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ELISA實(shí)驗(yàn)中陰性、陽性和空白對照相互的作用

來源:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司   2016年07月06日 10:47  

ELISA實(shí)驗(yàn)中,我們常常遇到導(dǎo)師跟我們講:關(guān)于試劑盒出現(xiàn)陰性、陽性和空白對照相對應(yīng)的問題,陽性對照品(positive control)和陰性對照品(negative control)是檢驗(yàn)試驗(yàn)有效性的控制品,同時也作為判斷結(jié)果的對照,因此對照品,特別是陽性對照品的基本組成應(yīng)盡量與檢測標(biāo)本的組成相一致。本章上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)探討將為大家具體推薦關(guān)于以上問題的解答。歡迎參考閱讀。

    ELISA檢測,要求嚴(yán)格按照試劑說明書要求,每次試驗(yàn)、每塊扳上都要設(shè)置以下3項(xiàng)對照和用途下面我司技術(shù)為您詳細(xì)介紹ELISA實(shí)驗(yàn)設(shè)置陰性、陽性和空白對照的作用:

    1.空白對照:僅用稀釋液代替檢測樣本、用以觀測zui終反應(yīng)的顯色“本底"、并用于酶標(biāo)儀消除、扣除“本底",即:以本底為“零"讀取陽性、陰性對照孔和樣本檢測孔的吸光值(A);或者,在計(jì)算陰性對照均值(NCx)、陽性對照均值(PCx)、樣本讀數(shù)的S/C.O.值時減去空白對照的本底吸光值。

    2.陰性對照(品):所謂陰性對照(品),應(yīng)當(dāng)是本項(xiàng)檢測試驗(yàn)中采用與待撿物(樣品、人用試劑就是人的血清等)具有同源性和同質(zhì)性,又不含有待檢物質(zhì),并能客觀比較和鑒別處理因素(血清免疫學(xué)試驗(yàn)中有特異性抗原與抗體反應(yīng))之間的差異。

    3.陽性對照(品):
    (1)陽性對照(品)的概念與要求:同陰性對照(品),只是采用“精選"的含有待檢物質(zhì)的人血清制備而成。所謂“精選",就是把收集的陽性人血清經(jīng)過數(shù)種試驗(yàn)進(jìn)行“篩試"、把含有“干擾性物質(zhì)"的血清剔除、不用,以避免出現(xiàn)“假陽性"干擾試驗(yàn)結(jié)果。
    (2)陽性對照(品)設(shè)置,也可區(qū)分為兩種類型與用途:
    一是陽性對照主要用于評價該項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果是否有效和試驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性。而所設(shè)的陽性對照的測量值不列入Cutoff值計(jì)算、但是不可不做。如HBsAg、抗—HBs、HBeAg等。

    二是陽性對照的設(shè)置,不僅用于評價試驗(yàn)結(jié)果是否有效和試驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性,而且計(jì)入Cutoff的計(jì)算。此時的Cutoff值的含義是代表該標(biāo)志物在健康(正常)人群中正常值范圍的上限。待檢樣本檢測值超過該上限(Cutoff)時表示有診斷意義。

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