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大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA試劑盒實驗使用說明書主要包括試劑準備、樣本收集與處理、實驗操作及結果計算等部分?。以下是詳細說明:
?一、試劑準備?
試劑盒組件:通常包括酶標包被板、標準品、標準品稀釋液、酶標試劑、樣品稀釋液、顯色劑A液和B液、終止液、封板膜、洗滌液等?。
試劑保存與平衡:試劑盒應保存在2-8℃或-20℃(長期不用時)。使用前,將試劑盒從冰箱中取出,在室溫下放置20-30分鐘,使試劑盒與室溫平衡?。
?二、樣本收集與處理?
樣本類型:包括血清、血漿、尿液、腦脊液、細胞固體組織等?2。
血清與血漿處理:使用不含熱原和內毒素的試管收集血液,離心分離血清和紅細胞。血漿可使用EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,離心去除顆粒?。
樣本保存:若樣本不立即使用,應分成小部分在-70℃保存,避免反復冷凍。避免使用溶血或高血脂血樣本?。
?三、實驗操作?
加樣:在待測樣品孔中加入待測樣品,每種樣品設3個平行孔。同時設立陰性對照孔和空白對照孔?。
酶標板包被:將酶標板置于4℃,包被過夜?。
洗板:使用洗滌液洗滌板孔,重復洗滌3-4次?。
加酶標試劑與顯色:加入酶標試劑,然后加入顯色劑A液和B液,進行顯色反應?。
終止與測定:加入終止液終止反應,使用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)?。
?四、結果計算?
繪制標準曲線:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,繪制標準曲線?。
樣品濃度計算:根據(jù)樣品的OD值,由標準曲線查出相應的濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。或者使用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式計算樣品濃度?1。
請注意,實驗操作時應嚴格按照說明書進行,避免污染和誤差。不同品牌和批次的試劑盒可能略有差異,請仔細閱讀具體試劑盒的說明書。
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