MEF P3細(xì)胞的基本培養(yǎng)方法
MEF細(xì)胞鋪制:
一. 作為【小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠iPS 細(xì)胞】用飼養(yǎng)層時的使用方法:
- 在T25培養(yǎng)瓶中加入0.2%明膠,搖勻后覆蓋底面即可,于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中至少放置15 min以上。
- 吸除0.2%明膠,加入事先水浴加熱至37℃的MEF*培養(yǎng)液。一般地,一個T25培養(yǎng)瓶中約加入5 ml MEF*培養(yǎng)液。
- 按實驗需要:mES使用KM-r P3 MEF;小鼠iPS使用ICR-r P3 MEF或都使用CF-1-r P3 MEF,復(fù)蘇MEF細(xì)胞若干支。將凍存管從液氮中取出,置于37℃水浴中使之迅速融解,取出后拿到超凈臺內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁,防止污染。
- 將凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含2 ml MEF*培養(yǎng)液的15 ml離心管內(nèi),以 1000 rpm,離心5 min,離心后將上清液吸除,按照MEF細(xì)胞說明書上建議的復(fù)蘇培養(yǎng)體系,另加入新鮮的MEF*培養(yǎng)液2 ml,重懸后平均加入到T25培養(yǎng)瓶中,輕輕搖勻后置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。24 h以后可以傳入小鼠胚胎干細(xì)胞或小鼠iPS細(xì)胞。
二. 作為【人胚胎干細(xì)胞】用飼養(yǎng)層時的使用方法:
- 在T25培養(yǎng)瓶中加入5%Matrigel,搖勻后覆蓋底面即可,于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱至少放置30 min以上。
- 吸除Matrigel,加入事先水浴加熱至37℃的MEF*培養(yǎng)液。一般地,一個T25培養(yǎng)瓶中加入5 ml MEF*培養(yǎng)液。
- 按實驗需要復(fù)蘇CF-1-r P3 MEF若干支。將凍存管從液氮中取出,置于37℃水浴中使之迅速融解,取出后拿到超凈臺內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁,防止污染。
- 將凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含2 ml MEF*培養(yǎng)液的15 ml離心管內(nèi),以 1000 rpm,離心5 min,離心后將上清液吸除,按照MEF細(xì)胞說明書上建議的復(fù)蘇培養(yǎng)體系,另加入新鮮的MEF*培養(yǎng)液2 ml,重懸后平均加入到T25培養(yǎng)瓶中,輕輕搖勻后置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。24 h以后可以傳入人胚胎干細(xì)胞。
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