資料簡介
上??婆d生物科技有限公司原始創(chuàng)新,自主創(chuàng)新,揮重金購置、的儀器設(shè)備,支持研發(fā),支持服務(wù)。
目前檢測單個(gè)細(xì)胞特定細(xì)胞因子的表達(dá)手段包括:ELIspot、原位雜交、免疫細(xì)胞化學(xué)、限制性稀釋分析(limiting dilution analysis,LDA)和單細(xì)胞PCR,應(yīng)用原位雜交技術(shù)和免疫組化方法觀察細(xì)胞因子蛋白表達(dá)及mRNA表達(dá)可以識(shí)別Th1和Th2細(xì)胞,此方法可獲得較強(qiáng)的細(xì)胞內(nèi)信號,但此方法工作量大、主觀性強(qiáng),難以進(jìn)行大樣本檢測,且人肉眼識(shí)別能力有很大的局限性,而ELISPOT及單細(xì)胞PCR技術(shù),技術(shù)性強(qiáng)、勞動(dòng)強(qiáng)度大,難以進(jìn)行廣泛推廣。隨著多標(biāo)記及胞內(nèi)細(xì)胞因子標(biāo)記流式細(xì)胞技術(shù)的出現(xiàn),使對細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的研究推向了一個(gè)新的階段。下面主要對胞內(nèi)細(xì)胞因子流式細(xì)胞技術(shù)作以介紹。
早期細(xì)胞因子表達(dá)與細(xì)胞功能相關(guān)性研究是基于特定克隆">克隆細(xì)胞的激活。盡管研究應(yīng)用T淋巴細(xì)胞克隆">)與TH2(IL-4,IL-5,IL-10),但這些研究很難外推,因?yàn)門細(xì)胞克隆"g克隆證明了不同細(xì)胞因子的合成,如TH1(IL-2,IFN->克隆與體內(nèi)T細(xì)胞功能相關(guān)性還未被揭示。
快速:流式定量檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子可在一天內(nèi)完成,實(shí)驗(yàn)流程需6-8小時(shí),實(shí)際操作時(shí)間為1-2小時(shí),快速簡便;
簡便:無需組織培養(yǎng),可以全血分析,無需分離PBMCs;
靈敏度高:高度靈敏的熒光標(biāo)記與檢測系統(tǒng);
:可以在同一個(gè)細(xì)胞內(nèi)同時(shí)檢測兩種或更多種細(xì)胞因子,也可根據(jù)細(xì)胞免疫表型區(qū)分分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞的亞型,進(jìn)行多參數(shù)相關(guān)分析;
安全:減少樣本處理與生物源性污染
接近生物體的分析條件:全血檢測保留細(xì)胞及生化微環(huán)境更準(zhǔn)確反映了體內(nèi)狀況。
二、所需儀器
1、流式上樣管及細(xì)胞培養(yǎng)皿或板
2、25%CO2,37℃孵箱
3、混勻振蕩器
4、離心機(jī)
5、加樣器、Tips
6、流式細(xì)胞儀
三、常用的標(biāo)本類型和處理方法
全血:使用肝素鈉抗凝的真空采血管采血,不易采用肝素鋰、EDTA和ACD抗凝劑,血樣在8小時(shí)內(nèi)分析,超過8小時(shí)會(huì)導(dǎo)致活性的損失,一般細(xì)胞因子陽性細(xì)胞會(huì)減少5%。如不能在8小時(shí)之內(nèi)檢測,應(yīng)將真空采血管水平室溫放置。
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