(1)吸光度太高,一方面可能偏離朗伯比爾定律,吸光度變化不再呈線性關系;另一方面會導致吸光度變化不靈敏。因此,吸光度不宜太高。如果可以,盡量控制在1以下。
(2)構成本底吸光度是樣品提取液含有在該波長產(chǎn)生強烈光吸收的其它物質,或者在測定光吸收減少速率的反應中,人為添加的底物在該波長下造成的光吸收。
(3)如果是前者造成的,那么可以通過用對照再次調零,把本底光吸收消除。
(4)如果是后者,那么只能接受?;蛘呖头?,看看能否減少底物濃度。不過,大家知道,對于酶來說,底物濃度通常要求≥10Km。
至于吸光度超過分光光度計測量范圍,通常是兩種情況,紫外應該用石英比色皿,錯用了玻璃比色皿;或者比色皿不透光一面對著光源。其它情況還包括比色皿太臟,或者提取液本身顏色太深等。
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