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微生物生長的測定

來源:上海一研生物科技有限公司   2016年01月22日 13:47  

    微生物生長是細胞物質有規(guī)律地.不可逆增加,導致細胞體積擴大的生物學過程,這是個體生長的定義。繁殖是微生物生長到一定階段,由于細胞結構的復制與重建并通過特定方式產(chǎn)生新的生命個體,即引起生命個體數(shù)量增加的生物學過程。微生物的個體生長特點是時間裉短,很快就進入繁殖階段,生長與繁殖難以分開。因此,常常以群體生長作為細菌生長的指標,除有特定的目的以外.在微生物的研究和應用中,只有群體的生長才有意義,而群體生長常常表現(xiàn)為細胞數(shù)目或物質的增加。對細胞物質的增加可以用生物量來表示。對于單細胞微生物生長進行測定時,既可取緬胞數(shù),也可選取細胞重量作為生長的指標;而對于多細胞,特別是絲狀真菌,則以菌絲生長的長度或菌絲的重量為生長指標。微生物生長的測定主要有計繁殖數(shù)和測生長量等方法。

(1)計繁殖數(shù)

①顯微直接測數(shù)法適用于單細胞的微生物類群。測定時用細菌計數(shù)器或血細胞計數(shù)板(適用于酵母、真菌孢子等)在光學顯微鏡下直接觀察細胞并進行計數(shù)。此法十分常用,但得到的數(shù)目是包括死細胞在內的總菌數(shù)??捎锰厥馊玖蠈罹旧龠M行顯微計數(shù),如細菌經(jīng)吖啶橙染色后,在紫外線顯微鏡下可觀察到細胞發(fā)出橙色熒光,而死細胞則發(fā)出綠色熒光,因此可用以區(qū)別活菌和死菌。

②平板菌落計數(shù)法 迄今zui廣泛采用的主要活菌計數(shù)方法,適用于各種好氧菌和厭氧菌,具體分為平板涂布法和傾注法。其主要操作是把稀釋后的一定量菌液通過澆注或涂布的方法,讓其內的微生物單細胞一一分散在瓊脂平板上(內),待培養(yǎng)后,每一活細胞就形成一個單菌落,即“菌落形成單位”(colony forming unit,cfu),根據(jù)皿上形成的cfu數(shù)去推算菌樣的含菌數(shù)。此法所得到的數(shù)值往往比直接法測定的數(shù)字小。另外,操作較繁瑣且要求操作者技術熟練,在混合微生物樣品中只能測定占優(yōu)勢并能在供試培養(yǎng)基上生長的類群。

(2)測生長量

①干重法直接測定生長量的較常用方法。收集單位體積培養(yǎng)液中菌體,以清水洗凈,然后在100℃左右烘干細胞或減壓干燥,稱重。由于重可知鮮重:細菌干重為鮮重的20%~25%,酵母干重為鮮重的15%~30%,絲狀真菌干重為鮮重的10%~15%。

②比濁法可使用光電比色計測定,通過測定菌懸液的光密度或透光率反映細胞的濃度.是測定懸液中細胞數(shù)的快速方法,一般選用450~650nm波段。因細胞濃度僅在一定范圍內與光密度呈直線關系,因此待測菌懸液的細胞濃度不應過低或過高.培養(yǎng)液的色調也不宜過深,顆粒性雜質的數(shù)量應盡量減少。要連續(xù)跟蹤某一培養(yǎng)物的生長動態(tài),可用帶有側臂的三角燒瓶做原位測定。

③生理指標法 以代謝作用所消耗或產(chǎn)生的物質的量表示微生物的生長量。如微生物對O2的吸收、產(chǎn)生CO2的量、發(fā)酵糖產(chǎn)酸量、測含氮量、測含碳量以及測磷、DNA、RNA、ATP、DAP(二氨基庚二酸)等,可以根據(jù)實驗目的和條件適當選用,其應用的前提是作為生長指標的那些生理活動不受生長以外的其他因素影響。

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