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細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程

來(lái)源:上海極威生物科技有限公司   2015年11月04日 20:45  

(請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)

1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加2~3

 ml0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通??刂圃?/SPAN>

1-2min)

2.鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消

化到細(xì)胞漂浮)去掉胰酶,加6~8ml *培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞

層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散
3.取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)?培

養(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞

密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存

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