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牛血管性血友病因子抗原詳解

來源:上海遠慕生物科技有限公司   2016年01月18日 15:18  

    牛血管性血友病因子抗原(vWF-Ag)定量檢測試劑盒(ELISA)使用說明書

    【試劑盒名稱】

    牛血管性血友病因子抗原(vWF-Ag)定量檢測試劑盒(ELISA)

    【試劑盒用途】

    定量檢測牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中血管性血友病因子抗原(vWF-Ag)的含量。

    上海遠慕生物科技公司高品質(zhì)ELISA試劑盒供應(yīng)商,品質(zhì),價格實惠,售后完善,并提供免費代檢測服務(wù)。

    【檢測原理】

    本試劑盒采用雙抗體一步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本和酶標工作液加入到預(yù)先包被牛血管性血友病因子抗原(vWF-Ag)抗體的透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入顯色劑A、B液,顯色劑(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中牛血管性血友病因子抗原(vWF-Ag)濃度呈正相關(guān),450nm波長下測定OD值,根據(jù)標準品和樣品的OD值,計算樣本中牛血管性血友病因子抗原(vWF-Ag)含量。

    【試劑盒組成】

1

酶標包被板

12孔×8條

7

顯色劑A液

6mL

2

標準品:240U/L

0.6mL

8

顯色劑B液

6mL

3

20倍濃縮洗滌液

25mL

9

終止液

6mL

4

標準品稀釋液

6mL

10

說明書

1份

5

樣本稀釋液

6mL

11

封板膜

2張

6

酶標試劑

10mL

12

密封袋

1個

    備注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:240、120、60、30、15、7.5U/L

    【需要而未提供的試劑和器材】

    1、37℃恒溫箱

    標準規(guī)格酶標儀

    精密移液器及一次性吸頭

    蒸餾水

    一次性試管

    吸水紙

    【操作步驟】

    1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

    2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

    3、加標準品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);每孔再加入酶標工作液100μL;空白對照孔不加。

    4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

    5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

    6、顯色:每孔先加入顯色劑A液50μL,再加入顯色劑B液50μL,37℃避光顯色15min。

    7、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

    8、測定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。

    9、計算:根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

    【樣本要求】

    1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

    2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    3、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒。

    【注意事項】

    1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

    2、酶標包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

    3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。

    4、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。

    5、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜。

    6、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號的試劑不得混用。

    7、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

    【操作程序總結(jié)】

    準備試劑,樣品和標準品

    加入準備好的樣品、標準品和酶標工作液,37℃反應(yīng)60分鐘

    洗板5次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘

    加入終止液

    15分鐘之內(nèi)讀OD值

    計算

    【檢測范圍】

    7.5-240U/L

    【規(guī)格】

    96人份/盒

    【貯藏】

    2-8℃,避光防潮保存。

    【有效期】

    6個月

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