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如何正確使用封板膜？2024/03/25: 一、準(zhǔn)備在使用封板膜前，要先清理需要封板的表面，確保表面干凈，不沾有灰塵、油污和水分。最好使用干凈的軟布或絨布擦拭表面，如果表面難以清潔，可以先用清洗劑進(jìn)行清洗。二、使用過程1、將封板膜取出，留出約10cm左右的長(zhǎng)度，貼在需要封板的表面上；2、緩緩地將封板膜按照表面的輪廓向下貼，同時(shí)慢慢剝離保護(hù)紙，將封板膜按壓在表面上；3、在封板膜的表面使用橡皮擦輕輕擦拭，將少量氣泡排出來，注意不要用力過猛，避免將氣泡擠到封板膜的下面；4、當(dāng)封板膜整體貼滿表面后，再用刮板或硬卡片將封板膜表面多余的氣泡排除。三、

B27無血清培養(yǎng)基和普通培養(yǎng)基的區(qū)別？2024/03/20: B27無血清培養(yǎng)基是一種常用于體外細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基。提供一種不含動(dòng)物血清成分的培養(yǎng)基，以避免可能存在的病原體污染和其他質(zhì)量問題。B27無血清培養(yǎng)基的配方包括多種營(yíng)養(yǎng)元素、維生素、氨基酸和生長(zhǎng)因子，可以用于支持多種類型的細(xì)胞生長(zhǎng)和分化。與普通培養(yǎng)基之間的區(qū)別：1、可以消除動(dòng)物源性物質(zhì)引起的潛在風(fēng)險(xiǎn)。在含血清培養(yǎng)基中，常常會(huì)存在病毒、細(xì)菌和真菌等微生物，它們會(huì)對(duì)細(xì)胞的健康造成威脅。使用B27無血清培養(yǎng)基可以更大程度地減少這些風(fēng)險(xiǎn)。2、還可以提高細(xì)胞培養(yǎng)的一致性。傳統(tǒng)的含血清培養(yǎng)基中，血清的來源和成分

干型透析袋的使用和注意事項(xiàng)2024/03/18: 使用方法：①把透析袋剪成適當(dāng)長(zhǎng)度(10cm左右)的小段。②用60℃去離子水中水浴30分鐘-1小時(shí)，再用去離子水膜內(nèi)沖洗3次。③使用時(shí)，一端用下沉透析袋夾子夾緊，灌滿水后，用手指適當(dāng)加壓，檢查不漏，方可裝入樣品。通常要留三分之一至一半的空間，以防透析過程中，袋外的水和緩沖液過量進(jìn)入袋內(nèi)將袋漲破。裝完樣品后，用上浮夾子夾緊袋口，可在袋內(nèi)放一玻璃珠，以使透析袋處于懸浮狀態(tài)，即可進(jìn)行透析。為了加快透析速度，除多次更換透析液外，還可使用磁力攪拌器。透析的容器要大一些，可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。注意事

細(xì)胞篩網(wǎng)的使用方法2024/03/11: 準(zhǔn)備濾器：選擇合適的細(xì)胞篩網(wǎng)，并根據(jù)需要在濾器上加上濾紙，使其更容易使用。準(zhǔn)備細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基：將細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基倒入容器中，并加入需要的藥物、酶、抗生素等。過濾細(xì)胞：將濾器輕輕地壓在溫和的細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基中，讓其均勻地經(jīng)過細(xì)胞篩網(wǎng)的孔。收集過濾的細(xì)胞：過濾后的細(xì)胞可以直接通篩網(wǎng)被收集或者用無菌的器具從容器中進(jìn)行收集。細(xì)胞培養(yǎng)：若需要培養(yǎng)篩選的細(xì)胞，則將其收集到未被污染的細(xì)胞培養(yǎng)基中，并按照培養(yǎng)基配方進(jìn)行培養(yǎng)。此外，細(xì)胞篩網(wǎng)的使用還需注意以下幾點(diǎn)：1.細(xì)胞篩網(wǎng)的類型。細(xì)胞篩網(wǎng)通常分為單層和多層兩

蛋白酶K的原理和應(yīng)用2024/03/05: 新型蛋白酶K（ProteinaseK）的基因序列來源于林伯氏白色念球菌（Tritirachiumalbumlimber）的蛋白酶K基因，經(jīng)過了基因定點(diǎn)突變和酵母細(xì)胞分泌表達(dá)、色譜純化。經(jīng)過蛋白質(zhì)工程化的新型蛋白酶K提高了比活性和純度，不含有細(xì)菌內(nèi)毒素，應(yīng)用范圍比天然蛋白酶K更廣泛。新型蛋白酶K是現(xiàn)有蛋白酶中活性最高的品種，在pH4到pH12的條件下均有活性，反應(yīng)溫度介于0～75oC之間。在常用濃度的SDS、尿素或EDTA存在時(shí)亦很穩(wěn)定。酶切割位點(diǎn)在脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，可以用于

不同類型透析袋的區(qū)別2024/02/26: 一、即用型透析袋即用型透析袋的制造過程沒有重金屬污染及硫化物，無需預(yù)處理，只需用去離子水清洗即可使用，滿足對(duì)截留分子量精確性和膜純度的應(yīng)用。1.韌性膜材料，不易破損2.雜質(zhì)含量極少，可無需預(yù)處理，只需用去離子水清洗即可使用3.孔徑標(biāo)準(zhǔn)均一4.對(duì)溶質(zhì)的吸附性小5.可選分子量范圍廣100-3000006.多種扁平寬度可選7.生物技術(shù)膜，不含硫化物及金屬雜質(zhì)二、普通干型透析袋1.PH穩(wěn)定范圍:5-92.污染物水平:硫化物3.化學(xué)兼容性:與很多鹽兼容，比如CaCl2,(NH4)2SO4；還可與分子生物學(xué)

牛血清白蛋白在實(shí)驗(yàn)中的作用2024/02/18: 牛血清白蛋白（BSA）在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用,接下來為大家介紹其中兩種作用。牛血清白蛋白測(cè)定蛋白濃度：按50：1配置BCA工作液。10ulC液（蛋白標(biāo)準(zhǔn)）+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標(biāo)準(zhǔn)液加入96孔板的第1~8標(biāo)準(zhǔn)孔中，在其他樣品孔中加入10ul待測(cè)樣品。分別加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液，室溫放置2小時(shí)。用酶標(biāo)儀測(cè)定蛋白濃度：測(cè)定A562，依標(biāo)準(zhǔn)曲線算出蛋白濃度。牛血清白蛋白SDS-PA

配置瓊脂糖凝膠的方法2024/01/29: 1.用于制備膠液的錐形瓶體積應(yīng)為膠液體積的2-4倍，緩慢向緩沖液中加入瓊脂糖，邊加邊攪拌，防止瓊脂糖聚集。記錄瓶體和溶液總重量。2.微波爐高火加熱30s，根據(jù)配制的溶液體積調(diào)整加熱時(shí)間。加熱時(shí)間與微波爐、瓶體大小和瓊脂糖濃度有關(guān)。3.搖勻瓊脂糖溶液。4.再次高火加熱30s，搖勻瓊脂糖溶液。5.將溶液再次放回微波爐，高火加熱至沸騰（大約10-35s）。接觸移動(dòng)時(shí)瓊脂糖膠液可能會(huì)劇烈沸騰，小心操作，避免燙傷。從微波爐拿出后，室溫冷卻1-2min，輕輕搖晃使液體里的氣泡溢出。6.重新放回微波爐，高火加

配置培養(yǎng)基過程中常見的問題2024/01/22: 一、培養(yǎng)基顏色不正確（1）含有酸堿指示劑的培養(yǎng)基，若顏色不正確，通常是由于pH不正確導(dǎo)致的，加熱過度、錯(cuò)誤的滅菌方式等都會(huì)導(dǎo)致此項(xiàng)問題。（2）加熱過度導(dǎo)致某些成分分解或糖焦化，如SC培養(yǎng)基(SC增菌液)加熱過度會(huì)變紅，含糖量高的培養(yǎng)基，加熱過度通常會(huì)出現(xiàn)顏色加深，呈焦糖色或棕褐色。（3）某些成分變質(zhì)，如血液久置易變黑，制成的平板顏色偏棕黑色。二、培養(yǎng)基產(chǎn)生沉淀（1）某些培養(yǎng)基原本就含有不溶性沉淀，如TTB，MC培養(yǎng)基等，配方中含有大量不溶性碳酸鈣。（2）滅菌前未充分溶解，如Fraser培養(yǎng)基中含

冰凍切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)2024/01/15: 1、冰凍切片固定冰凍切片37℃烘烤10至20分鐘，控干水分，置于4%多聚甲醛固定30min。于PBS緩沖液中晃動(dòng)洗滌3次，每次5分鐘。2、抗原修復(fù)將切片浸沒在升滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液（PH8.0）的修復(fù)盆中，置于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)，修復(fù)條件：中火8min至沸——?；?min保溫——中低火7min（整個(gè)過程需防止修復(fù)液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后，將切片置于PBS緩沖液中。然后在搖床上，晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。3、畫圈血清封閉切片稍甩干后，用組化筆在組織周圍畫圈，滴加組織自發(fā)熒光淬滅劑A

RNA提取原理與詳細(xì)步驟2024/01/08: 原理用Trizol的溶液提取，將總RNA與DNA和蛋白質(zhì)分離。Trizol是一種酸性溶液，含有硫氰酸胍(GITC)、苯酚和氯仿。GITC不可逆地使蛋白質(zhì)和RNase變性。隨后進(jìn)行離心。在酸性條件下，總RNA保留在上層水相中，而大部分DNA和蛋白質(zhì)保留在中間相或下層有機(jī)相中。然后通過用異丙醇沉淀回收總RNA。RNase酶可以通過加入吡咯碳酸二乙酯(DEPC)來滅活。步驟組織：每100毫克新鮮組織加入1毫升TRIzol試劑，使用無菌手術(shù)刀在冰上切碎，并用無菌勻漿器或其他設(shè)備勻漿。細(xì)胞：如果是細(xì)胞培養(yǎng)

蛋白酶K的作用及保存方法2024/01/02: 作用：蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用，以增強(qiáng)探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì)，提高雜交信號(hào)。但蛋白酶K濃度過高、消化時(shí)間過長(zhǎng)或孵育溫度過高時(shí)，都會(huì)對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)有一定的破壞，導(dǎo)致組織切片脫落，細(xì)胞核的消失，從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以代替蛋白酶K的作用，解決上述出現(xiàn)的問題，并能達(dá)到理想的染色效果。保存方法：保存在-20℃的冰箱里，避免反復(fù)凍融，有效保證12個(gè)月。孵育溫度為55-65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí)，理想孵育時(shí)間為2

免疫熒光實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞爬片如何使用2023/12/25: 首先是玻片的處理，普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊，先用洗衣粉洗干凈，用水沖靜烤干，然后泡酸過夜，撈酸后流水洗凈，烤干，置于器皿中高壓滅菌，然后再烤箱中大約8小時(shí)烤干備用。爬片可以在培養(yǎng)皿六孔板或24孔板中都可，我選擇在培養(yǎng)皿中爬。一為節(jié)約經(jīng)費(fèi)（培養(yǎng)皿可以重復(fù)利用）二來覺得培養(yǎng)皿口大，操作比較方便。培養(yǎng)皿消毒同上，消毒時(shí)記得消兩把鑷子具體操作是：用胰酶消化好細(xì)胞，充分吹打，使之成單細(xì)胞懸液（注意：這一點(diǎn)很重要，關(guān)系到將來爬出來片子的質(zhì)量）取出消毒的培養(yǎng)皿，可以先加少量培養(yǎng)基（以使玻片與

胎牛血清的功能有哪些？2023/12/20: 胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。胎牛血清是高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分最少。胎牛血清的功能：胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)成份，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)

胰蛋白酶如何在細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)揮作用2023/12/15: 胰蛋白酶是一種消化酶，可分解許多脊椎動(dòng)物消化系統(tǒng)中的蛋白質(zhì)。它存在于胰液中。如何在細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)揮作用質(zhì)膜上的蛋白質(zhì)負(fù)責(zé)多種功能，這些功能對(duì)于維持細(xì)胞的正常生理活動(dòng)至關(guān)重要。一些質(zhì)膜蛋白（如鈣粘蛋白家族）是粘附蛋白，可作為錨，將細(xì)胞骨架蛋白連接到細(xì)胞外基質(zhì)。這有助于細(xì)胞粘附和細(xì)胞遷移。在細(xì)胞培養(yǎng)物中，可以將胰蛋白酶添加到培養(yǎng)基中，通過消化粘附蛋白從培養(yǎng)皿表面釋放貼壁細(xì)胞。胰蛋白酶還通過消化粘附蛋白從聚集體中釋放細(xì)胞。EDTA也與胰蛋白酶一起添加到細(xì)胞培養(yǎng)物中，以螯合培養(yǎng)基中的二價(jià)離子。鈣和鎂離子可

如何使用細(xì)胞分離液2023/12/11: 細(xì)胞分離液的配置與使用：1、不同濃度分離液的制備:先用9份分離液與1份8.5％NaCl或1.5MPBS混合達(dá)到生理性滲透壓，然后用生理溶液稀釋到所需濃度。2、不連續(xù)密度梯度層的制備:先將試管壁用牛血清濕潤(rùn)，除去多余血清，這種預(yù)處理可使逐層疊加的液平穩(wěn)沿管壁流下，使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長(zhǎng)針頭注射器從高密度向低密度逐層放置，有時(shí)相鄰兩層比重相差不大時(shí)，可將液放入注射器中，小針頭斜面緊貼管壁，任其自然慢慢流下。3、裝樣：樣品體積和細(xì)胞濃度根據(jù)不同細(xì)胞而異，一般加樣體積不宜過大，細(xì)胞濃度也

緩沖液配制操作流程2023/12/04: 定義：緩沖溶液指的是由弱酸及其鹽、弱堿及其鹽組成的混合溶液，能在一定程度上抵消、減輕外加強(qiáng)酸或強(qiáng)堿對(duì)溶液酸堿度的影響，從而保持溶液的pH值相對(duì)穩(wěn)定。以常用的PBS磷酸緩沖溶液(不含鈣、鎂離子)為例，簡(jiǎn)述配制流程實(shí)驗(yàn)材料：NaClNa2HPO4KClKH2PO4Mili-Q水HCl電子天平高溫高壓蒸汽滅菌鍋巴氏吸管方形試劑瓶試劑配方：NaCl8.00g+Na2HPO41.15g+KH2PO40.20g+KCl0.20g+1LMili-Q水=1×PBS實(shí)驗(yàn)流程：根據(jù)配制需求計(jì)算需要使用的試劑量，用電

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附）原理及步驟詳解2023/11/29: 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)1.原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理，對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個(gè)部分組成：免疫識(shí)別，信號(hào)輸出和數(shù)據(jù)處理。2.步驟：免疫識(shí)別是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗體，而后利用抗體識(shí)別待測(cè)的抗原（通常是疾病的蛋白質(zhì)生物標(biāo)記物，病毒，細(xì)菌等等，從復(fù)雜待測(cè)液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根過氧化酶（HorseradishPeroxidase,HRP）、熒光或放射性

免疫熒光染色步驟和原理2023/11/22: 免疫熒光染色是一種常用的細(xì)胞和組織學(xué)研究技術(shù)，它利用特異性抗體與標(biāo)記熒光染料結(jié)合，來檢測(cè)和定位細(xì)胞中的特定蛋白質(zhì)或其他分子。以下是免疫熒光染色的步驟和原理：步驟：1.細(xì)胞或組織樣品的固定：通常使用甲醛或乙醛來固定細(xì)胞或組織，以保持其形態(tài)和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的完整性。2.抗體的孵育：將特異性抗體加入到樣品中，與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合。3.洗滌：用緩沖液洗去未結(jié)合的抗體。4.二抗的孵育：加入熒光標(biāo)記的二抗，與原抗體結(jié)合。5.洗滌：用緩沖液洗去未結(jié)合的二抗。6.熒光顯微鏡觀察：使用熒光顯微鏡觀察樣品，熒光信號(hào)可顯示目

什么是離心管，需要注意哪些事項(xiàng)？2023/11/15: 離心管(CentrifugeTube)是實(shí)驗(yàn)室中常用的一種實(shí)驗(yàn)耗材，主要用于離心實(shí)驗(yàn)。離心管按大小可分為微量離心管和普通離心管，可以承受高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的離心力，通常微量離心管離心力測(cè)試最高可達(dá)21000g；而普通離心管離心力測(cè)試最高可達(dá)12000g；將樣品中的不同成分按照密度和質(zhì)量進(jìn)行分離。按照材質(zhì)，離心管有塑料離心管，玻璃離心管幾種，有不同的體積和形狀，如0.6ml，1.5ml、2ml，15ml、50ml等。注意事項(xiàng)：1.使用離心管時(shí)，請(qǐng)確保離心管質(zhì)量良好，無破損或裂紋。2.離心管應(yīng)與離心機(jī)匹配

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