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1%瓊脂糖膠配制操作步驟2023/11/02

1%瓊脂糖膠配制步驟1、制備1%瓊脂糖凝膠(大膠用70ml,小膠用50ml):稱取0.7g(0.5g)瓊脂糖置于錐形瓶中,加入70ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小燒杯.微波爐加熱煮沸3次至瓊脂糖全部融化,搖勻,即成1.0%瓊脂糖凝膠液。2、膠板制備:取電泳槽內(nèi)的有機玻璃內(nèi)槽(制膠槽)洗干凈,晾干,放入制膠玻璃板.取透明膠帶將玻璃板與內(nèi)槽兩端邊緣封好,形成模子.將內(nèi)槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.將冷卻到65℃左右的瓊脂糖凝膠液混勻小心地倒入內(nèi)槽玻璃板上,使膠液緩慢展開,直到整個玻璃板

多克隆抗體抗原的制備步驟2023/11/02

多克隆抗體的制備一般包括以下幾個步驟：1、制備抗原。2、選擇實驗動物。3、動物免疫。4、試取血進行測試，看看是否成功免疫。5、如果成功免疫，殺死實驗動物，采集全部血清。6、純化出抗體。7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。（一）抗原制備Ig是免疫球蛋白，對異種動物而言，是良好的抗原物質(zhì)?？梢源碳ぎ惙N動物產(chǎn)生抗Ig血清，經(jīng)適當提取后，產(chǎn)生抗Ig抗體，又叫第二抗體或抗抗體。在多數(shù)的間接標記反應(yīng)中，均需制備抗Ig抗體。（二）材料與試劑1．提取的動物Ig2．弗氏wan全佐劑和弗氏不wan全佐劑3．青霉素和鏈

革蘭氏染色與細菌抗酸染色技術(shù)操作技巧分享2023/11/01

蘭氏染色和抗酸染色都屬于細菌形態(tài)學(xué)檢查法，提到革蘭氏染色大家肯定都非常熟悉，但是說到抗酸染色你不一定了解。今天我們進入細菌的世界，聊一聊細菌界的這兩大染色法：革蘭氏染色（Gramstain）用途：由丹麥病理學(xué)家ChristainGram于1884年創(chuàng)立，直到現(xiàn)今，革蘭氏染色法仍是細菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法。通過革蘭氏染色，可將細菌鑒別為革蘭陽性菌(G+)和革蘭陰性菌(G-)兩大類。原理：細菌經(jīng)龍膽紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內(nèi)形成了不溶于水的龍膽紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌(G+)由于其細

麗春紅染色液的配制與使用2023/11/01

麗春紅（PonceauS）也稱猩紅，可以用于PVDF膜、硝酸纖維素膜（nitrocellulosemembrane）和醋酸纖維素膜（celluloseacetatemembrane）上的蛋白的檢測。麗春紅帶負電荷，可以與帶正電荷的氨基酸殘基結(jié)合，同時麗春紅也可以與蛋白的非極性區(qū)相結(jié)合，從而形成紅色的條帶。麗春紅染色的靈敏度不及考馬斯亮藍染色。麗春紅對蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸餾水，PBS或其它適當溶液洗去。因此，蛋白質(zhì)N端測序時將SDS-PAGE膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜，用麗春紅染色后

關(guān)于微量分析對試劑的要求標準2023/10/31

微量分析是化學(xué)分析方法的一種，用于測定微量物質(zhì)的方法．被測物質(zhì)的許可量僅約為常量的百分之一。重量約為1~15毫克，體積約為0.01~2毫升。分為微量定性分析和微量定量分析，采用點滴反應(yīng)和顯微結(jié)晶反應(yīng)．試劑用量少。但應(yīng)有高度靈敏性，儀器小巧，構(gòu)造特殊。操作復(fù)雜，技術(shù)要求較高。微量分析適用于極少量物質(zhì)的分析，該方法已經(jīng)應(yīng)用了許多年了—比如，馬爾施的砷檢驗法和奈斯勒的氨檢驗法—而作為一種標準分析操作法的微量分析則是20世紀發(fā)展起來的。它主要是奧地利格拉茨大學(xué)的普列格爾和埃米希兩人工作的結(jié)果。定量微量分

斐林試劑和班氏試劑區(qū)別分析2023/10/31

斐林試劑和班氏試劑的使用方法及原理不盡相同。斐林試劑和班氏試劑都是檢驗還原性糖的試劑，二者的使用方法及原理、成分也有區(qū)別，下面就從這幾種試劑的使用原理、成分及使用方法等方面做一簡單總結(jié)。（1）班氏試劑常用于尿糖的鑒定，其配方與斐林試劑不一樣，其配方為：①400mL水中加85g檸檬酸鈉和50g無水碳酸鈉；②50mL加熱的水中加入8.5g無水硫酸銅。制成溶液；③把CuSO4溶液倒入檸檬酸鈉溶液中，邊加邊攪，如產(chǎn)生沉淀可濾去。（2）其反應(yīng)原理與斐林試劑略有差別。利用斐林試劑鑒定時，斐林試劑甲和斐林試劑

對照品的保存與使用方法2023/10/30

對照品系指用于鑒別、檢查、含量測定的標準物質(zhì)，包括雜質(zhì)對照品，不包括色譜用的內(nèi)標物質(zhì)。在藥品檢驗工作中我們常會用到一種用來檢查藥品質(zhì)量的特殊參照物——藥品標準物質(zhì)(對照品)。它在藥品檢驗中具有十分重要的地位。隨著儀器分析的廣泛使用，必將越來越多地使用藥品標準物質(zhì)。下面遠慕生物就來介紹一下如何對對照品進行保存和使用：(1)對照品應(yīng)按說明書規(guī)定的條件妥善保存，一般置干燥陰涼處保存，某些對照品如維生素E等需避光低溫保存。要注意對照品的使用期限，過期、變質(zhì)的對照品不宜再使用。開瓶后建議短期內(nèi)用完，避免開

標準品與對照品怎么區(qū)分？2023/10/30

對照品與標準品區(qū)分對照品與標準品是2個不同的概念，中國藥典凡例中已有明確的定義：對照品系指用于鑒別、檢查、含量測定和校正檢定儀器性能的標準物質(zhì)，而標準品系指用于生物檢定、抗生素或生物藥品中含量或效價測定的標準物質(zhì)，以效價單位(U)表示。文獻中常將2種概念混淆，認為對照品就是標準品，是1種物質(zhì)2種提法而已，造成錯誤的原因，可能是有的藥品既有對照品，又有標準品。例如當用微生物法測定頭孢克羅效價時，用頭孢克羅標準品，用高效液相色譜儀HPLC或紫外分光光度計UV法測定時，則用對照品;非那西丁當用作熔點校

常用蛋白質(zhì)染色法原理及優(yōu)缺點2023/10/27

凝膠電泳是研究蛋白質(zhì)性質(zhì)的一種相對簡單、快速和高靈敏度的工具。它是分析化學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)的主要工具。通過電泳分離蛋白質(zhì)是基于這樣一個事實，即帶電分子將在施加電場時通過基質(zhì)遷移。蛋白質(zhì)電泳分離的基質(zhì)是聚丙烯酰胺。用于形成聚丙烯酰胺的化學(xué)試劑是單體丙烯酰胺和N，N'-雙丙烯酰胺（雙-丙烯酰胺）。聚合丙烯酰胺和雙丙烯酰的方法是使用TEMED（四*基乙二胺）和過硫酸銨。聚丙烯酰胺凝膠內(nèi)部的聚合形成了一個交聯(lián)的微孔網(wǎng)絡(luò)。這種孔隙網(wǎng)絡(luò)允許小蛋白質(zhì)分子快速通過，同時減緩較大蛋白質(zhì)的遷移，這導(dǎo)致蛋白質(zhì)基

結(jié)晶紫染色液使用說明2023/10/27

產(chǎn)品內(nèi)容：1.結(jié)晶紫染色液(CrystalVioletStainingSolution)是一種組織或細胞染色時常用的可以把細胞核染成深紫色的染色液。2.結(jié)晶紫是一種堿性染料，可以和細胞核中的DNA結(jié)合，從而產(chǎn)生細胞核染色。3.一個包裝的本染色液至少可以染色200個樣品。4.室溫避光保存，一年有效。使用說明：1.樣品處理a)對于石蠟切片：二甲苯中脫蠟5-10分鐘。換用新鮮的二甲苯，再脫蠟5-10分鐘。無水乙醇5分鐘。90%乙醇2分鐘。70%乙醇2分鐘。蒸餾水2分鐘。b)對于冰凍切片：蒸餾水2分鐘。

大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取流程2023/10/26

大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取質(zhì)粒DNA的提取是從事基因工程工作中的一項基本實驗技術(shù)，但提取方法有很多種，以下介紹一種最chang用的方法：堿裂解法：此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取，提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下：1、接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細胞于2mlLB培養(yǎng)基。2、37℃振蕩培養(yǎng)過夜。3、取1.5ml菌體于Ep管，以4000rpm離心3min，棄上清液。4、加0.lml溶液I（1％葡萄糖，50mM/LEDTApH8.0，25mM/LTris-HClpH8.0）充

常見三種質(zhì)粒提取方法介紹2023/10/26

質(zhì)粒提取主要有堿裂解法，煮沸裂解法，小量一步提取法等。1、堿裂解法原理：根據(jù)共價閉合環(huán)狀DNA與線性DNA的拓撲學(xué)結(jié)構(gòu)差異來分離的。在強堿環(huán)境下，細菌的細胞壁和細胞膜被破壞，基因組DNA和質(zhì)粒DNA被釋放出來，線性DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)被破壞而發(fā)生變性。雖然在強堿的條件下共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA也會發(fā)生變性，但兩條互補鏈仍會互相盤繞，并緊密的結(jié)合在一起。當加入pH4.8的乙醋酸鉀高鹽緩沖液使pH恢復(fù)中性時，共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA復(fù)性快，而線性的染色體DNA復(fù)性緩慢，細菌蛋白質(zhì)、破裂的細胞壁和變性的染色體

pH緩沖溶液的用途與正確保存使用2023/10/25

1.什么是pH標準緩沖溶液？它有哪些特點？pH緩沖溶液是一種能使pH值保持穩(wěn)定的溶液。如果向這種溶液中加入少量的酸或堿，或者在溶液中的化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生少量的酸或堿，以及將溶液適當稀釋，這個溶液的pH值基本上穩(wěn)定不變，這種能對抗少量酸堿或大或稀釋，而使pH值不變化的溶液就稱為緩沖溶液。pH標準緩沖液有以下特點：（1）標準溶液的pH值是已知的，并達到規(guī)定的準確度；（2）標準溶液的pH值有良好的復(fù)現(xiàn)性和穩(wěn)定性，具有較大的緩沖容量，較小的稀釋值和較小的溫度系數(shù)；（3）溶液的制備方法簡單；2.如何配制pH標準

標準溶液的知識點，看這篇就夠了2023/10/25

標準溶液的取得有兩種方法，一種是用基準物質(zhì)直接配制，一種是用基準物質(zhì)或已知準確濃度的標準溶液進行標定來取得。用于配制或標定標準溶液濃度的最高純度化學(xué)試劑稱為基準試劑或基準物質(zhì)，用基準試劑或基準物質(zhì)配制成已知準確濃度的溶液稱為標準溶液。標準溶液的濃度準確與否直接關(guān)系檢測結(jié)果的精密度、準確度。因此配制和標定中你必須知道這些事：1、用于配制或標定的標準溶液濃度的基準物質(zhì)必須符合以下條件：（1）純度高、雜質(zhì)含量一般不得超過0.001%，達到優(yōu)級純。（2）化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不易吸濕，不被空氣氧化，干燥時不分解

抗原抗體的生物活性體現(xiàn)在這些方面2023/10/24

抗原抗體的生物活性體現(xiàn)在這些方面：（1）特異性結(jié)合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細胞，通常需要補體或吞噬細胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁p傷。然而，抗體可通過與病毒或毒素的特異性結(jié)合，直接發(fā)揮中和病毒的作用。（2）激活補體：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經(jīng)典途徑激活補體，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補體。（3）結(jié)合細胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細胞，參與免疫應(yīng)答。（4）可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通過胎盤進入

【免疫學(xué)檢測】抗原、抗體檢測原理和應(yīng)用2023/10/24

免疫學(xué)檢測即根據(jù)抗原、抗體反應(yīng)的原理,利用已知的抗原檢測未知的抗體或利用已知的抗體檢測未知的抗原。由于外源性和內(nèi)源性抗原均可通過不同的抗原遞呈途徑誘導(dǎo)生物機體的免疫應(yīng)答,在生物體內(nèi)產(chǎn)生特異性和非特異性T細胞的克隆擴增,并分泌特異性的免疫球蛋白(抗體)。由于抗體-抗原的結(jié)合具有特異性和專一性的特點,這種檢測可以定性、定位和定量地檢測某一特異的蛋白(抗原或抗體)。免疫學(xué)檢測技術(shù)的用途非常廣泛,它們可用于各種疾病的診斷、療效評價及發(fā)病機制的研究。最初的免疫檢測方法是將抗原或抗體的一方或雙方在某種介質(zhì)中

如何看出細胞培養(yǎng)液體中存在支原體？2023/10/23

如何看出細胞培養(yǎng)液體中存在支原體？1.觀察細胞的形態(tài)和生長特征:支原體污染比較嚴重時可出現(xiàn)生長減慢，有的培養(yǎng)基pH明顯變酸，并出現(xiàn)細胞病變，以此可依次對支原體污染進行檢測，但有些情況下支原體污染引起的病變特征與病毒感染相似，因此不能準確診斷。2.分離培養(yǎng)法:大多數(shù)支原體可出現(xiàn)te有的典型菌落。因而可依次盡心檢測，該方法準確、可靠，但時間長，敏感性不夠高。3.DNA結(jié)合熒光素染色法:利用熒光染劑(bisbenzimide,Hoechst33258)偵測支原體污染。熒光染料會結(jié)合到DNA之Adeno

支原體污染對細胞的影響說明2023/10/23

支原體早發(fā)現(xiàn)于1898年，1956年Robinson等*從細胞培養(yǎng)物中分離出支原體，之后國內(nèi)外關(guān)于支原體污染細胞的報道屢見不鮮。它廣泛存在于自然界中，有80余種，污染細胞常見的支原體包括發(fā)酵支原體（M.fementans）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）、口腔支原體（M.orale）、精氨酸支原體（M.arginina）、梨支原體（M.pirum）、唾液支原體（M.salivarium）和人型支原體（M.hominis）。支原體通常附著在細胞的表面，并影響其宿主細胞的生理、遺傳等多方面的正

標準溶液與基準物質(zhì)有什么關(guān)聯(lián)？2023/10/20

先來認識下標準溶液與基準物質(zhì)標準溶液：已知準確濃度的溶液，在各種滴定分析方法中都要用到標準溶液，可根據(jù)溶質(zhì)的性質(zhì)、特點，按不同方法配置，配制方法有直接配置法和間接配置法?；鶞饰镔|(zhì)：能用來配制標準溶液或測定標準溶液濃度的物質(zhì)。應(yīng)具備如下條件：1、組成恒定并與化學(xué)式相符，若含結(jié)晶水，其結(jié)晶水的實際含量也應(yīng)與化學(xué)式嚴格相符。2、純度足夠高(達99.9%以上)，雜質(zhì)含量應(yīng)低于分析方法允許的誤差限。3、性質(zhì)穩(wěn)定，不易吸收空氣中的水分和二氧化碳，不分解，不易被空氣氧化。4、有較大的摩爾質(zhì)量，以減少稱量時的相

鹽酸標準溶液的配制與標定方法2023/10/20

原理由于濃鹽酸容易揮發(fā)，不能用它們來直接配制具有準確濃度的標準溶液，因此，配制HCl標準溶液時，只能先配制成近似濃度的溶液，然后用基準物質(zhì)標定它們的準確濃度，或者用另一已知準確濃度的標準溶液滴定該溶液，再根據(jù)它們的體積比計算該溶液的準確濃度。標定HCl溶液的基準物質(zhì)常用的是無水NaCO，其反應(yīng)式如下：NaCO+2HCl→2NaCl+CO+HO滴定至反應(yīng)wan全時，溶液pH為3.89，通常選用溴甲酚綠—甲基紅混合液作指示劑。試劑1.濃鹽酸（密度1.19）2.溴甲酚綠-甲基紅混合液指示劑：量取30m