上皮細(xì)胞培養(yǎng)

1）表皮細(xì)胞培養(yǎng)

1．取材：取外科植皮或手術(shù)殘余皮膚小塊，以角化層薄者為佳，早產(chǎn)流產(chǎn)兒皮
膚更好，切成0.5～1平方厘米小塊。

2．EDTA處理：先置入0.02％EDTA中室溫置5分鐘。

3．冷消化：換入0.25％胰蛋白酶中，置4℃過(guò)夜。

4．分離：取出皮膚，用血管鉗或鑷子把表皮與層分開。

5．溫消化：取出表皮單獨(dú)處理，用剪刀剪成更小的塊后，置入新的0.25％胰蛋
白酶中，37℃再消化30～60分鐘。

6．用吸管輕輕反復(fù)吹打，使成細(xì)胞懸液。

7．培養(yǎng)液：通過(guò)80目不銹鋼紗網(wǎng)濾過(guò)后，低速離心，吸上清，直接加入Eagle
液和20％小牛血清，制成細(xì)胞懸液，接種入碟皿中，CO溫箱培養(yǎng)。2

2） 乳腺組織培養(yǎng)

直接培養(yǎng)法：（適于培養(yǎng)含纖維少的軟組織）

1．在含有少量培養(yǎng)液或Hanks液的容器中，用鋒利刀片將組織反復(fù)切割成碎塊。

2．把組織碎塊連同液體注入離心管中，再補(bǔ)加少許培養(yǎng)液，用吸管吹打片刻，
置試管架3～5分鐘。吸除上層液可排除非乳腺細(xì)胞部分。重復(fù)2～3次。

3．末次處理結(jié)束后，向沉降管中再補(bǔ)加培養(yǎng)液，用吸管稍吹打，使沉降物重懸。
不待細(xì)胞團(tuán)塊下降立即通過(guò)3～4層無(wú)菌紗布濾入另管中。

4．調(diào)整好適宜密度，接種入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

膠原酶消化法：（適于處理含纖維多的較硬組織）