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大鼠幽門螺旋菌(IgG)ELISA試劑盒實驗原理

來源:上海遠慕生物科技有限公司   2016年02月22日 14:11  

    大鼠幽門螺旋菌(IgG)ELISA試劑盒注意事項:

    1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

    2、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

    3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。

    4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計算結果乘以5才是樣本實際濃度。

    5、本試劑盒定量范圍為6.25-200ng/L,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果(6.25-200ng/L范圍內(nèi),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。

    6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。

    7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。

    8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號的試劑不得混用。

    9、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

    大鼠幽門螺旋菌(IgG)ELISA試劑盒操作步驟:

    1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。

    2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

    3、加標準品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。

    4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

    5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

    6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。

    7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

    8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

    9、顯色:每孔先加入顯色劑A液50μL,再加入顯色劑B液50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯色15min。

    10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(顏色由藍色立轉黃色)。

    11、測定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。

    12、計算:根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

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