首先需要把透析袋夾子夾子剪成適當(dāng)長(zhǎng)度的小段,在大體積的碳酸氫鈉和1mmol/L EDTA中將其煮沸10分鐘。用蒸餾水*清洗透析袋夾子,放在 1mmol/L EDTA中將之煮沸10分鐘。冷卻后,存放于4度,必須確保它始終浸沒在溶液內(nèi)。從此時(shí)起取用透析袋夾子是必須戴手套。用前在透析袋夾子內(nèi)裝滿水然后排出,將之清洗干凈。裝完樣品后,用上浮夾子夾緊袋口,可在袋內(nèi)放一玻璃珠,以使處于懸浮狀態(tài),即可進(jìn)行透析。為了加快透析速度,除多次更換透析液外,還可使用磁力攪拌器。透析的容器要大一些,可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。
更準(zhǔn)確地說,截留分子量定義為溶質(zhì)截留率至少為90%的分子量。但鑒于溶質(zhì)的滲透性還取決于分子形狀、水合程度、離子電荷和極性,我們建議透析袋夾子截留溶質(zhì)分子量百分之50-80、且大于允許通過成分分子量100倍的數(shù)值作為所選膜的截留分子量。這些預(yù)實(shí)驗(yàn)必須包括兩種底物噬菌體,一個(gè)帶有已知的能夠被切割的底物序列,一個(gè)帶有已知的非底物序列。使用相同數(shù)量的底物分別與親和性結(jié)構(gòu)域結(jié)合,之后加入要研究的蛋白酶進(jìn)行酶切。
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