實(shí)驗(yàn)材料    雜交瘤細(xì)胞
試劑、試劑盒    *DMEM-10HEPES丙酮酸鈉PBS
儀器、耗材    注射針頭離心管轉(zhuǎn)子離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)步驟    
1.  用20G或22G的注射針，小鼠腹膜內(nèi)注射降植烷，每只鼠0.5 ~ 1 ml，1周后接種細(xì)胞。
 
2.  在175 cm2培養(yǎng)瓶中加*DMEM-10/HEPES/丙酮酸鈉培養(yǎng)液，進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，使細(xì)胞生長至對數(shù)期。
 
3.  將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入50 ml 錐形離心管中，室溫下500 g 離心5 min。
 
4.  細(xì)胞重懸于50 ml 無菌的PBS或HBSS（不含F(xiàn)BS）中洗滌。然后室溫下500 g 離心5 min，棄上清。重復(fù)2次，然后細(xì)胞重懸于5 ml 的PBS或HBSS中。
 
5.   計(jì)數(shù)細(xì)胞，通過臺盼藍(lán)染色法確定細(xì)胞活力。
 
6.  用不含F(xiàn)BS的HBSS或PBS調(diào)整細(xì)胞濃度至2.5×102細(xì)胞/ml。
 
7.  用一個(gè)10 ml 的無菌的帶22G針頭的注射器，對裸鼠進(jìn)行腹膜內(nèi)注射2 ml 細(xì)胞，等待腹水形成（1~2周）。
 
8.  收獲腹水。

（1）一只手抓住并固定小鼠，使其腹部皮膚繃緊。

（2）另一只手將一只18G的計(jì)頭插入小鼠腹腔1~2 cm 深。

（3）進(jìn)針部位為左下腹或右下腹，以避免刺入鼠上腹部的重要器官，以及腹中線處的主要大血管。

（4）令腹水滴入一只無菌的15 ml 聚丙烯錐形離心管中。
 
9.  于室溫下，1 500 g 離心腹水10 min，收集上清，棄沉淀，將腹水存放于4℃，直到收集腹水的工作完成（在1周內(nèi)）。
 
10.  再次收獲腹水前，讓小鼠再次積累腹水（2~3天），具體操作同步驟8，腹水的加工處理操作同步驟9。重復(fù)這個(gè)過程直到再沒有腹水產(chǎn)生可供收集，或者小鼠健康狀況不佳。此時(shí)，可處死小鼠

11.  把在幾天內(nèi)收集到的腹水匯集到一起，于56℃水浴45 min 進(jìn)行熱處理，如果凝塊形成，可參照步驟9中方法去除之，然后再離心。

12.  采用適當(dāng)?shù)姆椒z測腹水中的MAb的滴度。
 
13.  按大于1：10的比例稀釋MAb，并進(jìn)行濾過除菌，濾膜孔徑為0.45 μm，分裝并凍存于-70℃，避免反復(fù)凍融，可凍存數(shù)年之久。