牛血管性血友病因子抗原（vWF-Ag）定量檢測試劑盒（ELISA）使用說明書

    【試劑盒名稱】

    牛血管性血友病因子抗原（vWF-Ag）定量檢測試劑盒（ELISA）

    【試劑盒用途】

    定量檢測牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中血管性血友病因子抗原（vWF-Ag）的含量。

    上海遠慕生物科技公司高品質(zhì)ELISA試劑盒供應(yīng)商，品質(zhì)，價格實惠，售后完善，并提供免費代檢測服務(wù)。

    【檢測原理】

    本試劑盒采用雙抗體一步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標準品、待測樣本和酶標工作液加入到預(yù)先包被牛血管性血友病因子抗原（vWF-Ag）抗體的透明酶標包被板中，溫育足夠時間后，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入顯色劑A、B液，顯色劑（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中牛血管性血友病因子抗原（vWF-Ag）濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測定OD值，根據(jù)標準品和樣品的OD值，計算樣本中牛血管性血友病因子抗原（vWF-Ag）含量。

    【試劑盒組成】

    備注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：240、120、60、30、15、7.5U/L

    【需要而未提供的試劑和器材】

    1、37℃恒溫箱

    標準規(guī)格酶標儀

    精密移液器及一次性吸頭

    蒸餾水

    一次性試管

    吸水紙

    【操作步驟】

    1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

    2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

    3、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；每孔再加入酶標工作液100μL；空白對照孔不加。

    4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

    5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。

    6、顯色：每孔先加入顯色劑A液50μL，再加入顯色劑B液50μL，37℃避光顯色15min。

    7、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

    8、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。

    9、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

    【樣本要求】

    1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

    2、標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。

    【注意事項】

    1、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

    2、酶標包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

    3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。

    4、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間。

    5、為避免交叉污染，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復(fù)使用封板膜。

    6、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號的試劑不得混用。

    7、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

    【操作程序總結(jié)】

    準備試劑，樣品和標準品

    加入準備好的樣品、標準品和酶標工作液，37℃反應(yīng)60分鐘

    洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘

    加入終止液

    15分鐘之內(nèi)讀OD值

    計算

    【檢測范圍】

    7.5-240U/L

    【規(guī)格】

    96人份/盒

    【貯藏】

    2-8℃，避光防潮保存。

    【有效期】

    6個月