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RNA抽提的竅門與提高得率分享2023/09/15

RNA抽提的竅門1：快速阻止Rnase活性–樣品收集后快速冷凍，裂解時快速操作滅活Rnase。2：選擇合適的抽提方法–高核酶含量的組織，脂肪組織最好用含苯ben酚的方法。3：預判質量要求–Northern，cDNA文庫構建對完整性要求高，RT-PCR,RPA(Ribonucleaseprotectionassay)對完整性要求不是很高。RT-PCR對純度(酶抑制物殘留)要求很高。4：徹di底勻漿是提高得率和降低降解的關鍵。5：檢查RNA的完整性–電泳檢測，28S:18S=2:1是完整的標志，1:

單克隆抗體制備的基本原理與過程簡介2023/09/15

單克隆抗體制備的原理：B淋巴細胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力、B細胞的這種能力和量是有限的,不可能持續(xù)分化增殖下去，因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是極其微小的、將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，再進一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤的無限生長的能力，又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細胞進行培養(yǎng)或注入小鼠體內即可獲得大量的高效價、單一的特異性抗體.這種技術即稱為單克隆抗體技術。單克隆抗體制備的過程：免疫

預防RNA酶污染，讓實驗不再失??！2023/09/14

在所有RNA實驗中，最關鍵的因素是分離得到全長的RNA。而實驗失敗的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶廣泛存在而穩(wěn)定，一般反應不需要輔助因子。因而RNA制劑中只要存在少量的RNA酶就會引起RNA在制備與分析過程中的降解，而所制備的RNA的純度和完整性又可直接影響RNA分析的結果，所以RNA的制備與分析操作難度極大。在實驗中，一方面要嚴格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最大限度地抑制內源性的RNA酶。RNA酶可耐受多種處理而不被滅活，如煮沸、高壓滅菌等。外源性的RNA酶存在于

微生物定性檢驗方法的驗證2023/09/14

1.專屬性微生物定性檢驗的專屬性是指檢測樣品中可能存在的特定微生物種類的能力。當替代方法以微生物生長作為判斷微生物是否存在時，其專屬性驗證時應確認所用培養(yǎng)基的促生長試驗，還應考慮樣品的存在對檢驗結果的影響。當替代方法不是以微生物生長作為判斷指標時，其專屬性驗證應確認檢測系統(tǒng)中的外來成分不得干擾試驗而影響結果，如確認樣品的存在不會對檢驗結果造成影響。采用替代方法進行控制菌的檢驗，還應選擇與控制菌具有類似特性的菌株作為驗證對象。2.檢測限微生物定性檢驗的檢測限是指在替代方法設定的檢驗條件下，樣品中能

NaCl在培養(yǎng)基中的作用說明2023/09/13

NaCl在培養(yǎng)基中的作用鈉離子不參與細胞的組成，但仍是微生物發(fā)酵培養(yǎng)基的必要成分，鈉離子與維持細胞滲透壓有關，故在培養(yǎng)基中常加入少量的鈉鹽，但用量不能過高，否則會影響微生物的生長。氯離子在一般微生物中不具有營養(yǎng)作用，但對一些嗜鹽菌來講是需要的，在一些產(chǎn)生含氯代謝物的發(fā)酵中，除了從其他天然原料和水中帶入的氯離子外，還需加入一定量的氯化物補充氯離子。實驗證明，在無機大量元素中，NaCl與維持細胞內外滲透壓平衡，K2HPO4在培養(yǎng)基起緩沖劑調節(jié)pH值的作用，用量不能過高，否則會影響微生物的生長，一般用

明膠的凝膠強度測定方法2023/09/13

明膠是一種非常重要的天然生物高分子材料，是由動物的皮骨及結締組織中的膠原部分降解成的。在食品、化妝品和制藥工業(yè)被廣泛使用。明膠一加熱即成為液體，遇冷則變成彈性固體凝膠塊。膠體的溶液-凝膠互相轉換是明膠特te有的現(xiàn)象。因此，形成凝膠的能力是明膠一項很重要的性能。很早就有人試圖通過測算，用數(shù)字表示凝膠強度。最早的評估凝膠強度的方法是完wan全依靠人的“指測”?！爸笢y”方法是用手指簡單按壓一下明膠表面，再與已知標準明膠的抗力進行對比。這種方法雖然迅速，但是數(shù)據(jù)可靠性遠遠不及科學測量。再加上人體感官器官

葉綠體色素的提取和分離實驗2023/09/12

原理葉綠體色素是植物吸收太陽光能進行光合作用的重要物質，主要由葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。從植物葉片中提取和分離色素是對其認識和了解的前提。利用葉綠體色素能溶于有機溶劑的特性，可用丙酮提取。分離色素的方法有多種，紙層析是其中最jian簡便的一種。當溶劑不斷地從層析濾紙上流過時，由于混合物中各成分在兩相（即流動相和固定相）間具有不同的分配系數(shù)，它們的移動速度不同，使樣品中的混合物得到分離。儀器藥品大試管臺天平研缽量筒燒杯漏斗軟木塞新華濾紙丙酮四氯化碳無水硫酸鈉碳酸鈣石英砂操作步驟1．

凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質2023/09/12

（一）原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優(yōu)點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，所需時間也短，但其凝膠過濾后樣品體積較大。所以，要根據(jù)具體情況選擇使用。前實驗中樣品體積較小，凝膠達濾后樣品體積不會太增加，所以選用凝膠過濾法。（二）試劑與器材（1）SephadexG-25。（2）0.

血液保存液的主要成分與作用介紹2023/09/11

1.血液保存液常用種類配方可分為：ACD（A，枸櫞酸；C，枸櫞酸三鈉；D，葡萄糖）與CPD（C，枸櫞酸三鈉；P，磷酸鹽；D，葡萄糖及枸櫞酸）兩大類保存液。在CPD中加腺嘌呤即為CPDA-1。2.血液保存液主要成分（1）枸櫞酸鹽：是所有抗凝保存液中的基本抗凝物質。最chang用的是枸櫞酸三鈉，除抗凝作用外，它還能阻止溶血的發(fā)生。（2）枸櫞酸：避免保存液中的葡萄糖在消毒中焦化。（3）葡萄糖：是紅細胞代謝所必需的營養(yǎng)成分，可延長紅細胞保存時間，且防止溶血；并減慢細胞中有機磷的消失，防止紅細胞儲存損傷。

ELISA試劑盒的參考標準介紹2023/09/11

第一、標準曲線1.定量方法：標準曲線至少由5個濃度組成，測定次數(shù)不少于5次，以確定工作濃度范圍和IC50范圍。2.定性方法：工作濃度范圍通過陰性、臨界值濃度和陽性的樣品測定來確定，每個濃度重復不少于5次，濃度與響應值之間應有一定的關系。第二、檢測限和定量限1.檢測限：20份空白樣品測定均值加3倍標準差。2.定量限：應大于標準曲線中濃度點。對于定量方法，應對該濃度樣品至少測定6次進行驗證，而不能通過外延法推斷。第三、臨界值（cut-off值）的確定對于有殘留xian量的藥物，檢測方法的臨界值為20

影響PCR及熒光PCR的因素說明2023/09/08

引物的設計和選擇符合熒光PCR的探針并進行設計對于實時熒光PCR尤其重要?？梢哉f，不合理的設計意味著絕對的失敗。但是，好的設計并不等于好的實驗結果，影響PCR和熒光PCR的因素非常多，下面擇其重要進行介紹。3.1引物退火溫度引物的一個重要參數(shù)是熔解溫度（Tm）。這是當50％的引物和互補序列表現(xiàn)為雙鏈DNA分子時的溫度。Tm對于設定PCR退火溫度是必需的。在理想狀態(tài)下，退火溫度足夠低，以保證引物同目的序列有效退火，同時還要足夠高，以減少非特異性結合。合理的退火溫度從55℃到70℃。退火溫度一般設定

質粒干粉制作步驟與注意事項2023/09/08

一、質粒干粉介紹質粒干粉是指利用細菌體內大量生產(chǎn)的質粒進行篩選、培養(yǎng)、破碎和干燥后得到的干燥粉末狀物，常用于實驗室內存儲和運輸質粒DNA。下面，我們將介紹如何制作質粒干粉。二、制作步驟1.質粒篩選：根據(jù)需要選取目標質粒，并在含有適宜選擇抗生素的LB、TB等培養(yǎng)基中培養(yǎng)細菌。2.培養(yǎng)基選擇：選擇適宜的培養(yǎng)基，如含Tetracycline混合液的LB培養(yǎng)基，使選擇抗生素起到擴增選擇的作用。3.細胞破碎：將經(jīng)過選擇和培養(yǎng)的菌體在破碎液（如20%蔗糖、50mMTris-HCl等）中進行破碎，從而釋放出目

采集實驗室植物樣品的流程2023/09/07

一、采樣的一般原則(1)代表性:選擇能代表總體的一定數(shù)量的植株為樣品,采集作物或蔬菜時不能采集田埂、地邊及離田埂2m以內的樣品;若采集水生植物則應注意離開污染物排放口適當距離。(2)典型性:采樣部位要能反映所需了解的情況,不能將植株部位隨意混合。(3)適時性:根據(jù)研究的需要,在植物不同的生長發(fā)育階段,定期采樣。二、樣品采集量植物樣品的特點是含水量特別高,其莖葉部分可高達80%～90%,枝干部分也在20%以上,因而樣品的采集量需考慮到樣品部位及后續(xù)檢測是否夠用。一般要求至少有1kg的干重樣品,因而

凍干粉針異常與解決措施2023/09/07

凍干粉針基本存在的現(xiàn)象如下：現(xiàn)象一：含水量超標凍干粉針劑質量標準中規(guī)定的含水量較低。造成其含水量超過標準的主要原因是：裝入容器的藥液過多，藥液層過厚；干燥過程中供熱不足，使其蒸發(fā)量減少；真空度不夠，水蒸氣不能順利排出；冷凝室溫度偏高，不能有效地將水蒸氣捕集下來；凍干時間較短；真空干燥箱的空氣濕度高；出箱時制品溫度低于室溫而出現(xiàn)制品吸濕等。措施：生產(chǎn)人員須針對不同原因采取相應的解決方法。如按藥液體積調整西林瓶規(guī)格，減少裝液厚度，一般應控制在10~15mm；加強熱量供給，促進水分蒸發(fā)；檢查真空度不高

凍存細胞注意事項，必看！2023/09/06

咱就是說細胞想要長期保存，那肯定是需要凍存起來放液氮保存。那怎樣凍存細胞才能保證細胞能正常復蘇，不至于凍存死亡呢？下面遠慕就來講講細胞凍存應該注意的一些地方。1.保持凍存前細胞狀態(tài)良好凍存前一定要保證細胞狀態(tài)良好，細胞處于對數(shù)生長期，否則不管后面怎么處理，凍存后的細胞狀態(tài)必然有影響。若細胞密度偏高，培養(yǎng)基已經(jīng)略微變黃，細胞狀態(tài)正常，需要換液培養(yǎng)2h以上再凍存細胞；若已wan全變黃，細胞死亡超過20%，需要傳代后再重新培養(yǎng)至狀態(tài)正常后再凍存細胞。2.消化、吹打細胞按盡量輕柔如何正確消化、吹打細胞在

ATCC的菌種復蘇操作步驟2023/09/06

ATCC菌種可以采取一些方法進行復蘇，從而激活它們的生長。一般在實驗室中進行，在操作過程中要按照嚴格的步驟進行，確保菌種的有效存活率。下面遠慕為大家介紹一下菌株復蘇步驟，一起來看看吧。ATCC的菌種如何復蘇？1、檢查產(chǎn)品的有效期，按照說明書準備好菌株復蘇所需要的用具與培養(yǎng)基平板、斜面。2、用75%酒精對產(chǎn)品表面進行消毒。待干，按照瓶藍蓋上箭頭方向剝開密封包裝。3、調校移液槍（或準備無菌吸管）。吸取配套的復蘇液體約300-500uL。4、將復蘇液直接添加到凍干菌粉瓶中，塞上膠塞后輕輕震蕩，使其充分

昆蟲細胞培養(yǎng)的重要點介紹2023/09/05

細胞培養(yǎng)作為很多實驗的基礎，在生物工程領域的重要性不言而喻。現(xiàn)在，隨著昆蟲桿狀病毒表達載體系統(tǒng)（BEVS）的廣泛應用，昆蟲細胞的體外培養(yǎng)也越來越受到重視。從1915年，昆蟲細胞培養(yǎng)起始，經(jīng)過一百多年的發(fā)展，已在細胞、分子、醫(yī)學等方向廣泛應用。目前，常用于培養(yǎng)的昆蟲細胞以草地貪夜蛾細胞株Sf9和Sf21，以及粉紋夜蛾細胞株Tn5B1-4（商品名HighFive）為主。下面遠慕以Sf9為例，具體講解一下昆蟲細胞培養(yǎng)的要點：細胞基本信息：Sf9昆蟲細胞系來自雌性草地貪夜蛾卵巢組織，是利用桿狀病毒表達系

標準物質的制備過程2023/09/05

標準物質的制備是一個關鍵的過程，確保其質量和可追溯性。下面是標準物質的制備一般步驟：確定目標物質和純度要求：確定所需的目標物質以及其純度要求。這可能涉及從商業(yè)供應商購買純品，從自然來源提取物質，或者通過化學合成等方式制備目標物質?；诙糠治龇椒ǎ航⑦m當?shù)亩糠治龇椒?，以確保目標物質的含量可以準確地測量。這通常涉及使用已知濃度的標準物質進行校準和驗證。制備溶液或混合物：根據(jù)定量分析方法，準備目標物質的溶液或混合物。這可能包括將目標物質溶解于適當?shù)娜軇┲?，并按照特定的配比混合。純化和分離：如果目

標準品常見的容器取用方法2023/09/04

標準品一詞常作為泛稱。在色譜分析工作中，我們進行樣品理化分析時常用的標準品大多屬于“化合物純度/濃度標準品”。此時，“標準品”這一稱呼涵蓋了非醫(yī)藥行業(yè)常說的“標準物質”、“標準樣品”以及醫(yī)藥行業(yè)常說的“中藥對照品”、“化學對照品”等?！皹藴势贰币辉~作為特指時，專指藥典體系標準物質中的“標準品”?！吨袊幍洹匪牟?291國家藥品標準物質通則中有明確定義，此部分內容目前在2020版藥典中未作修訂。常見容器包括不同規(guī)格的玻璃安瓿瓶與帶蓋玻璃瓶。通常情況下，固體、半固體純品通常使用帶蓋玻璃瓶裝，也有使用

購買的標準品量很少時，如何稱重？2023/09/04

請根據(jù)您需要稱量的重量和容許誤差選擇合適的天平。如稱量少于10mg的產(chǎn)品,建議使用十萬分之一的分析天平。在購買產(chǎn)品時也請注意產(chǎn)品的重量能否滿足您的需求。一般采用增量法或減量法進行稱量,以下是一些建議供您參考:a.稱量前：建議將產(chǎn)品直立放置一段時間，使產(chǎn)品全部集中至底部，便于取用。尤其是粘稠狀物質，可以傾斜至與豎直方向呈45度，使產(chǎn)品集中在瓶底邊緣。如果當心瓶蓋上有粘附，可以在未打開瓶蓋前甩動瓶身，使產(chǎn)品集中至瓶底。b.粉末或晶體：建議采用增量法稱量，準備合適的干燥容器，歸零后將產(chǎn)品傾倒在容器內，