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TRIZOL提取RNA詳細(xì)步驟，助力科研！2023/10/19: Trizol法提取總RNA的原理Trizol試劑的主要成分是苯/酚。苯/酚的主要作用是對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解，從而使細(xì)胞當(dāng)中的蛋白質(zhì)以及核酸物質(zhì)解聚而得以釋放。苯/酚雖然可以有效的使蛋白質(zhì)變性，但它不能wan全抑制RNA酶的活性，因此Trizol中還加入了8－羥基喹/啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇等來(lái)抑制內(nèi)源和外源RNase（即RNA酶）。Trizol試劑不但可用于小量樣品（組織：50-100mg；細(xì)胞：5×106），也可用于大量樣品（組織≥1g或細(xì)胞≥107），對(duì)動(dòng)物、植物、細(xì)菌、血液提取都適用，可同時(shí)

什么是核蛋白？核蛋白的提取方法介紹2023/10/19: 核蛋白的簡(jiǎn)介核蛋白(nucleoprotein)因其最初發(fā)現(xiàn)于細(xì)胞核中，故稱為核蛋白，它是細(xì)胞中的一種結(jié)合蛋白質(zhì)。在細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)中都含有核蛋白。此外，在病毒、染色體和核蛋白體中也含有核蛋白。核蛋自在生物的生長(zhǎng)和繁殖過(guò)程中有著du特的功能和作用。核蛋白是由帶陽(yáng)離子性質(zhì)的堿性蛋白質(zhì)(如組蛋白和魚(yú)精蛋白)和蛋白質(zhì)輔基(核酸)所構(gòu)成。組蛋白含有堿性氨基酸(如賴氨酸和精氨酸)，所以具有堿性。其相對(duì)分子質(zhì)量為11000～21000。魚(yú)精蛋白存在于某些魚(yú)精核蛋白中，由于富含精氨酸，因此也具有堿性。核蛋白的提

培養(yǎng)基移種操作方法2023/10/18: 一、斜面培養(yǎng)基移種技術(shù)(1)材料瓊脂斜面培養(yǎng)基經(jīng)分離培養(yǎng)的平板培養(yǎng)物。(2)方法①在瓊脂斜面培養(yǎng)基試管上部標(biāo)明移種的菌名(或編號(hào))、接種日期、接種者的組別及代號(hào)。②左手持長(zhǎng)有細(xì)菌的平板底，右手持接種環(huán)。接種環(huán)在火焰上滅菌冷卻后，沾取平板劃線上發(fā)育良好的孤立菌落。把平板放回原處，立即用此手取斜面培養(yǎng)基斜持，用右手小指與手掌夾持棉塞，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)后撥出棉塞，管口通過(guò)火焰滅菌。③將已沾菌的接種環(huán)伸入斜面培養(yǎng)基的管底部的凝固水，沿斜面培養(yǎng)基的表面從底向上劃一直線，然后再?gòu)牡撞肯蛏蟿澾B續(xù)曲折線；也可不劃直線只

細(xì)胞培養(yǎng)之無(wú)血清培養(yǎng)基的優(yōu)勢(shì)2023/10/18: 顧名思義，無(wú)血清培養(yǎng)基（serum-freemedium,SFM）系指不含任何血清成分的合成培養(yǎng)基。近年來(lái)，因?yàn)榧?xì)胞治療（celltherapy）的快速發(fā)展與生物工業(yè)上的制備抗體、病毒抗原或是重組蛋白表達(dá)時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)基中的血清成分復(fù)雜，可能會(huì)影響制程或是增加不穩(wěn)定的因素，因此，無(wú)血清培養(yǎng)基成為其目標(biāo)，現(xiàn)今已有許多成熟的產(chǎn)品可供應(yīng)研究人員做選擇。血清培養(yǎng)基的缺點(diǎn)血清是一種成分極為復(fù)雜的混合物，為細(xì)胞培養(yǎng)增添了許多不可控制的變因。含有血清的培養(yǎng)基缺點(diǎn)如下：(1)價(jià)格昂貴，血清的費(fèi)用約占細(xì)胞培養(yǎng)費(fèi)用的

瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)詳解2023/10/17: 瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支持介質(zhì)的一種電泳方法。對(duì)于分子量較大的樣品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離。瓊脂糖凝膠約可區(qū)分相差100bp的DNA片段，其分辨率雖比聚丙烯酰胺凝膠低，但它制備容易，分離范圍廣，尤其適于分離大片段DNA。普通瓊脂糖凝膠分離DNA的范圍為0.2-20kb，利用脈沖電泳，可分離高達(dá)10^7bp的DNA片段。操作流程準(zhǔn)備干凈的配膠板和電泳槽注意DNA酶污染的儀器可能會(huì)降解DNA，造成條帶信號(hào)弱、模糊甚**缺失的現(xiàn)象。選擇電泳方法一般的

支原體四種檢測(cè)方法了解一下2023/10/17: 近日，全國(guó)多地醫(yī)院出現(xiàn)較多肺炎支原體感染患者，支原體是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型，它既不同于，也不同于病毒，是介于細(xì)菌和病毒之間，能在無(wú)活細(xì)胞的人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖的最小微生物。它廣泛分布于自然界，與人類、動(dòng)植物的疾病有密切的關(guān)系。支原體的種類繁多，造成的危害非常廣泛。目前證明對(duì)人體有致病作用的支原體有肺炎支原體、解脲支原體、人型支原體、生殖支原體等幾種，但臨床以肺炎支原體最為常見(jiàn)。肺炎支原體主要以飛沫傳播，引起兒童、青少年呼吸道感染、咽炎、氣管炎、肺炎等。支原體檢測(cè)方法：1、支原體的分離培養(yǎng)它

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)步驟介紹2023/10/16: 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的必需條件在所有的細(xì)胞離體培養(yǎng)中，最困難的是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下面是它所需要的特殊條件。⑴血清：動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)常常需要血清。最chang用的是小牛血清。血清提供生長(zhǎng)必需因子，如激素、微量元素、礦物質(zhì)和脂肪。在這里，血清等于是動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)的天然營(yíng)養(yǎng)液。⑵支持物：大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞有貼壁生長(zhǎng)的習(xí)慣。離體培養(yǎng)常用玻璃，塑料等作為支持物。⑶氣體交換：二氧化碳和氧氣的比例要在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中不斷進(jìn)行調(diào)節(jié)，不斷維持所需要的氣體條件。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)步驟注：所有步驟應(yīng)在無(wú)菌無(wú)毒的超凈工作臺(tái)進(jìn)行。胰蛋

淺談一下細(xì)胞因子的基本概念與種類2023/10/16: 細(xì)胞因子（CK）是由活化免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞（如某些基質(zhì)細(xì)胞）合成分泌的能調(diào)節(jié)細(xì)胞生理功能、參與免疫應(yīng)答和介導(dǎo)炎癥反應(yīng)等多種生物學(xué)效應(yīng)的小分子多肽或糖蛋白，是不同于免疫球蛋白和補(bǔ)體的又一類免疫分子。根據(jù)來(lái)源初將活化淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子稱為淋巴因子（LK），將單核-吞噬細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子稱為單核因子（MK）。目前根據(jù)功能，可將細(xì)胞因子粗略分為以下6類：1.白細(xì)胞介素白細(xì)胞介素（IL）簡(jiǎn)稱白介素，初被定義為由白細(xì)胞產(chǎn)生，在白細(xì)胞間發(fā)揮作用的細(xì)胞因子。雖然后來(lái)發(fā)現(xiàn)它們的產(chǎn)生細(xì)胞和作用細(xì)胞并非局限于白

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備步驟2023/10/13: 稱重：根據(jù)培養(yǎng)基配方的比例，將牛肉提取物，蛋白胨和NaCl準(zhǔn)確稱入燒杯中。牛肉醬通常用玻璃棒挑出，在小燒杯或觀察杯中稱重，溶于熱水，然后倒入燒杯中。也可以將其放在稱量紙上，稱量后直接放入水中。此時(shí)，如果將其稍加加熱，牛肉糊將與稱量紙分離，然后立即將紙頁(yè)移開(kāi)。蛋白胨吸濕性強(qiáng)，稱重時(shí)移動(dòng)迅速。另外，在混合藥物時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格防止藥物混合。羊角面包用于一種藥物，或在服用一種藥物后，將其洗滌并干燥，然后稱重另一種藥物。不要在瓶子上蓋錯(cuò)蓋子。融化：在上述燒杯中，可以先添加少于所需量的水，用玻璃棒充分?jǐn)嚢?，然后?

實(shí)驗(yàn)室常用多種緩沖液配置方案2023/10/13: 1、1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)組份濃度：1MTris-HCl配制量：1L配制方法：1.稱量121.1gTris置于1L燒杯中。2.加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。PH值濃HCl7.4約70ml7.6約60ml8.0約42ml4.將溶液定容至1L。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門(mén)ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。2、10×

微生物常用染色法及染色制備介紹2023/10/12: 微生物染色的基本原理，是借助物理因素和化學(xué)因素的作用而進(jìn)行的。物理因素如細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對(duì)染料的毛細(xì)現(xiàn)象、滲透、吸附作用等?；瘜W(xué)因素則是根據(jù)細(xì)胞物質(zhì)和染料的不同性質(zhì)而發(fā)生地各種化學(xué)反應(yīng)。酸性物質(zhì)對(duì)于堿性染料較易吸附，且吸附作用穩(wěn)固；同樣，堿性物質(zhì)對(duì)酸性染料較易于吸附。如酸性物質(zhì)細(xì)胞核對(duì)于堿性染料就有化學(xué)親和力，易于吸附。但是，要使酸性物質(zhì)染上酸性材料，必須把它們的物理形式加以改變（如改變pH值），才利于吸附作用的發(fā)生。相反，堿性物質(zhì)（如細(xì)胞質(zhì)）通常僅能染上酸性染料，若把它們變?yōu)檫m宜的物理形式，也同

細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的真菌污染源分析2023/10/12: 培養(yǎng)基變渾濁的原因可能有如下幾點(diǎn)：1、細(xì)胞存在污染，污染早期可以見(jiàn)到細(xì)胞生長(zhǎng)；2、不排除傳代時(shí)細(xì)胞密度過(guò)大，或者操作不當(dāng)導(dǎo)致多數(shù)細(xì)胞不貼壁，大量細(xì)胞漂浮。3、細(xì)胞破碎。細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染、支原體污染、原蟲(chóng)污染、黑膠蟲(chóng)污染、真菌污染、病毒污染以及非細(xì)胞污染.他們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)中污染的特點(diǎn)如下：1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯.2、支原體：黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會(huì)

通用型抗體稀釋液使用說(shuō)明書(shū)2023/10/11: 產(chǎn)品描述：適合于稀釋所有免疫抗體測(cè)定（Immunofluorescence,IHC,ELISA,WB）實(shí)驗(yàn)中的抗體。該試劑可用于一抗或二抗的稀釋和配制，在4℃保存和使用不少于六個(gè)月；稀釋液中加入了多種抗體結(jié)合反應(yīng)增強(qiáng)劑及穩(wěn)定劑，增強(qiáng)免疫反應(yīng)，減少非特異性結(jié)合，獲得更佳的效果，可反復(fù)使用，節(jié)約寶貴的抗體。試劑中不含有動(dòng)物源的蛋白、磷酸鹽、疊氮鈉或硫柳汞類防腐劑，適合于所有類型抗體稀釋，包括HRP，AP標(biāo)記的抗體。產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：沒(méi)有疊氮鈉等劇毒防腐劑，使用醫(yī)療級(jí)別防腐劑；含免疫增強(qiáng)劑和穩(wěn)定劑，背景更加干

PAS糖原染色常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案2023/10/11: PAS糖原染色實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介與原理1.實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介PAS糖原染色實(shí)驗(yàn)是通過(guò)特殊的化學(xué)反應(yīng)使細(xì)胞和組織中的糖原與染料結(jié)合，形成紫紅色或洋紅色的顏色，從而可視化糖原的分布和定量。PAS染色又稱過(guò)碘酸雪夫染色，糖原染色。一般用來(lái)顯示糖元和其它多糖物質(zhì)。2.實(shí)驗(yàn)原理糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一，氧化劑能氧化糖類及有關(guān)物質(zhì)中的1，2-乙二醇基，使之變?yōu)槎?，醛與Schiff試劑能結(jié)合成一種品紅化合物，產(chǎn)生紫紅色。PAS技術(shù)常用來(lái)顯示糖原和其他多糖，該染色液不僅能夠顯示糖原，還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物

BCA法測(cè)蛋白濃度有誤差的原因找到了！2023/10/10: BCA法是衡量蛋白質(zhì)濃度的一種方法，但是在實(shí)際操作中可能會(huì)產(chǎn)生多種誤差。1.操作誤差：不正確的試劑使用、不正確的攪拌、沉淀殘留以及操作的時(shí)間和溫度等因素都可能影響測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性。2.反應(yīng)性差異：不同的蛋白質(zhì)對(duì)BCA試劑的反應(yīng)性可能存在差異，這可能會(huì)導(dǎo)致一些蛋白質(zhì)表現(xiàn)出較低的吸收值，從而導(dǎo)致偏差。3.干擾物質(zhì)：某些抗生素、膽固醇、紅細(xì)胞裂解物等物質(zhì)都可能對(duì)測(cè)量結(jié)果造成干擾，從而導(dǎo)致測(cè)量誤差。4.蛋白質(zhì)分子構(gòu)象：蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象可能會(huì)影響B(tài)CA試劑的反應(yīng)性，從而導(dǎo)致測(cè)量誤差。5.其他因素：例如樣品

溶液稀釋倍數(shù)計(jì)算方法說(shuō)明2023/10/10: 稀釋倍數(shù)=原液濃度/（原液濃度×移取體積/定容體積）。如1mol/L稀釋一倍就是0.5mol/L，10%稀釋一倍就是5%稀釋是指對(duì)現(xiàn)有溶液加入更多溶劑而使其濃度減小的過(guò)程。在稀釋后溶液的濃度減小，但溶質(zhì)的總量不變。稀釋前溶液濃度除以稀釋后的溶液濃度所得的商。溶液是由一種或幾種物質(zhì)分散到另一種物質(zhì)里，組成的均一、穩(wěn)定的混合物，被分散的物質(zhì)(溶質(zhì))以分子或更小的質(zhì)點(diǎn)分散于另一物質(zhì)(溶劑)中。物質(zhì)在常溫時(shí)有固體、液體和氣體三種狀態(tài)。因此溶液也有三種狀態(tài)，大氣本身就是一種氣體溶液，固體溶液混合物常稱固溶

實(shí)驗(yàn)室液體藥品的取用注意事項(xiàng)2023/10/09: 1、取用不定量(較多)液體——直接傾倒a.瓶塞必須倒放在桌面上【防止藥品腐蝕實(shí)驗(yàn)臺(tái)或污染藥品】；b.直接傾倒時(shí)瓶口必須緊挨試管口，試管45度，并且緩緩地倒【防止藥液損失】；c.貼標(biāo)簽的一面必須朝向手心處【防止藥液灑出腐蝕標(biāo)簽】；d.倒完液體后，要立即蓋緊瓶塞，并把瓶子放回原處，標(biāo)簽朝向外面【防止藥品潮解、變質(zhì)】。2、取用少量的液體—使用膠頭滴管a.應(yīng)在容器的正上方垂直滴入；膠頭滴管不要接觸容器壁【防止沾污試管或污染試劑】；b.取液后的滴管，應(yīng)保持橡膠膠帽在上，不要平放或倒置【防止液體倒流，沾污試

化學(xué)實(shí)驗(yàn)室的常用器材介紹2023/10/09: 1、鐵架臺(tái)：用于固定和支持各種儀器，一般常用于過(guò)濾、加熱等實(shí)驗(yàn)操作2、燒杯：①溶解固體物質(zhì)、配制溶液，以及溶液的稀釋、濃縮②也可用做較大量的物質(zhì)間的反應(yīng)3、量筒：量度液體體積4、集氣瓶：用于收集或貯存少量氣體，也可用作部分反應(yīng)的反應(yīng)容器5、試管：①少量試劑的反應(yīng)容器②也可用做收集少量氣體的容器③或用于裝置成小型氣體的發(fā)生器6、試管夾：用于夾持試管7、玻璃棒：用于攪拌、過(guò)濾或轉(zhuǎn)移液體8、酒精燈：用于加熱9、膠頭滴管：膠頭滴管用于吸取和滴加少量液體10、滴瓶：滴瓶用于盛放液體藥品11、廣口瓶：（內(nèi)壁

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制和標(biāo)定方法簡(jiǎn)介2023/10/08: 標(biāo)準(zhǔn)溶液就是已確定其主體物質(zhì)濃度或其他量值的溶液。不同的情況需使用不同的標(biāo)準(zhǔn)溶液，可千萬(wàn)別一概而論。直接配制法基準(zhǔn)物→干燥處理→分析天平稱量→溶于純水→轉(zhuǎn)入容量瓶（已校正）→純水稀釋至刻度→搖勻。標(biāo)定法標(biāo)定：①非基準(zhǔn)物質(zhì)先配置成近似（略高）所需濃度溶液；②再用基準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)定其準(zhǔn)確濃度，這一操作稱為標(biāo)定。三種方法：包括直接滴定法、間接滴定法、比較法。能用于直接配制或標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的物質(zhì)，稱為基準(zhǔn)物質(zhì)?；鶞?zhǔn)物質(zhì)必須符合下列要求：①物質(zhì)必須具有足夠的純度，其純度要求達(dá)到99.9%以上；而雜質(zhì)含量應(yīng)低于

樣品檢測(cè)全流程管理，科研人進(jìn)來(lái)學(xué)習(xí)！2023/10/08: 對(duì)檢測(cè)樣品的接收、流轉(zhuǎn)、貯存、處置以及檢測(cè)樣品的識(shí)別等各個(gè)環(huán)節(jié)實(shí)施有效的質(zhì)量控制至關(guān)重要。管理檢測(cè)樣品可以確保檢測(cè)樣品的代表性、有效性和完整性，從而保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。一.管理檢測(cè)樣品需做到這8個(gè)方面1.樣品的采集：樣品應(yīng)具有代表性。以樣品的結(jié)果說(shuō)明總體的情況，對(duì)總體作出結(jié)論。采樣遵循如下原則：1.1代表性：采樣時(shí)應(yīng)特別注意克服和消除各種因素的影響，使樣品最大限度地接近總體情況，保證樣品對(duì)總體有充分的代表性。1.2可獲性：某些情況下，樣品可能不具備代表性，而是由其可獲性所決定。1.3公證性：采

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