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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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海藻及海洋細(xì)菌的DNA制備方法2021/11/02
眾suo周知,海藻由于富含多糖,DNA提取是一大難題,以下是在試驗(yàn)過程中收集的海藻DNA制備方法,經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證可行,現(xiàn)在貼出來,以觴眾戰(zhàn)友。一、可大量培養(yǎng)的海洋細(xì)菌1、取1ml目的菌菌液至1.5ml的EP管中,5000r/m離心5分鐘棄上清,菌體加入500μl水洗滌一次,5000r/m離心5分鐘,棄上清,向菌體中加入200μl懸浮緩沖液。2、在200μl懸浮緩沖液中加人55℃Tirs飽和酚200μl和10%的SDS45μl混勻,在微型蝸旋混和儀上混勻,55℃溫浴15分鐘,并且不斷振蕩混勻。3、12
生物技術(shù)常用實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單介紹2021/11/01
一、總RNA的提?。═rizol法提?。┰谑占缴锊牧现?,最好能即刻進(jìn)行RNA制備工作。若需暫時(shí)儲(chǔ)存,則應(yīng)以液氮將生物材料急速冷凍后,儲(chǔ)存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時(shí),將儲(chǔ)存于冷凍柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破細(xì)胞,不可以先行解凍,以避免RNase的作用。1.提取組織RNA時(shí),每50~100mg組織用1mlTrizol試劑對(duì)組織進(jìn)行裂解;提取細(xì)胞RNA時(shí),先離心沉淀細(xì)胞,每5-10╳106個(gè)細(xì)胞加1mlTrizol后,反復(fù)用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細(xì)胞;2.將上述組織或細(xì)胞的T
pcr產(chǎn)物的純化與回收實(shí)驗(yàn)報(bào)告2021/11/01
PCR產(chǎn)物的直接純化:一、原理PCR產(chǎn)物一般都含有過量的引物、TaqDNA酶及dNTP,這些成分的存在將直接影響到后續(xù)的酶切、雙脫氧PCR測(cè)序反應(yīng)等過程,因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多,商用化試劑盒的出現(xiàn)使得DNA的純化過程變得更加簡(jiǎn)便快捷。本實(shí)驗(yàn)中,BufferPCR-A促使大于100bp的DNA片斷選擇性地吸附到silica膜上。經(jīng)BufferW.BufferW2洗滌去除殘留在sica膜上的小于50-mer的引物、酶蛋白、單核苷酸、熒光染料或放射性同位素標(biāo)記的單核苷酸后,吸附到si
瓊脂糖凝膠電泳回收PCR產(chǎn)物2021/11/01
一.原理DNA--pian斷的分離與回收是基因工程操作中的一項(xiàng)重要技術(shù),例如可收集特定酶切片斷用于克隆或制備探針,回收PCR產(chǎn)物用于再次鑒定等?;厥諏?shí)驗(yàn)中兩個(gè)最重要的技術(shù)指標(biāo)是純度和回收率:前者未達(dá)標(biāo)時(shí)會(huì)嚴(yán)重影響以后的酶切、連接、標(biāo)記等酶參與的反應(yīng);后者不理想時(shí)往往會(huì)大大增加前期的工作量。本實(shí)驗(yàn)采用的是V-GENE公司的DNA凝膠回收試劑盒,其原理是:在凝膠融化液(BufferDE-A)中凝膠塊被迅速融化并釋放出DNA。加入高離液序列溶液(BufferDE-B)后DNA--pian斷被選擇性吸附
PCR產(chǎn)物的檢測(cè)方法你知道幾種?2021/11/01
PCR產(chǎn)物的檢測(cè)方法:瓊脂糖凝膠電泳這是實(shí)驗(yàn)室最chang用的方法,簡(jiǎn)便易行,只需少量DNA即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其原理是不同大小的DNA分子通過瓊脂糖凝膠時(shí),由于泳動(dòng)速度不同而被分離,經(jīng)溴化乙錠(EB)染色,在紫外光照射下DNA分子發(fā)出熒光而判定其分子的大小。用于電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物的瓊脂糖濃度常為1%—2%,應(yīng)該使用純度高的電泳純級(jí)瓊脂糖,這種瓊脂糖已除去了熒光抑制劑及核酸酶等雜質(zhì)。(1)制膠瓊脂糖凝膠厚度約為3~5mm。過薄則加樣孔樣品會(huì)溢出來,過厚觀察時(shí)熒光穿透不強(qiáng)以至有些小片段DNA帶型不易分辨
為了做實(shí)驗(yàn)而做實(shí)驗(yàn)?不會(huì)分析,你是這樣的嗎2021/10/28
一個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目整個(gè)過程,包括實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)步驟、注意事項(xiàng)、儀器數(shù)據(jù)分析、儀器故障排查等這些你都懂了嗎,你是不是也是忙的為了做實(shí)驗(yàn)而做實(shí)驗(yàn)?zāi)??下面小編就從四個(gè)不同的方面跟大家一起探討一下你是哪個(gè)階層呢?一、小白(實(shí)驗(yàn)室新人)剛來實(shí)驗(yàn)室新人內(nèi)心OS:這是什么高大上的儀器,這個(gè)怎么用呢?我不會(huì),誰教教我啊,好想學(xué)。過了一個(gè)月新人內(nèi)心OS:這個(gè)粉碎樣品的工作什么時(shí)候是個(gè)頭,我想學(xué)前處理,這個(gè)粉碎樣品的工作臺(tái)枯燥了!幾個(gè)月以后領(lǐng)導(dǎo)責(zé)問新人:樣品粉碎的標(biāo)準(zhǔn)要求你還沒弄明白嗎?制樣粉碎工作都做不好嗎?出現(xiàn)異常結(jié)
無菌室的使用和管理你造嗎~2021/10/28
潔凈室(無菌室)的使用管理要做到以下工作:1、潔凈室(無菌室)要符合規(guī)范要求:無菌室應(yīng)采光良好、避免潮濕、遠(yuǎn)離廁所及污染區(qū)。面積一般不超過10m2,不小于5m2;高度不超過2.4m。由1—2個(gè)緩沖間、操作間組成(操作間和緩沖間的門不應(yīng)直對(duì)),操作間和緩沖間之間應(yīng)具備滅菌功能的樣品傳遞箱。在緩沖間內(nèi)應(yīng)有洗手盆、毛巾、無菌衣褲放置架及掛鉤、拖鞋等,不應(yīng)放置培養(yǎng)箱和其他雜物;無菌室內(nèi)應(yīng)六面光滑平整,能耐受清洗消毒。墻壁與地面、天花板連接處應(yīng)呈凹弧形,無縫隙,不留死角。操作間內(nèi)不應(yīng)安裝下水道。無菌操作室
實(shí)驗(yàn)室試劑、器皿使用管理制度2021/10/28
試劑、器皿使用管理制度1.試劑、器皿應(yīng)有專人保管,分類存放,并定期檢查使用及保管情況。領(lǐng)用時(shí)需填寫記錄,過期或失效試劑要經(jīng)審核后作報(bào)廢處理。2.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)保存的少量易燃易爆試劑要放在遠(yuǎn)離加熱操作臺(tái)的陰涼通風(fēng)處保管。3.劇毒、危害及易制du品試劑應(yīng)存放在倉庫的專柜內(nèi),由兩人以上人員保管,領(lǐng)用時(shí)要填寫相關(guān)記錄。4.稱取化學(xué)試劑的器皿應(yīng)洗滌干凈,分開使用。固體試劑的取用遵循“只出不進(jìn),量用為出”的原則;液體試劑的取用遵循“只準(zhǔn)傾出,不準(zhǔn)吸出”的原則。5.揮發(fā)性強(qiáng)的試劑必須在通風(fēng)櫥內(nèi)取用。使用揮發(fā)性強(qiáng)的有
安全無小事,實(shí)驗(yàn)室安全準(zhǔn)則!2021/10/28
1)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的學(xué)生必須接受安全教育,自覺服從管理,嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)規(guī)章制度和規(guī)定,嚴(yán)格遵守儀器設(shè)備的操作規(guī)程。2)實(shí)驗(yàn)前要認(rèn)真閱讀教材,實(shí)驗(yàn)參考書和有關(guān)參考資料,做好實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)報(bào)告,并按照任課教師的要求做好實(shí)驗(yàn)前各項(xiàng)準(zhǔn)備工作。部分實(shí)驗(yàn)室需要穿著必要的規(guī)范服裝。3)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后,要嚴(yán)格服從實(shí)驗(yàn)教師的指導(dǎo),按照zhi定座次就位,簽名,遵守安全規(guī)則,嚴(yán)禁穿背心、吊帶裝、拖鞋、高跟鞋等進(jìn)實(shí)驗(yàn)室;嚴(yán)禁吸煙、吐痰、亂扔紙屑,不在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)食,飲水。4)開始任何實(shí)驗(yàn)操作前,需了解所有物理、化學(xué)、生物方面的潛
實(shí)驗(yàn)室知識(shí)分享:實(shí)驗(yàn)室物品的驗(yàn)收與處理!2021/10/27
實(shí)驗(yàn)室物品都是要求比較高的,一般情況下,做實(shí)驗(yàn)室耗材或者實(shí)驗(yàn)室用品的公司都是比較嚴(yán)謹(jǐn)?shù)模彩琴|(zhì)量控制比較嚴(yán)格,很多自己都是有實(shí)驗(yàn)室的,做一些物品開發(fā)和一些應(yīng)用方案,這樣自己做過的應(yīng)用方案會(huì)更加保證自己的耗材或者試劑適合標(biāo)準(zhǔn)方法。實(shí)驗(yàn)室作為實(shí)驗(yàn)室物品最終使用者,一般是實(shí)驗(yàn)室的兼職驗(yàn)收者,由于實(shí)驗(yàn)室物品品類較多,一般我們是給予供應(yīng)商分級(jí)的,一級(jí)供應(yīng)商,一般是免檢,只檢查數(shù)量,一般是長(zhǎng)期合作供應(yīng)商,一直貨品都有保證;二級(jí)供應(yīng)商,一般是專業(yè)性的,比如標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)公司,比如計(jì)量器具公司等,一年可能采購數(shù)量和總
實(shí)驗(yàn)室測(cè)試樣品管理的重要性2021/10/27
測(cè)試樣品是從整批商品中抽取出來作為產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)所需,它的作用是,依據(jù)判定標(biāo)準(zhǔn)和測(cè)試結(jié)果并將生產(chǎn)出的產(chǎn)品作為買賣交易中商品的交付標(biāo)準(zhǔn)而做一判定。因此,任何一個(gè)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室必須對(duì)測(cè)試樣品進(jìn)行規(guī)范管理。如何做好樣品的管理,筆者認(rèn)為,須從以下幾個(gè)方面做好樣品管理工作。測(cè)試樣品的獲取測(cè)試樣品的獲取一般有這么幾個(gè)渠道,一是顧客送樣,二是實(shí)驗(yàn)室接受委托,到采樣現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行樣品的采集,將采集的樣品做為實(shí)驗(yàn)室測(cè)試樣品。這個(gè)環(huán)節(jié)是基礎(chǔ),無論是客戶送樣還是實(shí)驗(yàn)室自己采集樣品,都要認(rèn)真對(duì)待。特別是客戶委托對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行判定的情況
科研人必看:實(shí)驗(yàn)室固、液樣品取樣原則2021/10/27
在實(shí)驗(yàn)過程中取用固體樣品和液體樣品是我們常做的事,所以掌握藥品及試劑的取用、稱量和溶解就是非常必要的。固體藥品的取用原則1.“三不”原則,即“不聞、不摸、不嘗”;具體說就是:不要去聞藥品的氣味,不能用手觸摸藥品,不能嘗試藥品的味道。2.節(jié)約原則,即嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)規(guī)定的用量取用藥品;如果沒有說明用量,一般按最少量(1~2mL)取用液體,固體只需蓋滿試管底部即可。最大量,液體不超過容器容積的1/3,固體不超過1/2。3.“三不一要”原則,即實(shí)驗(yàn)用剩的藥品不能因?yàn)橐肮?jié)約”而放回原試劑瓶,這樣做會(huì)污染試
只會(huì)檢測(cè)那怎么行?看看采樣、留樣相關(guān)知識(shí)吧!2021/10/27
對(duì)于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)來說,采樣、留樣(包括成品留樣和物料留樣),樣品采集應(yīng)該按照何種原則來,留樣應(yīng)該如何管理?這些問題你是否考慮過?今天一起來看看檢測(cè)室采樣、留樣及樣品管理制度吧。1、目的為了保證分析數(shù)據(jù)、樣品的準(zhǔn)確性和具有可追溯性,便于抽查、復(fù)查、滿足監(jiān)督管理要求,分清質(zhì)量責(zé)任,特制訂本管理制度。2、依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)本管理制度在安全采樣方面依據(jù):GB3727《工業(yè)化學(xué)產(chǎn)品采樣安全通則》;GB4756《石油液體手工取樣法》;GB6678《化工產(chǎn)品采樣總則》;GB6679《固體化工產(chǎn)品采樣通則》;GB6680《
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選取的四大要素2021/10/26
為了取得有效的試驗(yàn)結(jié)果,有必要依據(jù)試驗(yàn)意圖挑選合適的查詢政策,在挑選動(dòng)物時(shí),需考慮四大要素(種屬、性別、周齡或體重、狀況):種屬的挑選不同種屬的動(dòng)物對(duì)同一疾病病因影響的反響程度會(huì)有很大的差異。在挑選試驗(yàn)動(dòng)物時(shí),盡可能挑選對(duì)影響要素較為活絡(luò)且與人類靠近的種屬。例如在進(jìn)行發(fā)熱試驗(yàn)時(shí),宜家兔:在進(jìn)行過敏反響和失常反響試驗(yàn)時(shí),宜豚鼠;小鼠則宜用于半數(shù)致死量等方面的查詢。性別的挑選因?yàn)槌赡甏菩詣?dòng)物的代謝存在著顯著的性周期的改動(dòng),這些改動(dòng)會(huì)影響受試動(dòng)物對(duì)某些試驗(yàn)要素的反響狀況。因此在挑選試驗(yàn)動(dòng)物時(shí),一般多用
血液標(biāo)本放置時(shí)間對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響2021/10/26
血液標(biāo)本放置時(shí)間對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響1、對(duì)血清電介質(zhì)濃度測(cè)定的影響,試驗(yàn)結(jié)果表明血清鉀放置1h后與即刻比較明顯升高,差異有顯著意義(P2、對(duì)乳酸濃度的影響,血樣在室溫下放置15min,乳酸濃度明顯升高,高差異有顯著意義(P3、對(duì)血糖測(cè)定結(jié)果的影響,血清葡萄糖因血細(xì)胞的糖酵解每小時(shí)會(huì)降低7%,故采血后應(yīng)立即檢測(cè),如無條件,應(yīng)及時(shí)分離血清。4、對(duì)心肌酶譜的影響,試驗(yàn)結(jié)果顯示肌酸激酶的活性隨時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷下降,乳酸脫氫酶由于紅細(xì)胞的通透性改變,血清中酶活性不斷上升,羥丁酸脫氫酶活性也在放置過程中不斷上升
牛血清實(shí)驗(yàn)中常見的問題解析!2021/10/26
胎牛血清通常在細(xì)胞培養(yǎng)中作為基礎(chǔ)生長(zhǎng)培養(yǎng)基的添加劑,在細(xì)胞培養(yǎng)中,血清供應(yīng)了豐富的高分子蛋白,低分子量營(yíng)養(yǎng)物,疏水載體蛋白和其他體外細(xì)胞生長(zhǎng)必要的成分如激素和粘附因子。同時(shí),胎牛血清可以增加培養(yǎng)基的緩沖能力或中和有毒成分,起到保護(hù)細(xì)胞的作用。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中是否選擇添加血清,主要根據(jù)基礎(chǔ)培養(yǎng)基化學(xué)成分,培養(yǎng)細(xì)胞的類型和培養(yǎng)體系而定。今天給大家分享的是牛血清實(shí)驗(yàn)中常見的問題解析!搬起小板凳快來圍觀吧!血清實(shí)驗(yàn)中常見的問題解析:一、如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后,先置于
各種類的動(dòng)物血清與它們的用途2021/10/26
1、透析血清分子量小于10,000的分子如氨基酸、葡萄糖、鹽離子和未結(jié)合的蛋白均被移除。透析血清主要用在進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)化和標(biāo)定特定成分進(jìn)行研究的實(shí)驗(yàn)中。2、碳吸附血清使用活性和右旋糖苷去除血清中的親脂類(lipophilic)物質(zhì),如某些激素、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等,去除作用對(duì)分子量大小并無區(qū)分。碳吸附胎牛血清常用于體外培養(yǎng)研究驗(yàn)證激素的作用效果。3、去外泌體血清適用于收集細(xì)胞分泌的外泌體時(shí)使用。4、低IgG血清用于研究抗體、病毒和病毒反應(yīng)、細(xì)胞表面抗原表位。5、四環(huán)素血清應(yīng)用于使用敏感四環(huán)素誘導(dǎo)
標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品及參考品的區(qū)別2021/10/25
1.1標(biāo)準(zhǔn)品是指用于鑒別、檢查、含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),用于生物測(cè)定、抗生素或生化藥品中含量或效價(jià)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),按效價(jià)單位或(mg)計(jì),以國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行標(biāo)定。(摘自《中國(guó)藥典》2010年版)1.2對(duì)照品是指用于鑒別、檢查、含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),除另有規(guī)定外,均按干燥品(或無水物)進(jìn)行計(jì)算后使用。(摘自《中國(guó)藥典》2010年版)1.3校準(zhǔn)品即:校準(zhǔn)物,具有在校準(zhǔn)函數(shù)中用作獨(dú)立變量值的參考物質(zhì);應(yīng)具有定值和已知的測(cè)量不確定度,其目的應(yīng)是校準(zhǔn)某一測(cè)量系統(tǒng),從而建立此系統(tǒng)測(cè)量結(jié)果的計(jì)量學(xué)溯源性。(摘自GB/
植物樣品的采取、處理與保存2021/10/25
生物化學(xué)分析的準(zhǔn)確性,除取決于分析方法的選擇是否合適以及全部分析工作是否嚴(yán)格按照要求進(jìn)行外,在很大程度上還取決于樣品的采取是否有最佳的代表性。如果不遵循科學(xué)方法采樣,樣品缺乏代表性,即使分析工作嚴(yán)謹(jǐn)無誤,也得不到正確的結(jié)論。因此,必須對(duì)樣品的采取、處理和保存給予足夠的重視。從大田或?qū)嶒?yàn)田采回的樣品,一般數(shù)量較大,稱為“原始樣品”。再按原始樣品的種類(如根、莖、葉、花、果實(shí)等)分別選出“平均樣品”。再根據(jù)分析任務(wù)的要求和樣品的特征,從平均樣品中選出供分析用的“分析樣品”。由此可見,分析樣品的獲得須
實(shí)驗(yàn)室存在的安全問題及解決方案2021/10/25
近年來實(shí)驗(yàn)室事故頻發(fā),往事歷歷在目。吸取教訓(xùn)、總結(jié)經(jīng)驗(yàn),是預(yù)防事故發(fā)生的最好辦法。目前,大部分實(shí)驗(yàn)室都存在著哪些安全問題?應(yīng)對(duì)這些問題的解決方案又有哪些?實(shí)驗(yàn)室安全面臨的問題技術(shù)方面存在的問題1.規(guī)劃設(shè)計(jì)考慮不周,造成安全隱患由于規(guī)劃設(shè)計(jì)人員對(duì)各類實(shí)驗(yàn)室的功能要求缺乏一定程度的了解,尤其是對(duì)一些特殊實(shí)驗(yàn)室的特殊要求知之甚少,因此在實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的規(guī)劃設(shè)計(jì)中對(duì)設(shè)施和裝備的安全要求考慮不周,工程設(shè)計(jì)上存在漏洞,包括人與機(jī)械、作業(yè)環(huán)境之間匹配不當(dāng)?shù)?,造成了安全隱患。2.安裝防護(hù)門窗,堵塞安全通道近年來,實(shí)
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