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目前檢測單個細(xì)胞特定細(xì)胞因子的表達(dá)手段包括：ELIspot、原位雜交、免疫細(xì)胞化學(xué)、限制性稀釋分析（limiting dilution analysis，LDA）和單細(xì)胞PCR，應(yīng)用原位雜交技術(shù)和免疫組化方法觀察細(xì)胞因子蛋白表達(dá)及mRNA表達(dá)可以識別Th1和Th2細(xì)胞，此方法可獲得較強的細(xì)胞內(nèi)信號，但此方法工作量大、主觀性強，難以進行大樣本檢測，且人肉眼識別能力有很大的局限性，而ELISPOT及單細(xì)胞PCR技術(shù)，技術(shù)性強、勞動強度大，難以進行廣泛推廣。隨著多標(biāo)記及胞內(nèi)細(xì)胞因子標(biāo)記流式細(xì)胞技術(shù)的出現(xiàn)，使對細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的研究推向了一個新的階段。下面主要對胞內(nèi)細(xì)胞因子流式細(xì)胞技術(shù)作以介紹。

早期細(xì)胞因子表達(dá)與細(xì)胞功能相關(guān)性研究是基于特定克隆">克隆細(xì)胞的激活。盡管研究應(yīng)用T淋巴細(xì)胞克隆">）與TH2（IL－4，IL－5，IL－10），但這些研究很難外推，因為T細(xì)胞克隆"g克隆證明了不同細(xì)胞因子的合成，如TH1（IL－2，IFN－>克隆與體內(nèi)T細(xì)胞功能相關(guān)性還未被揭示。

快速：流式定量檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子可在一天內(nèi)完成，實驗流程需6-8小時，實際操作時間為1-2小時，快速簡便；

簡便：無需組織培養(yǎng)，可以全血分析，無需分離PBMCs；

靈敏度高：高度靈敏的熒光標(biāo)記與檢測系統(tǒng)；

：可以在同一個細(xì)胞內(nèi)同時檢測兩種或更多種細(xì)胞因子，也可根據(jù)細(xì)胞免疫表型區(qū)分分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞的亞型，進行多參數(shù)相關(guān)分析；

安全：減少樣本處理與生物源性污染

接近生物體的分析條件：全血檢測保留細(xì)胞及生化微環(huán)境更準(zhǔn)確反映了體內(nèi)狀況。

二、所需儀器

1、流式上樣管及細(xì)胞培養(yǎng)皿或板

2、25%CO2，37℃孵箱

3、混勻振蕩器

4、離心機

5、加樣器、Tips

6、流式細(xì)胞儀

三、常用的標(biāo)本類型和處理方法

全血：使用肝素鈉抗凝的真空采血管采血，不易采用肝素鋰、EDTA和ACD抗凝劑，血樣在8小時內(nèi)分析，超過8小時會導(dǎo)致活性的損失，一般細(xì)胞因子陽性細(xì)胞會減少5%。如不能在8小時之內(nèi)檢測，應(yīng)將真空采血管水平室溫放置。