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微流控芯片上基于核酸適配體的蛋白質(zhì)檢測方法研究

來源:上海嘉鵬   2016年04月08日 10:27  

2016(第四屆)體外診斷技術(shù)峰會于3月25日在上海順利召開。此次會議邀請了國內(nèi)外眾多體外診斷方面的專家學(xué)者,以及在體外診斷領(lǐng)域取得不俗業(yè)績的企業(yè)家代表。

會議的第二天來自清華大學(xué)化學(xué)系的林金明教授做了精彩的演講。演講主要圍繞著微流控芯片上給予核酸適配體的蛋白質(zhì)檢測方法研究。

演講中林教授提到。微流控芯片技術(shù)可以繼承或基本繼承化學(xué)和生物等領(lǐng)域中所涉及的樣品制備、反應(yīng)、分離、檢測等基本操作單元,以微通道形成網(wǎng)絡(luò),貫穿整個系統(tǒng),具有便攜、低能耗、易于制作、易于掌握等優(yōu)點,易于滿足生命科學(xué)對生物樣品進行低劑量、更、高靈敏、快速分離分析的需求。利用微流控芯片夠賤一種簡單便攜的裝置用于生物標(biāo)記物的檢測,有望未來戶外即時診斷和家庭醫(yī)療提供新的方法。生物標(biāo)記物特別是蛋白質(zhì)標(biāo)志物進行快速靈敏的檢測是臨床醫(yī)療診斷、藥物治療的一個重要依據(jù)。由于微流控芯片的微型化,所需的樣品量極少(<10μL)。所以靈敏度是微流控芯片上蛋白質(zhì)分析的一個重要難點。

免疫分析的滾環(huán)放大技術(shù)(immuno-RCA)是一種基于免疫分析、高靈敏的核算放大技術(shù)。RCA可以在室溫、恒溫下進行DNA擴增,不需要特殊的一起。通過免疫反應(yīng),目標(biāo)蛋白與功能性核酸配體相結(jié)合獲得一段具有催化作用的G-四鏈體。然后,通過RCA獲得一條重復(fù)序列的G-四鏈體。G四鏈體能與血紅素自組裝,在ABTS和過氧化氫作用下,產(chǎn)生不同的顏色,可用肉眼直接觀察。更為重要的是,根據(jù)現(xiàn)行動力學(xué)模型進行的RCA反應(yīng)能夠直接進行半定量分析不需要過多的標(biāo)準(zhǔn)物。因此,RCA是一種適合在芯片上進行信號擴增的新技術(shù),能及大地提高分析的敏感性和特異性,用于微量的生物大分子和生物標(biāo)志的檢測與研究,是未來生物芯片發(fā)展和普及使用*的檢測手段。

林教授的研究以檢測凝血酶為例,將微流控芯片技術(shù)和功能性核酸適配體的免疫分析技術(shù)相結(jié)合,發(fā)展了一種快速簡單、高靈敏度、易于攜帶的裝置用于生物標(biāo)志物的分析。此方法在微流控芯片上平行的排列了多個微通道,并在通道上修飾具有特異性的核酸適配體目標(biāo)蛋白質(zhì)進行的高通量、特異性捕獲和分析,降低了基質(zhì)干擾。利用滾環(huán)擴增和G-四鏈體DNAzyme的作用,實現(xiàn)了信號的放大,提高分析的靈敏度,降低檢測限。同時,可以通過顏色的變化,可以通孤傲肉眼進行初步的判斷。

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