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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)使用中的常見問題2022/08/01
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)使用中的常見問題標(biāo)準(zhǔn)樣品(RM)是一種或多種特性值已經(jīng)很好地被確定的足夠均勻的材料或物質(zhì),有證標(biāo)準(zhǔn)樣品(CRM)是附有證書的標(biāo)準(zhǔn)樣品,其一種或多種特性值用建立了溯源性的程序確定,使之可溯源到準(zhǔn)確實(shí)現(xiàn)用于表示該特性值的計量單位,而且每個標(biāo)準(zhǔn)值都附有給定置信水平的不確定度。在化學(xué)分析實(shí)驗室中標(biāo)準(zhǔn)樣品被廣泛用于校準(zhǔn)儀器、評價測試方法或為材料賦值,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的正確使用和規(guī)范管理對保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性、溯源性有重要意義。1.有證書(certificate)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)就是有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(CRM)嗎?回答
遠(yuǎn)慕分享:96孔板接種細(xì)胞步驟2022/07/29
為了做實(shí)驗,細(xì)胞鋪勻是常見的一種。然而,有許多人不是很成功,分布也不均勻:要么中間密集,周圍稀疏,要么周圍密集,中間禿頂。以下是利用96孔板把細(xì)胞鋪勻,希望對大家有用!方法/步驟1、通常,在96孔板的每個孔中加入100微升細(xì)胞懸浮液。從底部附近的井的左側(cè)添加細(xì)胞懸浮液。加入一半平板后,混合細(xì)胞懸液,不要再加入,繼續(xù)加入剩余的一半平板。添加完所有板后,蓋上板,用左手輕輕握住板的左側(cè),用右手輕輕輕敲板的右邊緣,注意抓力(我通常輕敲三次)。如果它太強(qiáng)或太多次,細(xì)胞就會被濃縮和堆積。順時針旋轉(zhuǎn)盤子(逆時
淺談掃描電鏡的樣品制備方法2022/07/29
掃描電子顯微鏡樣品制備比透射電鏡樣品制備簡單,不需要包埋和切片。掃描電子顯微鏡樣品的制備,必須滿足以下要求:①保持完好的組織和細(xì)胞形態(tài);③充分暴露要觀察的部位;③良好的導(dǎo)電性和較高的二次電子產(chǎn)額;④保持充分干燥的狀態(tài)。某些含水量低且不易變形的生物材料,可以不經(jīng)固定和干燥而在較低加速電壓下直接觀察,如動物毛發(fā)、昆蟲、植物種子、花粉等,但圖象質(zhì)量差,而且觀察和拍攝照片時須盡可能迅速。對大多數(shù)的生物材料,則應(yīng)首先采用化學(xué)或物理方法固定、脫水和干燥,然后噴鍍碳與金屬以提高材料的導(dǎo)電性和二次電子產(chǎn)額?;瘜W(xué)
遠(yuǎn)慕教你快速了解制備型液相色譜2022/07/29
1)低壓液相色譜;(2)中壓液相色譜;(3)高壓液相色譜;(4)快速色譜。低壓、中壓與高壓液相色譜的壓力范圍之間會存在一定交疊,沒有統(tǒng)一、明確的標(biāo)準(zhǔn)。1.快速色譜柱壓通常為2bar(或30psi)左右,對于那些容易分離的簡單混合物,由于快速色譜具有操作簡便、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn),常常是實(shí)驗室的。但快速色譜不同于一般的層析分離,這種分離沒有壓力,而快速分離通常使用瓶裝氮?dú)饧訅?,使流動相具有一定的流速,從而縮短了分離時間。快速色譜使用的柱子一般是玻璃柱,柱直徑為3~10cm.長度為7~15cm??焖偕V中使用
血涂片制備注意事項一覽2022/07/29
血涂片的制備步驟:(1)采血靜脈采血后,使用玻璃棒、毛細(xì)管、注射針頭等在距載玻片一端1cm處加1滴抗凝血。(2)推片左手平執(zhí)載玻片,或放在類似桌子等平坦地方,右手持推片從前方接近血滴,使血液沿推片邊緣展開成適當(dāng)?shù)膶挾?,立即將推片與載玻片呈30~45°角,輕壓推片邊緣將血液推制成厚薄適宜的血涂片,血涂片應(yīng)呈舌狀,頭、體、尾清晰可見。(3)干燥將推好的血涂片在空氣中晃動,使其迅速干燥。天氣寒冷或潮濕時,應(yīng)于37℃溫箱中保溫促干,以免細(xì)胞變形縮小。(4)標(biāo)記在載玻片的一端用記號筆編號。(5)染色用特種
幾種蛋白表達(dá)系統(tǒng)優(yōu)缺點(diǎn)分析2022/07/28
蛋白表達(dá)是指用模式生物如細(xì)菌、酵母、動物細(xì)胞或者植物細(xì)胞表達(dá)外源基因蛋白的一種分子生物學(xué)技術(shù)。蛋白表達(dá)系統(tǒng)是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系,通過這個體系可以實(shí)現(xiàn)外源基因在宿主中表達(dá)的目的。1、宿主。表達(dá)蛋白的生物體。可以為細(xì)菌、酵母、植物細(xì)胞、動物細(xì)胞等。由于各種生物的特性不同,適合表達(dá)蛋白的種類也不相同。2、載體。載體的種類與宿主相匹配。根據(jù)宿主不同,分為原核(細(xì)菌)表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、植物表達(dá)載體、哺乳動物表達(dá)載體、昆蟲表達(dá)載體等。載體中含有外源基因片段。通過載體介導(dǎo),外源
RNA提取的常見問題分析2022/07/28
RNA的提?。簻?zhǔn)備試劑:lu仿,yi丙醇,75℅乙醇,無RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC處理過的水配制)操作步驟:1.勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1mlTRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的
糖原的合成與分解途徑有哪些?2022/07/28
糖原是由多個葡萄糖組成的帶分枝的大分子多糖,分子量一般在106-107道爾頓,可高達(dá)108道爾頓,是體內(nèi)糖的貯存形式,分子中葡萄糖主要以α-1,4-糖苷鍵相連形成直鏈,其中部分以α-1,6-糖苷鍵相連構(gòu)成枝鏈,糖原主要貯存在肌肉和肝臟中,肌肉中糖原約占肌肉總重量的1-2%約為400克,肝臟中糖原占總量6-8%約為100克。肌糖原分解為肌肉自身收縮供給能量,肝糖原分解主要維持血糖濃度。糖原的合成由葡萄糖(包括少量果糖和半乳糖)合成糖原的過程稱為糖原合成,反應(yīng)在細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行,需要消耗ATP和UTP,
蛋白磷酸化檢測需要注意的事項2022/07/28
1、樣本準(zhǔn)備過程中防止蛋白質(zhì)降解和保留翻譯后修飾樣本準(zhǔn)備過程中,細(xì)胞會釋放蛋白酶和/或去磷酸化酶,為了減少這些酶的活性,處理樣本的過程應(yīng)在冰上進(jìn)行,并預(yù)先冷卻所有緩沖液,并且建議用含蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液。2、磷酸化特異性抗體的選擇選擇磷酸化特異性抗體時,選擇所要檢測位點(diǎn)的磷酸化抗體至關(guān)重要。磷酸化都會使蛋白質(zhì)的分子量增加80Da,檢查抗體是否檢測到磷酸化靶蛋白的分子量正確的條帶也很重要。3、誘導(dǎo)磷酸化課題設(shè)計可能需要在收獲前刺激細(xì)胞,以確保蛋白質(zhì)被磷酸化。例如,在特定細(xì)胞信號傳導(dǎo)途徑
如何查看抗體是磷酸化還是非磷酸化2022/07/28
什么是磷酸化磷酸化是將磷酸基團(tuán)加在中間代謝產(chǎn)物上或加在蛋白質(zhì)(protein)上的過程。其中除去磷酸基團(tuán)的酶稱為磷酸酶。蛋白質(zhì)磷酸化可發(fā)生在許多種類的氨基酸(蛋白質(zhì)的主要單位)上,其中以絲氨/酸為多,接著是蘇氨/酸。除了蛋白質(zhì)以外,部分核苷酸,如三磷酸腺苷(ATP)或三磷酸鳥苷(GTP)的形成,也是經(jīng)由二磷酸腺苷和二磷酸鳥苷的磷酸化而來,此過程稱為氧化磷酸化。另外在許多糖類的生化反應(yīng)中(如糖解作用),也有一些步驟存在氧化磷酸化作用。信號傳導(dǎo)中的作用:(1)細(xì)胞內(nèi)的信號蛋白主要分為兩大類:一類在蛋
胰蛋白酶在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用一覽2022/07/27
胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關(guān),在pH為8.0、溫度為37℃時,胰酶溶液的作用能力最/強(qiáng)。使用胰酶時,應(yīng)把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。終止消化時,可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細(xì)胞的作用。1.稱取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液濃度為0
遠(yuǎn)慕分享生物實(shí)驗中常用電泳方法2022/07/27
一、紙電泳指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是最早使用的區(qū)帶電泳。將濾紙條水平地架設(shè)在兩個裝有緩沖溶液的容器之間,樣品點(diǎn)于濾紙中央。當(dāng)濾紙條被緩沖液潤濕后,再蓋上絕緣密封罩,即可由電泳電源輸入直流電壓(100V~1000V)進(jìn)行電泳。二、醋酸纖維素薄膜電泳電泳時經(jīng)過膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點(diǎn)是分離速度快、電泳時間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測。三、凝膠電泳由區(qū)帶電泳中派生出的一種用凝膠物質(zhì)作支持物進(jìn)行電泳的方式。凝膠電泳
影響電泳結(jié)果(泳動度)的五大原因2022/07/27
在使用電泳儀做實(shí)驗的時候,可能實(shí)驗的結(jié)果會受到影響。不同的帶電顆粒在同一電場中泳動的速度不同。常用泳動度(或遷移率)來表示。泳動度是指帶電顆粒在單位電場強(qiáng)度下泳的速度。遠(yuǎn)慕生物搜集整理了幾種影響泳動度的主要因素:1、首先決定于帶顆粒的性質(zhì),即顆粒所帶凈電荷的數(shù)量,大小及形狀。一般說來,顆粒帶凈電荷多,直徑小而接近于球形,則在電場中泳動速度快,反之則慢。泳動度還與分子的形狀,介質(zhì)粘度,顆粒所帶電荷有關(guān),泳動度與顆表面電荷成正比,與介質(zhì)粘度及顆粒半徑反比。帶電荷的高分子在電解質(zhì)溶液中把一些帶有相反電
觀察載玻片時應(yīng)注意的問題2022/07/27
1)觀察染色的干玻片時經(jīng)常遇到的問題大多是因?qū)η捌诘娜旧粔蚣?xì)心所造成的。操作時應(yīng)使用適當(dāng)濃度的細(xì)菌懸液,在載玻片上涂一層薄的均勻的細(xì)菌涂壇。如果涂層太厚或密度分布不均勻,很難觀察和得出結(jié)果。革蘭氏染色的脫色和復(fù)染操作少驟也要特別小心,(2)如果目鏡前端較臟,會使影像的清晰度和對比度受到影響,好像是透過一層薄物觀察細(xì)菌。這多是由于使用油鏡后沒及時將油擦下凈,鏡油逐漸在鏡頭表面硬化造成的。這時需要用鏡頭紙沾上二甲苯將其除去。但要注意不能經(jīng)常使用二甲苯,否則會降低鏡頭密封膠的作用。鏡油如果長期不擦,
各種實(shí)驗室溫度的控制要求2022/07/26
常見實(shí)驗室溫濕度控制要求,你都清楚嗎?跟著我們一起看下去吧!01、實(shí)驗室溫度控制知識在實(shí)驗室的監(jiān)控項目中,不同實(shí)驗室對溫濕度都有要求,而大部分實(shí)驗都是在明確的溫濕度環(huán)境中展開,實(shí)驗室環(huán)境條件直接影響著各種實(shí)驗或檢測的結(jié)果,每項實(shí)驗的進(jìn)行都需要精確可靠的監(jiān)測儀器來提供準(zhǔn)確的環(huán)境參數(shù)數(shù)據(jù)。環(huán)境條件溫濕度的控制方面考慮的要素就是保證實(shí)驗操作的環(huán)境溫濕度是能夠滿足實(shí)驗程序各個過程的需要。我們主要從以下幾個方面來制定實(shí)驗室環(huán)境溫濕度控制范圍首先,識別各項工作對環(huán)境溫濕度的要求。主要識別儀器的需要、試劑的需
你家的實(shí)驗室這些都配備齊全嗎?2022/07/26
微生物學(xué)實(shí)驗室是食品檢測方面的一個基本實(shí)驗室,對于一個完備的微生物學(xué)實(shí)驗室,我們需要配置哪些儀器呢?1、超凈工作臺微生物的培養(yǎng)都是在特定培養(yǎng)基中進(jìn)行無菌培養(yǎng),那么無菌培養(yǎng)必然需要超凈工作臺提供一個無菌的工作環(huán)境。2、培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱有多種類型,它的作用在于為微生物的生長提供一個適宜的環(huán)境。生化培養(yǎng)箱只能控制溫度,可作為一般細(xì)菌的平板培養(yǎng);霉菌培養(yǎng)箱可以控制溫度和濕度,可作為霉菌的培養(yǎng);CO2培養(yǎng)箱適用于厭氧微生物的培養(yǎng)。3、天平天平用于精確稱量各類試劑。實(shí)驗室常用的是電子天平,電子天平按照精度不同有
細(xì)菌培養(yǎng)基的組成成分了解一下2022/07/26
培養(yǎng)基的組成成分包括三大類:營養(yǎng)物質(zhì)、凝固物質(zhì)、抑制劑和指示劑。(一)營養(yǎng)物質(zhì)盡管不同的細(xì)菌對營養(yǎng)的要求不同,但細(xì)菌需要的營養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)含有水、氮源、碳源、無機(jī)鹽類和生長因子等,常用的營養(yǎng)物質(zhì)如下:1.蛋白胨:蛋白胨是制備培養(yǎng)基時最/常用的成分之一,提供細(xì)菌生長繁殖所需要的氮源。是動物或植物蛋白質(zhì)經(jīng)酶或酸堿分解而成。植物胨和動物胨各有優(yōu)點(diǎn),配制培養(yǎng)基常將兩者按一定比例混合使用,提高培養(yǎng)基的營養(yǎng)價值。蛋白胨易溶于水,遇酸不沉淀,不因受高溫而凝固,并為兩性電解質(zhì)有緩沖作用。但吸水性強(qiáng),應(yīng)注意干燥密封保存
血清中的沉淀物對細(xì)胞培養(yǎng)有影響嗎2022/07/26
(1)細(xì)胞生長,經(jīng)驗表明沉淀物不會影響細(xì)胞培養(yǎng)。(2)過濾,如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物,血清將很難過濾。一般說來,因為在血清生產(chǎn)時最后已經(jīng)經(jīng)過100納米或者40納米的過濾處理,并且經(jīng)過了嚴(yán)格的無菌檢測,因此??寺〔煌扑]再過濾用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清。在實(shí)驗室中沒有必要再過濾處理血清,在大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)中往往將血清直接加到培養(yǎng)基中一起過濾。(3)污染,磷酸鈣往往被誤認(rèn)為微生物污染而引起爭端。研究者可能會在血清中觀察到一些絮狀的沉淀,因此就會比較警覺的去做無菌試驗,將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)幾天,結(jié)果可能會觀
蛋白質(zhì)技術(shù):血清蛋白瓊脂糖凝膠電泳2022/07/26
【原理】瓊脂糖(agarose)是經(jīng)過挑選,以質(zhì)地較純的瓊脂(agar)作為原料而制成的。瓊脂在化學(xué)上是由瓊脂糖和瓊脂膠組成的復(fù)合物。瓊脂膠是一含有硫酸根和羥基的多糖,它具有離子交換性質(zhì),這種性質(zhì)會給電泳及凝膠過濾以的影響。瓊脂糖是直鏈多糖,它由D-半乳糖和3,6-脫水-L-半乳糖的殘基交替排列組成。瓊脂糖主要通過氫鍵而形成凝膠。電泳時因凝膠含水量大(98-99%),近似自由電泳,因為固體支持物的影響少,故電泳速度快,區(qū)帶整齊。而且由于瓊脂糖不含帶電荷的基團(tuán),電滲影響很少,是一種較好的電泳材料,
細(xì)菌保存總結(jié):細(xì)菌,培養(yǎng)物,甘油,瓊脂平板2022/07/25
1.細(xì)菌保存于穿刺培養(yǎng)物中:一般細(xì)菌保存于穿刺培養(yǎng)物可以維持兩年。具體方法如下:用滅菌接種針挑取分散良好的單菌落,針緩慢穿過瓊脂到達(dá)瓶底,連續(xù)幾次,蓋上瓶蓋擰緊,做好標(biāo)記。室溫下存放于暗處。(最好一點(diǎn)可以將瓶蓋放松,在適當(dāng)溫度下培養(yǎng)過夜,再擰緊瓶蓋并加封Parafilm膜,室溫或最好在4度避光保存)。2.細(xì)菌保存于含有甘油的培養(yǎng)物中:(1)在液體培養(yǎng)基中生長的細(xì)菌培養(yǎng)物:取0.85ml細(xì)菌培養(yǎng)物,加入0.15ml高壓滅菌甘油,振蕩培養(yǎng)物使甘油分布均勻,然后轉(zhuǎn)移到標(biāo)記好的保存管內(nèi),密封,在乙醇-干
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