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收到細(xì)胞注意事項

來源:上海極威生物科技有限公司   2015年11月04日 21:10  

收到細(xì)胞注意事項:

1、收到細(xì)胞,請查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請盡快。
2、,如包裝完好,請在顯微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運輸過程中的問題,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,出現(xiàn)此狀態(tài)時,請不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右,讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,再于顯微鏡下觀察,此時多數(shù)細(xì)胞會重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁,請用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,如臺盼藍(lán)染色證實細(xì)胞活力正常請按懸浮細(xì)胞的方法處理。

3、收到細(xì)胞后,請鏡下觀察細(xì)胞,用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多,請離心收集細(xì)胞,接種到一個新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養(yǎng)基,使用進口胎牛血清剛接到細(xì)胞,若細(xì)胞不多時 血清濃度可以加到15%去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右 ,血清濃度還是在10%。
4、收到細(xì)胞時如無異常情況 ,請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,留下 5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng):超過80%匯合度時,請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
5、將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時之需。
6、24小時后,細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁,即可傳代。(貼壁細(xì)胞)將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細(xì)胞生長面為準(zhǔn))PBSHanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml  0.25%EDTA的胰酶消化,消化時間以具體細(xì)胞為準(zhǔn),一般1-3分鐘,不超過5分鐘??梢苑湃?/SPAN>37℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動瓶壁,見細(xì)胞脫落下來,加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,1000rpm/5min。棄上清,視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù),一般一傳二,如細(xì)胞量多可一傳三,有些細(xì)胞不易傳得過稀,有些生長較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶,以具體細(xì)胞和經(jīng)驗為準(zhǔn)。(懸浮細(xì)胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。

7、貼壁細(xì)胞 ,懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無菌操作。換液時,換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液,37℃,5%CO2 培養(yǎng)。

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