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上海遠慕生物科技有限公司
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1%瓊脂糖膠配制操作步驟2023/11/02
1%瓊脂糖膠配制步驟1、制備1%瓊脂糖凝膠(大膠用70ml,小膠用50ml):稱取0.7g(0.5g)瓊脂糖置于錐形瓶中,加入70ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小燒杯.微波爐加熱煮沸3次至瓊脂糖全部融化,搖勻,即成1.0%瓊脂糖凝膠液。2、膠板制備:取電泳槽內(nèi)的有機玻璃內(nèi)槽(制膠槽)洗干凈,晾干,放入制膠玻璃板.取透明膠帶將玻璃板與內(nèi)槽兩端邊緣封好,形成模子.將內(nèi)槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.將冷卻到65℃左右的瓊脂糖凝膠液混勻小心地倒入內(nèi)槽玻璃板上,使膠液緩慢展開,直到整個玻璃板
多克隆抗體抗原的制備步驟2023/11/02
多克隆抗體的制備一般包括以下幾個步驟:1、制備抗原。2、選擇實驗動物。3、動物免疫。4、試取血進行測試,看看是否成功免疫。5、如果成功免疫,殺死實驗動物,采集全部血清。6、純化出抗體。7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。(一)抗原制備Ig是免疫球蛋白,對異種動物而言,是良好的抗原物質(zhì)??梢源碳ぎ惙N動物產(chǎn)生抗Ig血清,經(jīng)適當提取后,產(chǎn)生抗Ig抗體,又叫第二抗體或抗抗體。在多數(shù)的間接標記反應(yīng)中,均需制備抗Ig抗體。(二)材料與試劑1.提取的動物Ig2.弗氏wan全佐劑和弗氏不wan全佐劑3.青霉素和鏈
革蘭氏染色與細菌抗酸染色技術(shù)操作技巧分享2023/11/01
蘭氏染色和抗酸染色都屬于細菌形態(tài)學(xué)檢查法,提到革蘭氏染色大家肯定都非常熟悉,但是說到抗酸染色你不一定了解。今天我們進入細菌的世界,聊一聊細菌界的這兩大染色法:革蘭氏染色(Gramstain)用途:由丹麥病理學(xué)家ChristainGram于1884年創(chuàng)立,直到現(xiàn)今,革蘭氏染色法仍是細菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法。通過革蘭氏染色,可將細菌鑒別為革蘭陽性菌(G+)和革蘭陰性菌(G-)兩大類。原理:細菌經(jīng)龍膽紫初染和碘液媒染后,在細胞壁內(nèi)形成了不溶于水的龍膽紫與碘的復(fù)合物,革蘭氏陽性菌(G+)由于其細
麗春紅染色液的配制與使用2023/11/01
麗春紅(PonceauS)也稱猩紅,可以用于PVDF膜、硝酸纖維素膜(nitrocellulosemembrane)和醋酸纖維素膜(celluloseacetatemembrane)上的蛋白的檢測。麗春紅帶負電荷,可以與帶正電荷的氨基酸殘基結(jié)合,同時麗春紅也可以與蛋白的非極性區(qū)相結(jié)合,從而形成紅色的條帶。麗春紅染色的靈敏度不及考馬斯亮藍染色。麗春紅對蛋白的染色是可逆的,染色后可以用蒸餾水,PBS或其它適當溶液洗去。因此,蛋白質(zhì)N端測序時將SDS-PAGE膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜,用麗春紅染色后
關(guān)于微量分析對試劑的要求標準2023/10/31
微量分析是化學(xué)分析方法的一種,用于測定微量物質(zhì)的方法.被測物質(zhì)的許可量僅約為常量的百分之一。重量約為1~15毫克,體積約為0.01~2毫升。分為微量定性分析和微量定量分析,采用點滴反應(yīng)和顯微結(jié)晶反應(yīng).試劑用量少。但應(yīng)有高度靈敏性,儀器小巧,構(gòu)造特殊。操作復(fù)雜,技術(shù)要求較高。微量分析適用于極少量物質(zhì)的分析,該方法已經(jīng)應(yīng)用了許多年了—比如,馬爾施的砷檢驗法和奈斯勒的氨檢驗法—而作為一種標準分析操作法的微量分析則是20世紀發(fā)展起來的。它主要是奧地利格拉茨大學(xué)的普列格爾和埃米希兩人工作的結(jié)果。定量微量分
斐林試劑和班氏試劑區(qū)別分析2023/10/31
斐林試劑和班氏試劑的使用方法及原理不盡相同。斐林試劑和班氏試劑都是檢驗還原性糖的試劑,二者的使用方法及原理、成分也有區(qū)別,下面就從這幾種試劑的使用原理、成分及使用方法等方面做一簡單總結(jié)。(1)班氏試劑常用于尿糖的鑒定,其配方與斐林試劑不一樣,其配方為:①400mL水中加85g檸檬酸鈉和50g無水碳酸鈉;②50mL加熱的水中加入8.5g無水硫酸銅。制成溶液;③把CuSO4溶液倒入檸檬酸鈉溶液中,邊加邊攪,如產(chǎn)生沉淀可濾去。(2)其反應(yīng)原理與斐林試劑略有差別。利用斐林試劑鑒定時,斐林試劑甲和斐林試劑
對照品的保存與使用方法2023/10/30
對照品系指用于鑒別、檢查、含量測定的標準物質(zhì),包括雜質(zhì)對照品,不包括色譜用的內(nèi)標物質(zhì)。在藥品檢驗工作中我們常會用到一種用來檢查藥品質(zhì)量的特殊參照物——藥品標準物質(zhì)(對照品)。它在藥品檢驗中具有十分重要的地位。隨著儀器分析的廣泛使用,必將越來越多地使用藥品標準物質(zhì)。下面遠慕生物就來介紹一下如何對對照品進行保存和使用:(1)對照品應(yīng)按說明書規(guī)定的條件妥善保存,一般置干燥陰涼處保存,某些對照品如維生素E等需避光低溫保存。要注意對照品的使用期限,過期、變質(zhì)的對照品不宜再使用。開瓶后建議短期內(nèi)用完,避免開
標準品與對照品怎么區(qū)分?2023/10/30
對照品與標準品區(qū)分對照品與標準品是2個不同的概念,中國藥典凡例中已有明確的定義:對照品系指用于鑒別、檢查、含量測定和校正檢定儀器性能的標準物質(zhì),而標準品系指用于生物檢定、抗生素或生物藥品中含量或效價測定的標準物質(zhì),以效價單位(U)表示。文獻中常將2種概念混淆,認為對照品就是標準品,是1種物質(zhì)2種提法而已,造成錯誤的原因,可能是有的藥品既有對照品,又有標準品。例如當用微生物法測定頭孢克羅效價時,用頭孢克羅標準品,用高效液相色譜儀HPLC或紫外分光光度計UV法測定時,則用對照品;非那西丁當用作熔點校
常用蛋白質(zhì)染色法原理及優(yōu)缺點2023/10/27
凝膠電泳是研究蛋白質(zhì)性質(zhì)的一種相對簡單、快速和高靈敏度的工具。它是分析化學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)的主要工具。通過電泳分離蛋白質(zhì)是基于這樣一個事實,即帶電分子將在施加電場時通過基質(zhì)遷移。蛋白質(zhì)電泳分離的基質(zhì)是聚丙烯酰胺。用于形成聚丙烯酰胺的化學(xué)試劑是單體丙烯酰胺和N,N'-雙丙烯酰胺(雙-丙烯酰胺)。聚合丙烯酰胺和雙丙烯酰的方法是使用TEMED(四*基乙二胺)和過硫酸銨。聚丙烯酰胺凝膠內(nèi)部的聚合形成了一個交聯(lián)的微孔網(wǎng)絡(luò)。這種孔隙網(wǎng)絡(luò)允許小蛋白質(zhì)分子快速通過,同時減緩較大蛋白質(zhì)的遷移,這導(dǎo)致蛋白質(zhì)基
結(jié)晶紫染色液使用說明2023/10/27
產(chǎn)品內(nèi)容:1.結(jié)晶紫染色液(CrystalVioletStainingSolution)是一種組織或細胞染色時常用的可以把細胞核染成深紫色的染色液。2.結(jié)晶紫是一種堿性染料,可以和細胞核中的DNA結(jié)合,從而產(chǎn)生細胞核染色。3.一個包裝的本染色液至少可以染色200個樣品。4.室溫避光保存,一年有效。使用說明:1.樣品處理a)對于石蠟切片:二甲苯中脫蠟5-10分鐘。換用新鮮的二甲苯,再脫蠟5-10分鐘。無水乙醇5分鐘。90%乙醇2分鐘。70%乙醇2分鐘。蒸餾水2分鐘。b)對于冰凍切片:蒸餾水2分鐘。
大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取流程2023/10/26
大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取質(zhì)粒DNA的提取是從事基因工程工作中的一項基本實驗技術(shù),但提取方法有很多種,以下介紹一種最chang用的方法:堿裂解法:此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取,提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下:1、接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細胞于2mlLB培養(yǎng)基。2、37℃振蕩培養(yǎng)過夜。3、取1.5ml菌體于Ep管,以4000rpm離心3min,棄上清液。4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/LEDTApH8.0,25mM/LTris-HClpH8.0)充
常見三種質(zhì)粒提取方法介紹2023/10/26
質(zhì)粒提取主要有堿裂解法,煮沸裂解法,小量一步提取法等。1、堿裂解法原理:根據(jù)共價閉合環(huán)狀DNA與線性DNA的拓撲學(xué)結(jié)構(gòu)差異來分離的。在強堿環(huán)境下,細菌的細胞壁和細胞膜被破壞,基因組DNA和質(zhì)粒DNA被釋放出來,線性DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)被破壞而發(fā)生變性。雖然在強堿的條件下共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA也會發(fā)生變性,但兩條互補鏈仍會互相盤繞,并緊密的結(jié)合在一起。當加入pH4.8的乙醋酸鉀高鹽緩沖液使pH恢復(fù)中性時,共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA復(fù)性快,而線性的染色體DNA復(fù)性緩慢,細菌蛋白質(zhì)、破裂的細胞壁和變性的染色體
pH緩沖溶液的用途與正確保存使用2023/10/25
1.什么是pH標準緩沖溶液?它有哪些特點?pH緩沖溶液是一種能使pH值保持穩(wěn)定的溶液。如果向這種溶液中加入少量的酸或堿,或者在溶液中的化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生少量的酸或堿,以及將溶液適當稀釋,這個溶液的pH值基本上穩(wěn)定不變,這種能對抗少量酸堿或大或稀釋,而使pH值不變化的溶液就稱為緩沖溶液。pH標準緩沖液有以下特點:(1)標準溶液的pH值是已知的,并達到規(guī)定的準確度;(2)標準溶液的pH值有良好的復(fù)現(xiàn)性和穩(wěn)定性,具有較大的緩沖容量,較小的稀釋值和較小的溫度系數(shù);(3)溶液的制備方法簡單;2.如何配制pH標準
標準溶液的知識點,看這篇就夠了2023/10/25
標準溶液的取得有兩種方法,一種是用基準物質(zhì)直接配制,一種是用基準物質(zhì)或已知準確濃度的標準溶液進行標定來取得。用于配制或標定標準溶液濃度的最高純度化學(xué)試劑稱為基準試劑或基準物質(zhì),用基準試劑或基準物質(zhì)配制成已知準確濃度的溶液稱為標準溶液。標準溶液的濃度準確與否直接關(guān)系檢測結(jié)果的精密度、準確度。因此配制和標定中你必須知道這些事:1、用于配制或標定的標準溶液濃度的基準物質(zhì)必須符合以下條件:(1)純度高、雜質(zhì)含量一般不得超過0.001%,達到優(yōu)級純。(2)化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,不易吸濕,不被空氣氧化,干燥時不分解
抗原抗體的生物活性體現(xiàn)在這些方面2023/10/24
抗原抗體的生物活性體現(xiàn)在這些方面:(1)特異性結(jié)合抗原:抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細胞,通常需要補體或吞噬細胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁p傷。然而,抗體可通過與病毒或毒素的特異性結(jié)合,直接發(fā)揮中和病毒的作用。(2)激活補體:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經(jīng)典途徑激活補體,凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補體。(3)結(jié)合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細胞,參與免疫應(yīng)答。(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入
【免疫學(xué)檢測】抗原、抗體檢測原理和應(yīng)用2023/10/24
免疫學(xué)檢測即根據(jù)抗原、抗體反應(yīng)的原理,利用已知的抗原檢測未知的抗體或利用已知的抗體檢測未知的抗原。由于外源性和內(nèi)源性抗原均可通過不同的抗原遞呈途徑誘導(dǎo)生物機體的免疫應(yīng)答,在生物體內(nèi)產(chǎn)生特異性和非特異性T細胞的克隆擴增,并分泌特異性的免疫球蛋白(抗體)。由于抗體-抗原的結(jié)合具有特異性和專一性的特點,這種檢測可以定性、定位和定量地檢測某一特異的蛋白(抗原或抗體)。免疫學(xué)檢測技術(shù)的用途非常廣泛,它們可用于各種疾病的診斷、療效評價及發(fā)病機制的研究。最初的免疫檢測方法是將抗原或抗體的一方或雙方在某種介質(zhì)中
如何看出細胞培養(yǎng)液體中存在支原體?2023/10/23
如何看出細胞培養(yǎng)液體中存在支原體?1.觀察細胞的形態(tài)和生長特征:支原體污染比較嚴重時可出現(xiàn)生長減慢,有的培養(yǎng)基pH明顯變酸,并出現(xiàn)細胞病變,以此可依次對支原體污染進行檢測,但有些情況下支原體污染引起的病變特征與病毒感染相似,因此不能準確診斷。2.分離培養(yǎng)法:大多數(shù)支原體可出現(xiàn)te有的典型菌落。因而可依次盡心檢測,該方法準確、可靠,但時間長,敏感性不夠高。3.DNA結(jié)合熒光素染色法:利用熒光染劑(bisbenzimide,Hoechst33258)偵測支原體污染。熒光染料會結(jié)合到DNA之Adeno
支原體污染對細胞的影響說明2023/10/23
支原體早發(fā)現(xiàn)于1898年,1956年Robinson等*從細胞培養(yǎng)物中分離出支原體,之后國內(nèi)外關(guān)于支原體污染細胞的報道屢見不鮮。它廣泛存在于自然界中,有80余種,污染細胞常見的支原體包括發(fā)酵支原體(M.fementans)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)、口腔支原體(M.orale)、精氨酸支原體(M.arginina)、梨支原體(M.pirum)、唾液支原體(M.salivarium)和人型支原體(M.hominis)。支原體通常附著在細胞的表面,并影響其宿主細胞的生理、遺傳等多方面的正
標準溶液與基準物質(zhì)有什么關(guān)聯(lián)?2023/10/20
先來認識下標準溶液與基準物質(zhì)標準溶液:已知準確濃度的溶液,在各種滴定分析方法中都要用到標準溶液,可根據(jù)溶質(zhì)的性質(zhì)、特點,按不同方法配置,配制方法有直接配置法和間接配置法?;鶞饰镔|(zhì):能用來配制標準溶液或測定標準溶液濃度的物質(zhì)。應(yīng)具備如下條件:1、組成恒定并與化學(xué)式相符,若含結(jié)晶水,其結(jié)晶水的實際含量也應(yīng)與化學(xué)式嚴格相符。2、純度足夠高(達99.9%以上),雜質(zhì)含量應(yīng)低于分析方法允許的誤差限。3、性質(zhì)穩(wěn)定,不易吸收空氣中的水分和二氧化碳,不分解,不易被空氣氧化。4、有較大的摩爾質(zhì)量,以減少稱量時的相
鹽酸標準溶液的配制與標定方法2023/10/20
原理由于濃鹽酸容易揮發(fā),不能用它們來直接配制具有準確濃度的標準溶液,因此,配制HCl標準溶液時,只能先配制成近似濃度的溶液,然后用基準物質(zhì)標定它們的準確濃度,或者用另一已知準確濃度的標準溶液滴定該溶液,再根據(jù)它們的體積比計算該溶液的準確濃度。標定HCl溶液的基準物質(zhì)常用的是無水NaCO,其反應(yīng)式如下:NaCO+2HCl→2NaCl+CO+HO滴定至反應(yīng)wan全時,溶液pH為3.89,通常選用溴甲酚綠—甲基紅混合液作指示劑。試劑1.濃鹽酸(密度1.19)2.溴甲酚綠-甲基紅混合液指示劑:量取30m
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