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免疫技術用熒光染料

來源:青島捷世康生物科技有限公司   2016年08月03日 08:46  

免疫技術用熒光染料

 

    在流式細胞計的應用中,熒光色素是關鍵試劑,免疫熒光的檢測,對試劑的要求尤其具有特殊性。

     對熒光染料的要求1、染料必須在理想的激光光源的某一波長有強烈吸收;2、由于免疫熒光測定,信號的強度是主要限制因素,故要求染料應有較高的量子效應3、激發(fā)光和發(fā)射光之間要有較大的波長區(qū)別,以便使熒光能與激發(fā)光源所造成的背景區(qū)別開來4、便于同抗體和其他蛋白偶聯(lián),又不影響其熒光及抗體的特異性。

熒光染料  常見者見表。其中FITC已為國內免疫界通用,此外不做介紹。當前國內常用的商品化的染料類是藻膽蛋白(Ohycobili protein)是來自光合青色細菌(photosyntheric  cyanobacteria)和紅色藻類(Red algae)的自然熒光色素。其基本類型為:藻紅蛋白(Phycoerythrin,PE)、藻青蛋白(Phycocyanin)及別藻青蛋白(Allophycocyanin,APC),其分子結構基本是幾個帶有開鏈四吡咯色基因的多肽混合物,很適合標記抗體,它們有以下特點:可以在廣泛的波長下有效地激發(fā);每個分子都帶有許多產生高激發(fā)系數的發(fā)光色基團;激發(fā)光、發(fā)射光易鑒別(Stokes位移大);易溶于水,發(fā)出的熒光不受pH影響,因而不易受生物因素影響而淬滅。這類熒光色素的代表是藻紅蛋白。目前,盡管應用者較多,但其標記困難及結合物易形成素脫落,保存時間短等缺點,也影響其推廣,人們正在尋找新的熒光染料。為了測定細胞表面的多種標記,還應考慮免疫熒光染料反光源和這些顏料的相互配合的要求;1、兩種以上抗體同兩種以上色素交聯(lián),該色素可被單波長光激發(fā),并能通過特殊的發(fā)射光區(qū)別開;或用不同激發(fā)波長來激發(fā),發(fā)射光可通過光譜的差異、特殊發(fā)射光或發(fā)射時間不同來區(qū)別。2、結合抗體的色素不干擾抗體反應的特異性,或同一實驗中其他色素的特性。3、適用一步、二步、三步染色法,加適當對照組能克服試劑間的干擾。

    為了測定細胞表面的多種標記,還應考慮免疫熒光染料反光源和這些顏料的相互配合的要求;1、兩種以上抗體同兩種以上色素交聯(lián),該色素可被單波長光激發(fā),并能通過特殊的發(fā)射光區(qū)別開;或用不同激發(fā)波長來激發(fā),發(fā)射光可通過光譜的差異、特殊發(fā)射光或發(fā)射時間不同來區(qū)別。2、結合抗體的色素不干擾抗體反應的特異性,或同一實驗中其他色素的特性。3、適用一步、二步、三步染色法,加適當對照組能克服試劑間的干擾。

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