(1)吸光度太高,一方面可能偏離朗伯比爾定律,吸光度變化不再呈線性關(guān)系;另一方面會(huì)導(dǎo)致吸光度變化不靈敏。因此,吸光度不宜太高。如果可以,盡量控制在1以下。
(2)構(gòu)成本底吸光度是樣品提取液含有在該波長(zhǎng)產(chǎn)生強(qiáng)烈光吸收的其它物質(zhì),或者在測(cè)定光吸收減少速率的反應(yīng)中,人為添加的底物在該波長(zhǎng)下造成的光吸收。
(3)如果是前者造成的,那么可以通過(guò)用對(duì)照再次調(diào)零,把本底光吸收消除。
(4)如果是后者,那么只能接受?;蛘呖头纯茨芊駵p少底物濃度。不過(guò),大家知道,對(duì)于酶來(lái)說(shuō),底物濃度通常要求≥10Km。
至于吸光度超過(guò)分光光度計(jì)測(cè)量范圍,通常是兩種情況,紫外應(yīng)該用石英比色皿,錯(cuò)用了玻璃比色皿;或者比色皿不透光一面對(duì)著光源。其它情況還包括比色皿太臟,或者提取液本身顏色太深等。
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