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牛血清白蛋白(BSA)試驗應用介紹2023/09/01

牛血清白蛋白（BSA），是牛血清中的一種球蛋白，包含607個氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應用。主要成分：1.蛋白質——是牛血清中主要成份。除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外主要還有白蛋白，球蛋白。2.多肽——血小板促生長因子能促細胞分裂，是多肽家庭的主要成員之一，是主要的促細胞增殖因子；成纖維細胞生長因子、表皮細胞生長因子、神經細胞生長因子等，血清中含量雖很少，但對細胞生長也有一定作用。3.激素——胰島素：促進細胞攝取葡萄

單克隆抗體制備的基本原理與過程2023/09/01

單克隆抗體制備的原理：B淋巴細胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力、B細胞的這種能力和量是有限的,不可能持續(xù)分化增殖下去，因此產生免疫球蛋白的能力也是極其微小的、將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，再進一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤的無限生長的能力，又具有產生特異性抗體的B淋巴細胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細胞進行培養(yǎng)或注入小鼠體內即可獲得大量的高效價、單一的特異性抗體.這種技術即稱為單克隆抗體技術。單克隆抗體制備的過程：免疫

電泳緩沖液的作用介紹2023/08/31

緩沖液在電泳過程中的一個作用是維持合適的pH。電泳時正極與負極都會發(fā)生電解反應，正極發(fā)生的是氧化反應（4OH--4e-2H2O+O2)，負極發(fā)生的是還原反應（4H++4e-2H2)，長時間的電泳將使正極變酸，負極變堿。一個好的緩沖系統(tǒng)應有較強的緩沖能力，是溶液兩極的pH保持基本不變。電泳緩沖液的另一個作用是使溶液具有一定的導電性，以利于DNA分子的遷移，例如，一般電泳緩沖液中應含有0.01-0.04mol/L的Na+離子，Na+離子的濃度太低時電泳速度變慢；太高時就會造成過大的電流使膠發(fā)熱甚至熔

電泳法分離混合蛋白質的基本原理2023/08/31

不同的電泳法有不同的原理，下面是其不同的方法和原理。（一）一般是通過生化方法吧蛋白提取出來，蛋白質帶有電荷么，是將混合樣品中的蛋白質，其原理是第一向基于蛋白質PI不同用等電聚焦，電泳時的正極與負極都會發(fā)生電解反應，向著與其電性相反的電極移動的現(xiàn)象稱為電泳。（二）利用溶解度差別影響蛋白質溶解度的外部因素有：1、溶液的pH；2、離子強度；3、介電常數(shù)；4、溫度。但在同一的特定外部條件下，不同蛋白質具有不同的溶解度。1、等電點沉淀：原理：蛋白質處于等電點時，其凈電荷為零，由于相鄰蛋白質分子之間沒有靜電

有機化合物的主要特點介紹2023/08/30

有機化合物的主要特點介紹：1.有機化合物數(shù)目繁多，且自成系統(tǒng)有機化合物之所以數(shù)目眾多，主要有兩個原因：（1）碳原子彼此之間能夠進行多種方式的結合，生成穩(wěn)定的、長短不同的直鏈、支鏈或環(huán)狀化合物；（2）碳是周期表中第二周期第四族的元素，不僅能與電負性較小的氫原子結合，也能與電負性較大的氧、硫、鹵素等元素形成化學鍵。有機化合物的數(shù)目雖然很多，但根據(jù)它們之間的相互關系，可以統(tǒng)一在一個完整的體系中。2.熱穩(wěn)定性差容易燃燒與典型的無機化合物相比，有機化合物一般對熱是不穩(wěn)定的，有的甚至常溫下就能分解。雖然大多

化合物純度的鑒定方法2023/08/30

TLC純度的鑒定：1展開溶劑的選擇，不只是至少需要3種不同極性展開系統(tǒng)展開，是首先要選擇三種分子間作用力不同的溶劑系統(tǒng)，如氯/仿\甲醇，環(huán)己/烷\乙酸乙酯，正/丁醇\醋酸\水，分別展開來確定組分是否為單一斑點。這樣做的好處是很明顯的，通過組份間的各種差別將組分分開，有可能幾個相似組份在一種溶劑系統(tǒng)中是單一斑點，因為該溶劑系統(tǒng)與這幾個組分的分子間力作用無顯著的差別，不足以在TLC區(qū)分。而換了分子間作用力不同的另一溶劑系統(tǒng)，就有可能分開。這是用3種不同極性展開系統(tǒng)展開所不能達到的。2對于一種溶劑系統(tǒng)

流動相的緩沖溶液制備注意事項2023/08/29

在制備液相流動相時，最讓人頭疼的一件事莫過于配緩沖鹽和調pH了，但是這確實準確配置流動相的關鍵，接下來遠慕就和大家一起看看準確配備流動相的緩沖溶液的原則和需要注意的事項。緩沖溶液是指由弱酸及其共軛堿（或弱堿及其共軛酸）所組成的緩沖對配制的，且能夠在加入少量強酸或強堿時，可以有效減緩pH值改變的水溶液。緩沖溶液能幫助維持分析方法的穩(wěn)定，而不會因為微弱的環(huán)境改變的情況下而造成分析結果的改變。緩沖溶液是被用來維持pH值的穩(wěn)定。它們是通過維持弱酸及其共軛堿的平衡從而防止了pH值的改變。緩沖溶液是如何工作

實驗室一些典型的問題解答2023/08/29

一、標準溶液是自己配制出來的，它屬于標準物質嗎？要怎么做期間核查呢？參考解答：標準溶液是自己配制出來的，它屬于標準物質，需要做期間核查（如果在很短時間內用完了，這種情況不用核查）期間核查時候要區(qū)別是CRM還是RM，一般核查的時候主要關注標準物質1、性狀是否發(fā)生變化2、是否在有效期內3、外觀是否變化，比如是否渾濁4、保存的環(huán)境條件是否合適必要時可以用些技術手段看看試劑值是否發(fā)生明顯變化。但是實驗室一般不能對標準物質進行定值。標準物質值是否變化和對標準物質定值是2個問題。二、作為企業(yè)內部實驗室，因涉

細胞免疫熒光的詳細操作步驟2023/08/28

細胞免疫熒光的詳細操作步驟1，取出細胞爬片放到35mm或60mm用過的細胞培養(yǎng)皿里，PBS洗三遍。注意有的時候作的細胞爬片可能比較小，因此夾取的時候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分鐘，PBS洗三遍。3，0.2%TritonX100通透10分鐘，PBS洗三遍。4，與二抗相同宿主的血清封閉30分鐘，PBS洗三遍。5.，一抗4度濕盒內過夜，也可37度2小時，感覺前者效果好，PBS洗三遍。6，二抗室溫2小時，或者37度1半小時，PBS洗三遍。7，最好用DAPI染核，然后直接照熒光片。8，蒸餾水洗掉PB

滴定分析的化學反應要具備的條件2023/08/28

滴定分析的化學反應要具備的條件（1）反應必須按方程式定量地完成，通常要求在99.9%以上，這是定量計算的基礎。（2）反應能夠迅速地完成（有時可加熱或用催化劑以加速反應）。（3）共存物質不干擾主要反應，或用適當?shù)姆椒ㄏ涓蓴_。（4）有比較簡便的方法確定計量點（指示滴定終點）。滴定分析分析法有以下兩種：1、直接滴定法：用滴定液直接滴定待測物質，以達終點；2、間接滴定法：直接滴定有困難時常采用以下兩種間接滴定法來測定：a、置換法：利用適當?shù)脑噭┡c被測物反應產生被測物的置換物，然后用滴定液滴定這個置換

緩沖溶液的配置和計算2023/08/25

緩沖溶液的配置和計算1.選擇緩沖對選擇緩沖對的原則：①緩沖對中共軛酸的pKa≈pH；②所選緩沖對除可與H+或OH-反應外,不能與反應系統(tǒng)中的其它物質發(fā)生副反應；③低毒、經濟.2.配制①選定緩沖對后,根據(jù)緩沖溶液pH計算公式pH=pKa-lg(ca/cb),計算ca/cb值；②使c總=0.01~0.1mol·L-1之間,分別計算所需酸、堿量；③按計算結果準確稱或量取試劑,按實驗室一般溶液配制方法配制并定容；④用酸度計測定所配緩沖溶液的pH值,貼標簽.緩沖溶液的緩沖原理具備緩沖作用的緩沖溶液，通常針

各種純度的試劑區(qū)別介紹2023/08/25

科研實驗中小伙伴免不了和各種試劑打交道，分析純、優(yōu)級純、色譜純這些詞早已耳熟能詳，那他們具體指的是什么呢？今天遠慕就帶大家一起回顧一下試劑的分類，快來查漏補缺吧！目前我國的試劑規(guī)格基本上按純度（雜質含量的多少）劃分，分為高純、光譜純、基準、分光純、優(yōu)級純、分析和化學純7種。國家和主管部門頒布質量指標的主要有優(yōu)級純、分析純和化學純3種。優(yōu)級純（GR，綠標簽）（一級品）：主成分含量很高、純度很高，適用于精確分析和研究工作，有的可作為基準物質。分析純（AR，紅標簽）（二級品）：主成分含量很高、純度較高

滴定分析法的滴定誤差解析2023/08/24

1、滴定誤差要求：以不確定度表示，≤±0.2%；2、滴定誤差分類：主要包括稱量誤差、量器誤差、方法誤差。（1）稱量誤差每次稱量誤差：±0.0001g，一份試樣稱量誤差±0.0002g，若相對誤差±0.1%，則每一份試樣的稱量至少為0.2g。（2）量器誤差滴定管讀數(shù)誤差：±0.01ml,一份試樣量取誤差±0.02ml，若相對誤差±0.1%，則每一份試樣體積量至少為±20ml（3）方法誤差：主要是終點誤差。其原因有：指示劑不能準確地在化學計量點時改變顏色；標準溶液的加入不可能恰好在指示劑變色時結束；

EDTA標準溶液的配制與標定2023/08/24

EDTA標準溶液的配制：稱取EDTA約14.6g，置小燒杯中，用熱水溶解后，加蒸餾水稀釋至1000ml，搖勻備用。EDTA標準溶液的標定：常用基準物ZnO、Zn粒、CaCO3等標定，用EBT或XO作指示劑。取0.2gZnO固體（經750℃~850℃高溫烘烤約1h），用少量水潤濕，加入3mLHCl（1+1）溶液，移入250mL容量瓶定容，取35~40mL上述定溶液，用10%氨水調節(jié)pH于7~8，加入10mL氨-氯化銨緩沖溶液（pH=10），并加少量鉻黑T，用定容后的EDTA-Na2溶液進行滴定，溶

幾種蛋白質的提取方法介紹2023/08/23

人的生命活動不能缺少蛋白質，很多食物里面都含有蛋白質成分，正常的飲食可以為身體補充蛋白質。實際上，在生物化學研究領域，蛋白質的分離提取技術具有廣泛的應用，想要把蛋白質提取出來非常不容易，需要經過很多工序，并且要找到專業(yè)的操作技術，現(xiàn)在有下列這些方法可以提取蛋白質。1、超速離心法此法分離和純化抗原的原理是利用各顆粒在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度梯度層內，達到彼此分離的目的。常用的密度梯度介質有蔗糖、甘油、CsCl等。用超速離心或梯度密度離心分離和純化抗原時，除個別成

抗體和重組蛋白的使用方法及儲存方式2023/08/23

無論是保存還是運輸，請避免反復凍融。反復凍融，冰晶會破壞抗體和重組蛋白的空間結構，導致蛋白變性形成多聚體和重組蛋白構象改變，從而降低抗體的結合能力，也加快了抗體球蛋白和重組蛋白的降解速度?？贵w和重組蛋白保存得當與否，直接決定了抗體和重組蛋白的活性使用效果，如果保存得當，抗體和重組蛋白活性大部分都可以維持數(shù)年。1.收到抗體和重組蛋白后的操作收到抗體和重組蛋白后（大部分抗體和重組蛋白是溶液態(tài)），請務必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，再打開管蓋進行分裝、溶解和保存（如果抗體和重組蛋白體積小于50

如何高效高質量低風險的完成實驗？2023/08/22

實驗室安全最重要1.進入實驗室要穿好工作服，不要存僥幸心里，如果一不小心碰到酸，心愛的衣服燒個洞是小事，燒傷皮膚就麻煩了。不要嫌麻煩，一定要戴手套才做對身體有危害的實驗，要對自己的身體負責。2.實驗前后清潔洗手，如果，實驗中途去休息喝水的時候，也要洗手，不要以為剛才的實驗藥品沒什么毒性，生命很重要，小心為妙，另外，如果手很臟還可能沾污實驗儀器和試劑、樣品，引起實驗誤差。干活的時候，不要不管手上沾了什么都往白大褂上擦。3.涉及到易揮發(fā)或有毒物品時一定要在通風柜操作。4.一定要處理好廢液，分類處理，

微生物實驗室消毒處理方法，必看！2023/08/22

一、無菌室1.紫外線消毒①在室溫20℃~25℃時,220V30W紫外燈下方垂直位置1.0m處的253.7mm紫外線輻射強度應≥70uW/cm2,低于此值時應更換。適當數(shù)量的紫外燈,確保平均每立方米應不少于1.5W。②紫外線消毒時,無菌室內應保持清潔干燥。③在無人條件下,可采取紫外線消毒,作用時間應≥30min。室內溫度40℃、相對濕度大于60%時,應適當延長照射時間。④用紫外線消毒物品表面時,應使照射表面受到紫外線的直接照射,且應達到足夠的照射劑量。⑤人員在關閉紫外燈至少30min后方可入內作業(yè)

重組質粒(dna recombinant plasmid)的連接簡介2023/08/21

質粒具有穩(wěn)定可靠和操作簡便的優(yōu)點。如果要克隆較小的DNA片段(＜10kb)且結構簡單，質粒要比其它任何載體都要好。在質粒載體上進行克隆，從原理上說是很簡單的，先用限制性內切酶切割質粒DNA和目的DNA片段，然后體外使兩者相連接，再用所得到重組質粒轉化細菌，即可完成。但在實際工作中，如何區(qū)分插入有外源DNA的重組質粒和無插入而自身環(huán)化的載體分子是較為困難的。通過調整連接反應中外源DNA片段和載體DNA的濃度比例，可以將載體的自身環(huán)化限制在一定程度之下，也可以進一步采取一些特殊的克隆策略，如載體去磷

常見的輔酶功能特點介紹2023/08/21

常見的輔酶硫胺素即維生素B1。它在生物體內的輔酶形式是硫胺素焦磷酸(TPP)。硫胺素焦磷酸過去也稱為輔羧酶。它在動物糖代謝中起著重要作用，例如丙酮酸在脫羧作用時需要它。在TPP缺少的情況下，代謝中間物丙酮酸不能順利脫羧會積聚于血液和組織中而出現(xiàn)神經炎癥狀。TPP還是其他酶例如-酮酸氧化酶、轉酮醇酶的輔酶。TPP催化的酶反應還需要有鎂離子的存在。煙酰胺是一系列酶類的輔酶的前體。很早就知道煙酰胺可以防止糙皮病。1904年已知酒精發(fā)酵時不能缺少一種叫輔酶Ⅰ的物質，1933年這種輔酶Ⅰ被分離出來。193