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細(xì)胞傳代具體操作細(xì)節(jié)

來源:上海極威生物科技有限公司   2015年09月24日 12:40  

通常情況下,我們一般將細(xì)胞分為兩類,一類是貼壁細(xì)胞,一類是懸浮細(xì)胞,很多客戶在給細(xì)胞傳代的時(shí)候,往往因?yàn)橛行┘?xì)節(jié)沒有注意好,導(dǎo)致細(xì)胞存活率低、狀態(tài)差、活性不好,今天我們來具體講下這兩類細(xì)胞傳代時(shí)的具體細(xì)節(jié):

一、貼壁細(xì)胞傳代

1.提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)。

2.吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細(xì)胞。

3.加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用。

4.用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度,避免產(chǎn)生大量的氣泡。

5.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。


二、懸浮細(xì)胞傳代

1.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min。

2.棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液。

3.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。

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