24小時獲得 的上清加50μg/ml FN(Fibronectin),

 具體可查  閱相關(guān)文獻(xiàn);

(5)細(xì)胞懸液加入膜中央,盡量保證液面水平;

(6)固定染色擦洗時動作小心,避免擦去膜底面的細(xì)胞。但一定要充分擦凈膜 表面上未遷移的細(xì)胞,

 以免影響讀數(shù)。尤其是  膜周邊上可用細(xì)牙簽或小鑷子纏上濕棉花擦洗,但要小心避免將膜戳破;

(7)Chamber和膜上都無法標(biāo)記,操作時應(yīng)小心避免混淆實驗組和對照組;

(8)充分晾干,避免殘留水分導(dǎo)致鏡下聚焦不一致。



免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
乌海市| 砀山县| 苏尼特右旗| 临夏县| 望江县| 南涧| 贡觉县| 固原市| 涿鹿县| 盖州市| 昆明市| 双鸭山市| 阿合奇县| 鄯善县| 额尔古纳市| 平安县| 嘉兴市| 井冈山市| 东台市| 中山市| 三明市| 甘谷县| 莲花县| 思茅市| 内丘县| 平定县| 建德市| 海宁市| 旌德县| 栾川县| 政和县| 靖江市| 股票| 仪陇县| 镇坪县| 红安县| 游戏| 孝昌县| 托里县| 夏邑县| 尖扎县|