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實(shí)驗(yàn)材料 動(dòng)物血清樣品
試劑、試劑盒 正辛酸醋酸緩沖液PBS
儀器、耗材 透析袋高速低溫離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)步驟
一、材料和試劑
1. 正辛酸
2. 60 mmol/L，pH4.0醋酸緩沖液，PBS
3. 透析袋
4. 高速低溫離心機(jī)
二、操作步驟
1. 將待提取樣品用60 mmol/L，pH4.0醋酸緩沖液稀釋3～4倍，調(diào)pH至4.5，對(duì)含脂質(zhì)較高的標(biāo)本可采用二氧化硅粉或玻璃纖維吸附法除去脂質(zhì)。
2. 在室溫下邊攪拌邊緩慢加入正辛酸，按每ml樣品中加25 μl，若樣品體積小于5 ml，則每ml樣品內(nèi)加入30 μl正辛酸，攪拌30 min。
3. 10 000×g離心30 min，取上清液通過(guò)定性濾紙過(guò)濾，裝人透析袋，用20倍體積的PBS，4℃透析過(guò)液，中間換液3～4次。
4. 然后每毫升混合液加0.27 g硫酸銨，攪拌30 min。
5. 以5 000 g離心15 min，收集沉淀物，溶于少量PBS中，再以15 000×g離心20 min。上清液即為提取的Ig，其中大部分為IgG，約占90%，少量為IgA及IgM，回收率>80%。整個(gè)操作可在24 h內(nèi)完成。
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