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遠(yuǎn)慕實(shí)驗(yàn)：電泳跑膠SDS-PAGE的定義2022/07/25: 聚丙烯酰胺凝膠電泳是網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有分子篩效應(yīng)，它有兩種形式，一種是非變性聚丙烯酰胺凝膠，蛋白質(zhì)在電泳中保持完整的狀態(tài)，蛋白在其中依三種因素分開：蛋白大小，形狀和電荷。而SDS-PAGE僅根據(jù)蛋白分子量亞基的不同而分離蛋白。這個技術(shù)首先是1967年由shapiro建立，他們發(fā)現(xiàn)在樣品介質(zhì)和丙烯酰胺凝膠中加入離子去污劑和強(qiáng)還原劑后，蛋白質(zhì)亞基的電泳遷移率主要取決于亞基分子量的大小，電荷因素可以忽視。SDS是陰離子去污劑，作為變性劑和助溶試劑，它能斷裂分子內(nèi)和分子間的氫鍵，使分子去折疊，破壞蛋白分子的

丙二醇應(yīng)用領(lǐng)域及特點(diǎn)詳細(xì)了解一下2022/07/25: 丙二醇(PG)主要用來生產(chǎn)涂料和不飽和聚酯樹脂(UPR),此外用作防凍劑,替代乙二醇用于防凍飛行器及在食品中作冷卻劑等。另外還有大量丙二醇用于生產(chǎn)增塑劑和液壓制動液,它還可用于非離子洗滌劑及在藥物、化妝品、動物食品、煙草工業(yè)中作為保濕劑,丙二醇還是良好的溶劑,可用于油墨和環(huán)氧樹脂等方面。丙二醇應(yīng)用領(lǐng)域及其分布很廣：用于制造不飽和聚酯樹脂(用于涂料和玻璃纖維增強(qiáng)樹脂)占27%;制造功能流體(防凍液、化冰劑、傳熱液)占20%;食品、藥品和化妝品用途占20%;液體洗滌劑用途占17%;油漆和涂料領(lǐng)域占5

1,3-丙二醇與甘油的作用區(qū)別你知道嗎2022/07/25: 一、物質(zhì)不同1、1,3-丙二醇1,3-丙二醇是一種化學(xué)物質(zhì)，分子式是C?H?O??？梢园l(fā)生氧化，酯化反應(yīng)，可以與水混溶，可以混溶于乙醇、乙/醚。在工業(yè)生產(chǎn)中作為有機(jī)溶劑被廣泛應(yīng)用。2、甘油丙三醇，能從空氣中吸收潮氣，也能吸收硫化氫、氰化氫和二氧化硫。難溶于苯、氯仿、四氯化碳、二硫化碳、石油醚和油類。丙三醇是甘油三酯分子的骨架成分。相對密度1.26362。熔點(diǎn)17.8℃。沸點(diǎn)290.0℃（分解）。折光率1.4746。閃點(diǎn)（開杯）176℃。急性毒性：LD50：31500mg/kg(大鼠經(jīng)口)。二、性

細(xì)胞株的保存方法你知道嗎2022/07/22: 1.紫外消毒30min后關(guān)閉紫外燈，開啟超凈臺正常工作狀態(tài)，用酒精消毒操作者的雙手。2.將所需的培養(yǎng)基，胰酶確保瓶身干凈后放于工作臺面內(nèi)，點(diǎn)燃酒精燈，將培養(yǎng)基和胰酶瓶口用酒精棉球擦拭后，再將瓶口對準(zhǔn)在酒精燈上消毒2-3次，旋開瓶蓋后再次分別消毒瓶口和瓶蓋，分別放于酒精燈的兩側(cè)。特別是將培養(yǎng)基瓶放于斜架上，瓶口對準(zhǔn)酒精燈，且放在距離酒精燈近的位置，瓶蓋置于酒精燈的另一側(cè)。3.將培養(yǎng)瓶瓶口在酒精燈上消毒2-3次，旋開后分別再次消毒瓶口和瓶蓋2-3次，蓋放于酒精燈右側(cè)后將培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液懸空倒進(jìn)污缸，

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)方法2022/07/22: 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）培養(yǎng)1.將15-20cm長的新生兒臍帶放入無菌的PBS溶液中儲存。（注：4℃下多貯存24小時，室溫下不超過6小時，否則廢棄）2.用一個鈍頭的針頭扎入臍帶靜脈管中，用無菌的PBS溶液沖洗3-5次，將污血沖洗干凈為止。3.用手術(shù)鉗夾緊臍帶下端，加入15ml的膠原酶（1mg/ml）室溫下消化15-20分鐘，并不時上下?lián)u動臍帶。4.消化完后，將下端手術(shù)鉗松開，消化液流入一個50ml無菌離心管中，用無菌的PBS溶液沖洗臍帶2-3次。5.將收集液離心（2000轉(zhuǎn)/分）3分鐘。6

淺談細(xì)菌細(xì)胞壁的脂多糖2022/07/22: 脂多糖是G-細(xì)菌細(xì)胞壁所*的成分，位于G-細(xì)菌細(xì)胞壁外面的一層較厚（8～10nm）的類脂多糖類物質(zhì)，由類脂A、核心多糖和O－特異側(cè)鏈3部分組成。類脂A是由2個氨基葡萄糖組成的二糖，分別與磷酸和長鏈脂肪酸相連；核心多糖是由5～10種糖，主要是己糖或己糖胺組成；O-特異側(cè)鏈（也稱O-抗原）是由3～5個單糖組成的多個重復(fù)單位聚合而成，O-抗原具有抗原特異性。LPS主要功能有：①類脂A是G-細(xì)菌致病性內(nèi)毒素的物質(zhì)基礎(chǔ)；②與磷壁酸相似，也有吸附Mg、Ca等陽離子以提高這些離子在細(xì)胞表面濃度的作用；③由于L

常見7種細(xì)菌鑒定生化反應(yīng)2022/07/22: 各種細(xì)菌所具有的酶系統(tǒng)不盡相同,對營養(yǎng)基質(zhì)的分解能力也不一樣,因而代謝產(chǎn)物或多或少地各有區(qū)別,可供鑒別細(xì)菌之用.用生化試驗(yàn)的方法檢測細(xì)菌對各種基質(zhì)的代謝作用及其代謝產(chǎn)物,從而鑒別細(xì)菌的種屬,稱之為細(xì)菌的生化反應(yīng)。(1)、糖(醇)類發(fā)酵試驗(yàn)不同的細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖(醇)的酶,因而發(fā)酵糖(醇)的能力各不相同.其產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物亦不相同,如有的產(chǎn)酸產(chǎn)氣,有的產(chǎn)酸不產(chǎn)氣.酸的產(chǎn)生可利用指示劑來判定.在配制培養(yǎng)基時預(yù)先加入溟甲酚紫［PHS.2(黃色)一6.8(紫色)],當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時,可使培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色

抗原抗體的生物活性了解一下2022/07/21: 抗原抗體的主要功能從而有效地清除侵入機(jī)體內(nèi)的微生物、寄生蟲等異物，中和它們所釋放的毒素或清除某些自身抗原，使機(jī)體保持正常平衡，但有時也會對機(jī)體造成病理性損害，如抗核抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗甲狀腺球蛋白抗體等一些自身抗體的產(chǎn)生，對人體可造成危害。(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng)；在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。抗體是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助

ELISA試驗(yàn)中的溫育有哪些講究？2022/07/21: 什么是溫育？在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后?？乖贵w反響的完結(jié)需求有必定的溫度和時刻，這一保溫進(jìn)程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當(dāng)。溫育時刻的考究：ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時機(jī)，只需最靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐漸平衡的進(jìn)程，因而需經(jīng)擴(kuò)散才干到達(dá)反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號抗

如何通過看顏色辨別胎牛血清質(zhì)量2022/07/21: 不同品牌的胎牛血清可能會出現(xiàn)好幾種不同的顏色，胎牛血清顏色的不同主要是由于里面血紅蛋白的含量，我們可以就胎牛血清的顏色對所購買的胎牛血清做一個簡單的鑒別。根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl，實(shí)際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國產(chǎn)血清的基本上是采血后馬上離心收集，所以很少會有溶血，表現(xiàn)出明亮的蠟黃色。進(jìn)口胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血，因?yàn)樘ヅＱ迥?

淺談血清污染和過濾的問題2022/07/21: 1、問：懷疑購買的Gibco胚胎干細(xì)胞專用胎牛血清（GibcoES專用胎牛血清）染菌，想用濾膜過濾一下，可否自己用0.22μm濾膜過濾？對血清性質(zhì)有多大影響？有做過的么？答：可以過濾的，血清當(dāng)出廠時都是0.22μm或0.1μm過濾除菌。想證明有沒有染菌不用過濾這么麻煩，只要放置于37℃過夜就可以了，如果有微生物污染會變渾濁的，如果還是澄清的就說明沒有問題的。實(shí)驗(yàn)室中血清很難直接過濾，一般要加到培養(yǎng)基中再過濾。我們實(shí)驗(yàn)室制備培養(yǎng)基時，都使用濾膜過濾，一般而言如果制備1-2瓶培養(yǎng)基，一個濾膜及一支3

血液細(xì)胞染色法有哪些？2022/07/20: 一、瑞氏染色瑞氏染色是血涂片最/常用、最/經(jīng)典的染色方法，對細(xì)胞質(zhì)和顆粒染色效果好。1．染液組成：堿性亞甲藍(lán)、酸性伊紅、甲醇（作為溶劑及固定細(xì)胞形態(tài)）。2．原理：物理吸附和化學(xué)親和作用。3．染色效果：最適pH為6.4～6.8。若緩沖液偏酸，則紅細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞偏紅，細(xì)胞核呈淡藍(lán)色或不著色。若緩沖液偏堿，細(xì)胞染色染成灰藍(lán)色，顆粒深暗；嗜酸性粒細(xì)胞可染成暗褐色，甚至棕黑色；中性顆粒偏粗，染成紫黑色。4．注意事項(xiàng)：①在距玻片另一端2cm處結(jié)束涂抹為宜；②血涂片上有染料顆粒沉積，可滴加甲醇，然后立即用

抗酸染色法的步驟和染色配制2022/07/20: 一、抗酸染色一般步驟1、初染用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石/炭酸復(fù)紅2-3滴，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時離開，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，加熱3-5分鐘，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。2、脫色3%鹽酸酒精脫色30秒~1分鐘；用水沖洗。3、復(fù)染用堿性美蘭溶液復(fù)染1分鐘，水洗，用吸水紙吸干后用油鏡觀察。二、抗酸染色的染液配制1、石/炭酸復(fù)紅堿性復(fù)紅酒精飽和溶液10mL5%石/炭酸90mL2、3%鹽酸酒精濃鹽酸3mL95%酒精97mL3、呂氏美蘭液美蘭酒精飽和液30mL氫氧/化鉀（1

革蘭染色影響因素有哪些？2022/07/20: 革蘭染色影響因素1操作因素1.1涂片太厚在涂片時細(xì)菌挑的太多，沒法分開，在脫色時就不能將第一步染上的結(jié)晶紫的顏色脫去，可能會使革蘭陰性菌也出現(xiàn)紫色，誤認(rèn)為革蘭陽性菌。1.2脫色時間陽性菌透性小，不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色；但這是在固定的時間條件下的結(jié)果，如果延長脫色時間，也會使脫色劑滲透進(jìn)陽性菌的細(xì)胞壁中，使染上的結(jié)晶紫脫去顏色，最后染上復(fù)紅的顏色，變成革蘭陰性菌。而脫色時間太短的話又會使陰性菌染上的結(jié)晶紫不能*脫色，出現(xiàn)紫色，誤認(rèn)為革蘭陽性菌。1.3固定方法固定不僅能殺死細(xì)菌，改變細(xì)菌對

Western Blot實(shí)驗(yàn)試劑的準(zhǔn)備工作2022/07/20: 1.30%儲備膠溶液：丙烯酰胺（Acr）29.0g亞甲雙丙烯酰胺（Bis）1.0g混勻后ddH2O，37℃溶解，定容至100ml，棕色瓶存于室溫。2.4×分離膠緩沖液（1mol/LTris-HClPH8.8）Tris18.17g加ddH2O溶解，濃鹽酸調(diào)PH8.8，定容至100ml。3.4×濃縮膠緩沖液（0.5mol/LTris-HClPH6.8）Tris12.1g加ddH2O溶解，濃鹽酸調(diào)PH6.8，定容至100ml。4.10%SDS：電泳級SDS10.0g加ddH2O，68℃助溶，濃鹽酸調(diào)P

淺談磷酸化和非磷酸化的抗體區(qū)別2022/07/19: 1.磷酸化抗體的檢測的是出于活性狀態(tài)（磷酸化）的蛋白。2.磷酸化抗體只針對磷酸化位點(diǎn)設(shè)計(jì)，是一種位點(diǎn)特異性的多抗，這到有些單抗的特性。3.普通抗體的合成（多抗）：原核表達(dá)蛋白-〉純化-〉免疫動物-〉收獲抗體。4.磷酸化抗體合成：人工合成含磷酸化位點(diǎn)的多肽-〉人工體外磷酸化-〉鏈接半抗原-〉免疫動物-〉收獲抗體。5.磷酸化的蛋白很大部分是轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子。因此使用磷酸化抗體和普通抗體。檢測同一個蛋白，原位檢測可能具有不同的細(xì)胞定位。轉(zhuǎn)錄因子磷酸化后由細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核。6.一般而言，磷酸化蛋白的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

蛋白A、蛋白G與蛋白L之間的差異2022/07/19: 蛋白A(ProteinA)是金黃色葡萄球菌的一個株系的細(xì)胞壁蛋白，它通過Fc區(qū)與哺乳動物的IgG結(jié)合，遠(yuǎn)慕生物提供的ProteinA，42kDa，含有四個IgFc結(jié)合位點(diǎn)，其中2個是有活性的，而用于純化抗體的，一般是重組的proteinA，含有4個IgFc區(qū)域結(jié)合位點(diǎn)。蛋白A作為親和配基被偶聯(lián)到瓊脂糖基質(zhì)上即蛋白A瓊脂糖（proteinAagarose），可以特異性的和樣品中的抗體分子結(jié)合，而使其他雜蛋白不結(jié)合，具有*的選擇性。1個蛋白A分子至少可以結(jié)合2個IgG。遠(yuǎn)慕生物提供的天然蛋白A和重組

血漿蛋白的主要功能了解一下2022/07/19: 1、營養(yǎng)功能每個成人3L左右的血漿中約含有200g蛋白質(zhì)，它們起著營養(yǎng)貯備的功能。雖然消化道一般不吸收蛋白質(zhì)，吸收的是氨基酸，但是，體內(nèi)的某些細(xì)胞，特別是單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)，吞飲完整的血漿蛋白，然后由細(xì)胞內(nèi)的酶類將吞入細(xì)胞的蛋白質(zhì)分解為氨基酸。這樣生成的氨基酸擴(kuò)散進(jìn)入血液，隨時可供其它細(xì)胞合成新的蛋白質(zhì)之用。2、運(yùn)輸功能蛋白質(zhì)巨大的表面上分布有眾多的親脂性結(jié)合位點(diǎn)，它們可以與脂容性物質(zhì)結(jié)合，使之成為水溶性，便于運(yùn)輸；血漿蛋白還可以與血液中分子較小的物質(zhì)（如激素、各種正離子）可逆性的結(jié)合，即可防止它

抗體和重組蛋白的使用及保存方法2022/07/19: 無論是保存還是運(yùn)輸，請避免反復(fù)凍融。反復(fù)凍融，冰晶會破壞抗體和重組蛋白的空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致蛋白變性形成多聚體和重組蛋白構(gòu)象改變，從而降低抗體的結(jié)合能力，也加快了抗體球蛋白和重組蛋白的降解速度?？贵w和重組蛋白保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體和重組蛋白的活性使用效果，如果保存得當(dāng)，抗體和重組蛋白活性大部分都可以維持?jǐn)?shù)年。1.收到遠(yuǎn)慕生物抗體和重組蛋白后的操作收到抗體和重組蛋白后（大部分抗體和重組蛋白是溶液態(tài)），請務(wù)必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，再打開管蓋進(jìn)行分裝、溶解和保存（如果抗體和重組蛋白體積

關(guān)于多肽純化的一些問題解答2022/07/18: 1.多肽含量與多肽純度有什么區(qū)別?一條多肽產(chǎn)品中除了多肽本身還包括生產(chǎn)過程中帶入的水份及有機(jī)鹽分等雜質(zhì)，多肽純度僅指多肽本身所含肽產(chǎn)品的含量及雜質(zhì)的含量，不包括水份等雜質(zhì);而多肽含量則是指目標(biāo)多肽在產(chǎn)品中的凈含量，一般以N元素分析或氨基酸分子的方法來檢測;因此一條多肽即使純度達(dá)到99%，因?yàn)楫a(chǎn)品中還包含水份及有機(jī)鹽分等，它的含量可能也只有70-80%。2如何溶解多肽?多肽樣品在上制備柱前為什么需要進(jìn)行前處理?有哪些前處理的方法?多數(shù)多肽都可以用超純水溶解，對于一些難溶的多肽，先要分析其氨基酸序列

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