1. 選用原代細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好(90-95%),生長(zhǎng)數(shù)量大于5×105進(jìn)行傳代。
2. 吸除原代細(xì)胞培養(yǎng)液。用含雙抗的1×PBS(pH7.4)清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶2次。
3. 1ml細(xì)胞消化液加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶,輕輕搖動(dòng),使細(xì)胞消化液覆細(xì)胞培養(yǎng)瓶底。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于5%CO2、95%空氣、37oC培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)數(shù)分鐘后,在顯微鏡下觀察原代細(xì)胞的消化狀態(tài)。
請(qǐng)記?。喝缳N壁細(xì)胞逐漸趨于圓形、部分懸浮后,用手指輕輕拍打細(xì)胞培養(yǎng)側(cè)部或底部至大部分貼壁細(xì)胞懸浮,加入細(xì)胞終止液,終止細(xì)胞消化。每種原代細(xì)胞的消化時(shí)間是有差異的。
5. 吹打培養(yǎng)瓶中懸浮細(xì)胞若干次,再吸出細(xì)胞懸浮液,轉(zhuǎn)入15ml離心管中,1000rpm離心5分鐘。
6. 棄離心管中液體,加入原代細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。細(xì)胞計(jì)數(shù),確定細(xì)胞數(shù)量。
細(xì)胞分瓶后,加入適量原代細(xì)胞培養(yǎng)液至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,置于5%CO2、95%空氣、37oC培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24小時(shí)。
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