收到細胞注意事項:
1、收到細胞后,請查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請盡快。
2、,如包裝完好,請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題,細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況,出現(xiàn)此狀態(tài)時,請不要打開細胞培養(yǎng)瓶,應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右,讓細胞先穩(wěn)定下,再于顯微鏡下觀察,此時多數(shù)細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁,請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理。
3、收到細胞后,請鏡下觀察細胞,用恰當(dāng)方式處理細胞。若懸浮的細胞較多,請離心收集細胞,接種到一個新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養(yǎng)基,使用進口胎牛血清. 剛接到細胞,若細胞不多時 血清濃度可以加到15%去培養(yǎng)。若細胞迏到80%左右 ,血清濃度還是在10%。
4、收到細胞時如無異常情況 ,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,留下 5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng):超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
5、將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時之需。
6、24小時后,細胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁,即可傳代。(貼壁細胞)將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細胞生長面為準)PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化,消化時間以具體細胞為準,一般1-3分鐘,不超過5分鐘。可以放入37℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動瓶壁,見細胞脫落下來,加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,1000rpm/5min。棄上清,視細胞數(shù)量決定分瓶數(shù),一般一傳二,如細胞量多可一傳三,有些細胞不易傳得過稀,有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶,以具體細胞和經(jīng)驗為準。(懸浮細胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
7、貼壁細胞 ,懸浮細胞。嚴格無菌操作。換液時,換新的細胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液,37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
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