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凍存細胞時，還在堅持緩凍原則嗎？2021/10/14

一、我們先來說說何為緩凍：緩凍即為凍存細胞時，要程序降溫——4℃30min，-20℃1h，-80℃過夜，次日投入液氮內。二、那為什么要進行緩凍呢？其實所謂的緩凍是一般使用傳統凍存液凍存過程中需要程序降溫。傳統的凍存液，一般由胎牛血清、DMSO及基礎培養(yǎng)基等組分組成。凍存保護的DMSO組分，在進入細胞后結合細胞內部的水份，降低冰點，防止細胞在冷凍過程中形成冰晶對細胞造成損害。但是DMSO只能在細胞內部保護細胞，細胞外部沒有保護，水結冰晶會在細胞膜外部受到損傷，為了防止冰晶過大，使用時必須采用程序降

細胞不貼壁、生長緩慢甚至死亡分析與解決！2021/10/14

在細胞培養(yǎng)過程中會出現這樣或那樣的問題，這些問題從細胞生長角度來說，針對細胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養(yǎng)細胞不貼壁可能原因：胰蛋白酶消化過度；支原體污染；培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；細胞老化；接種細胞起始濃度太低或太高。解決方法：縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2；啟用新的保種細胞；調節(jié)最佳接種細胞濃度。二

幾種血涂片染色方法的比較2021/10/14

血涂片染色廣泛應用于醫(yī)學檢驗和組織學教學片的制作。傳統的染色方法有Wright氏、Giemsa氏和WrightGiemsa混合法，作為醫(yī)學檢驗以簡單快捷為shou選，而要制作教學標本，則對染色效果、標本存放時間要求更高，對此，我們對各種染色方法進行了長期的探索和比較，以期找到較穩(wěn)定的、效果滿意的染色方法用于制作大批量教學標本。1材料與方法1.1采集標本用消毒采血針頭扎刺手指頭或耳垂，滴取黃豆大小血滴于潔凈載玻片上，推成均勻血膜，自然晾干，用甲醇固定2min~5min。大量制作教學標本可一次推出

無處不在的微生物是如何獲得營養(yǎng)？2021/10/13

人需要吃飯，動物需要捕食，連植物也需要在土壤中汲取營養(yǎng)。那么，我們肉眼看不到卻無處不在的微生物如何獲得營養(yǎng)呢？微生物不是專用于生物分類學的名詞，而是指一般需借助顯微鏡才能看清的所有微小生物的統稱，數量龐大且多樣。微生物中的“微”便是它的特點之一，是人眼不能直接看到的，有些微生物只有粉塵那么大，而有些微生物更小，只有在放大幾千倍以上的情況下才能被看見。微生物也是生物，和人一樣，它的存活也需要汲取營養(yǎng)。營養(yǎng)是指生物體從外界環(huán)境中獲取生命活動所必須的能量和物質，來滿足正常生長和繁殖的需要，它是生物的一

AKTA快速蛋白分離系統與HPLC 的優(yōu)劣比較2021/10/13

HPLC優(yōu)點：高壓速度快分析精度高所需樣本量少，主要用于分析純化多肽類缺點：柱子較貴有些需要用乙氰甲醇等有毒有害試劑不能或只能純化很小量的蛋白AKTA系統優(yōu)點：中低壓容易放大可大規(guī)模純化蛋白類常規(guī)只用無機鹽類試劑可配備各種介質純化不同蛋白可自己灌膠費用較少缺點：分析精度沒有HPLC高選用HPLC或AKTA的FPLC主要是依據你的用途而買，分析用HPLC,大規(guī)模純化用FPLCFPLC供小量（小于explorer)制備用，最大流速只有20ml/min。HPLC基本是用做分析用，也可用做微量制備。AK

原核表達實驗心得！2021/10/13

人們合成與生物相關的物質是從尿素開始的，1828年，德國化學家維勒人工合成了存在于生物體的這種有機物。在1960年我國科學家采用化學方法shou次成功地合成了具有生物活性的蛋白質——胰島素。隨著內切酶的發(fā)現和基因工程技術的發(fā)展，人們發(fā)現用各種不同的載體在原核、真核系統中進行蛋白表達更為行之有效。而這其中大腸桿菌表達系統發(fā)展得最為迅速、成熟。原核表達具有操作方便、快捷，需時較短，表達量大，適合工業(yè)化生產等優(yōu)點。雖然也有缺少糖基化和表達后加工等問題，當有了其它多種表達系統后，原核系統仍是我們合成外源

分析化學實驗基本規(guī)范，實驗人了解一下！2021/10/12

1.實驗用水分析化學實驗應使用純水，一般是蒸餾水或去離子水。有的實驗要求用二次蒸餾水或更高規(guī)格的純水(如，電分析化學、液相色譜等的實驗)。純水并非不含雜質，只是雜質含量極微而已。分析化學實驗用水的級別及主要技術指標，見下表。注：在一級、二級純度的水中，難于測定真實的pH值，因此，對其pH值的范圍不作規(guī)定;在一級水中，難于測定其可氧化物質和蒸發(fā)殘渣，故也不作規(guī)定。(1)蒸餾水通過蒸餾方法、除去水中非揮發(fā)性雜質而得到的純水稱為蒸餾水。同是蒸餾所得純水，其中含有的雜質種類和含量也不同。用玻璃蒸餾器蒸餾

化學分析和儀器分析的區(qū)別及特點2021/10/12

化學分析是指利用化學反應和它的計量關系來確定被測物質的組成和含量的一類分析方法。測定時需使用化學試劑、天平和一些玻璃器皿。儀器分析（近代分析法或物理分析法）：是基于與物質的物理或物理化學性質而建立起來的分析方法。這類方法通常是測量光、電、磁、聲、熱等物理量而得到分析結果，而測量這些物理量，一般要使用比較復雜或特殊的儀器設備，故稱為“儀器分析”。儀器分析除了可用于定性和定量分析外，還可用于結構、價態(tài)、狀態(tài)分析，微區(qū)和薄層分析，微量及超痕量分析等，是分析化學發(fā)展的方向。相對于化學分析，儀器分析有以下

常用不穩(wěn)定試劑的分類及管理要求2021/10/12

實驗室中不穩(wěn)定的化學試劑應該怎么保存?化學試劑存放要依據物質自身的物理性質和化學性質，降低或杜絕物質變性、自然損耗。實驗室中有很多不穩(wěn)定的化學試劑。有的易揮發(fā)、有的易燃易爆、有的試劑在保存的時候需要密封保存。常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求(1)與水蒸氣，水發(fā)生反應的物質要密封，并遠離水源保存。如電石(CaC2),生石灰(CaO)，濃硫酸，無水硫酸銅()，各種干燥劑(硅膠，堿石灰，P2O5，CaCl2等)，K,Na,Mg,Na2O2,更要同時具備所有要求。(2)易與氧氣作用的試劑，如亞硫酸鹽，苯酚，亞

化學實驗室里污染物的凈化處理工作！2021/10/12

實驗室里面的化學廢棄物一般分為廢液、無機廢棄物和有機廢棄物等三大類。我們應該找到這幾種廢棄物，根據每一類廢棄物的不同特性跟對環(huán)境的影響，分別使用不同的廢棄物處理辦法進行實驗室凈化。在我們對這些廢棄物進行處理前，我們要先找到這些廢棄物并把他們分門歸類，下面我們先介紹實驗室廢棄物收集都有哪些方法：1.第1類是分類收集法，就是根據廢棄物的不同類別和性質分類收集起來。2.第2類是看實驗室里面的廢棄物，哪種zui多.或者濃度zui濃，根據處理方式的難易進行分類。3.第3類是依據實驗室里面的廢物處理辦法差不

轉染實驗技巧了解一下！2021/10/11

轉染可謂是做生物學實驗的大家經常會考慮的一項實驗技術，大致原理也都是明白的。到底轉染是什么呢，為什么轉染效率不高呢，今天我們就來一起討論一下其中奧妙吧。轉染，就是在真核細胞里導入具有生物功能的核酸，并在細胞中維持其生物功能。轉染方法的選擇我們熟知且常用的轉染方法主要有物理介導，化學介導，生物介導。但實驗室使用較多的主要有化學介導中的脂質體轉染（質粒轉染）和生物介導中的慢病毒轉染法。其中質粒轉染操作簡單，一般瞬時轉染選擇較多，但有些細胞系不容易轉染，因此選擇轉染方式時一定要做足功課，親身經歷告訴我

微生物菌種衰退怎么辦？遠慕教您來預防！2021/10/11

微生物長期受到外界的影響，遺傳性狀必然發(fā)生某些變異。正是由于變異的存在才使得生物向前進化。然而由于突變的存在，菌種在培養(yǎng)或保藏過程中，可能會出現某些優(yōu)良生產性狀的劣化、遺傳標記丟失、典型特征改變等現象，稱為菌種衰退。比如蘇云金芽孢桿菌由于菌種衰退，導致其新生的菌體芽孢和伴孢晶體都比較??；保藏的沙門氏菌鞭毛抗原丟失，導致H多價血清不凝固等。菌種衰退原因菌種衰退的根本原因是有關基因的負突變。如果控制產量的基因發(fā)生負突變，則表現為產量下降；如果控制孢子生成的基因發(fā)生負突變，則產生孢子的能力下降。菌種在

食用菌的制種菌種的鑒定與保存2021/10/11

（一）菌種的鑒定菌種的質量，對食用菌的產量和質量影響極大。因此，在培育菌種時，要認真對待，嚴格把關，選用優(yōu)良菌株，逐級擴大。在投入生產之前，必須進行菌種質量的鑒定，并通過小面積的栽培試驗，證實是優(yōu)良菌種后，再推廣使用。常用鑒別菌種質量的方法，有以下幾種：1.感官鑒別法主要是通過肉眼觀察菌絲的生長情況和用鼻聞菌種的氣味等方式來鑒別菌種。一般優(yōu)良的菌種應具有種性純，菌絲健壯，分枝濃密，生長整齊，無雜菌或老化現象，同時各具有該食用菌的香氣。但由于食用菌的種類和特性不同，對菌種質量的要求也不一樣。蘑菇的

做轉染實驗，別忽視質粒中內毒素！2021/10/09

什么是內毒素？細菌內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁上的一種脂多糖（LipopolySaccharide,LPS）和蛋白的復合物，當細菌裂解時便會大量釋放出來。內毒素單位為EU。內毒素對試驗的影響內毒素存在極大程度地影響轉染效率。同時內毒素還可能激活免疫細胞的非特異反應，造成實驗中的假陽性。因此，為了保證高轉染率和轉染細胞高存活率，必須從質粒制備的過程中將內毒素去除。內毒素和質粒的關系由于內毒素兩親性和負電荷性，性質類似于DNA，因此在質粒純化中會伴隨質粒一同被純化出來。質粒中內毒素含量的高低常用EU/

提取的核酸濃度太低，滿足不了下游實驗要求咋辦？2021/10/09

我們在進行分子生物學實驗的時候，通常會對生物大分子的濃度有一定的要求，比如您要進行轉染實驗，加入細胞的質粒濃度要求在1µg/µl，這樣才能得到比較高的轉染效率?？墒悄樘岬馁|粒濃度只有200ng/µl，這時候該怎么辦呢？如何將質粒濃度濃縮到理想的濃度呢？常用的方法有兩種：乙醇沉淀法和離心濃縮法。乙醇沉淀法：操作步驟：1.估算含有質粒溶液的體積V，加入V/9體積的3MNaAc,使得NaAc終濃度為0.3M2.加入2倍體積的冷無水乙醇，冰上或者-20℃孵育20min3.最大離心速度（＞13000rp

水平電泳中的那些小問題，值得一看！2021/10/09

基因人最近收到不少老師和同學們對水平電泳的小疑惑——TAE和TBE兩個緩沖液有什么區(qū)別?。?00bp的DNA用多少濃度的膠檢測??？水平電泳一般用多大電壓跑??？……是時候給大家講講水平電泳的那些小問題了！不過估計大多數人都知道，不用再看了。1電泳方式用于分離核酸的凝膠電泳可分為垂直型和水平型。垂直型電泳，一般用聚丙烯酰胺作為支撐物。水平型電泳，凝膠板*浸泡在電極緩沖液下1-2mm，也稱為潛水式，一般使用瓊脂糖作為支撐物?？筛鶕龣z測核酸分子的大小，選擇電泳方式。目前使用更多的還是水平型電泳。因制膠

黑色素細胞那些事，你了解嗎？2021/10/09

生活中我們會發(fā)現，不同物種和個體的膚色會表現出區(qū)域特異性。不同長度、厚度，不同身體部位的毛發(fā)色素沉積使我們有了不同的外觀，如：東方人大多是黃皮膚黑頭發(fā)，西方人很多是白皮膚金頭發(fā)?；诤谏氐纳爻练e不僅賦予人體皮膚抵御紫外線（UV）輻射的能力，而且還促進有害物質（如重金屬）從體內排出。黑色素細胞起源于神經嵴，通過真皮遷移到表皮，最后遷移到毛囊。當黑色素母細胞歸巢到毛囊凸起區(qū)域時，分化為黑色素細胞干細胞，黑色素細胞干細胞向下遷移并分化為毛發(fā)基質中的成熟黑色素細胞。成熟的黑色素細胞進一步分化生成黑色

原代細胞的提取方法詳細步驟2021/10/08

原代細胞是通過一定的方法如酶法或機械法或生長法使細胞從人體和動物的母體器官、組織或液體中分離出來，并在受控環(huán)境條件下分離的細胞在體外或其他人體和動物體內生長。原代細胞的提取方法詳細步驟：1)整個操作要在潔凈通風的超凈臺下進行，所有的器材要高壓消毒。2)根據BALB/c小鼠的體重，用10ml/kg3%濃度的戊巴bi妥鈉麻醉；將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內，這一步不僅可以消毒，也可以讓小鼠體毛浸濕，后續(xù)剃去皮毛的時候不會沾到剪刀或組織上。3)用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟，裝有PBS的注射器插入心尖，同

哪些細胞會釋放細胞因子？2021/10/08

細胞因子是由免疫原、有絲分裂原或其他刺激物在各種細胞中誘導的低分子量可溶性蛋白質。它們具有調節(jié)先天免疫和適應性免疫、造血、細胞生長、修復受損組織等多種功能。一般來講，細胞因子由各種細胞產生，包括巨噬細胞、B淋巴細胞、T淋巴細胞和肥大細胞等免疫細胞。除此以外，內皮細胞、成纖維細胞和各種基質細胞都能產生細胞因子。一種特定的細胞因子可能由多種類型的細胞產生。在本文中，我們重點介紹產生細胞因子的細胞。細胞因子的分類根據不同來源細胞產生的細胞因子類型不同，可將細胞因子分為以下三種類型。淋巴因子主要由淋巴細

廢棄的化學廢液及試劑瓶處理方法2021/10/08

隨著高科技生物和醫(yī)療技術的發(fā)展，試劑瓶在需求量不斷上升，由此產生了大量的廢棄試劑瓶。試劑多具有易燃、易爆等特性，那么用完的試劑瓶及廢液該怎樣處理呢？化學廢液處理：1、化學實驗室的廢棄化學實際和實驗產生的有毒有害廢液、廢物，不能隨意倒入下水道，可以經過中和符合廢液排放要求后排放。2、對其它無機廢液應作預處理，使有害物質沉淀，廢液符合排放要求后排放。3、對含銀、含鉻或其它含貴金屬、重金屬的廢液，應分別儲存，盡量回收利用，不得隨意排放。4、遇潮、遇水容易起化學反應及性質不穩(wěn)定、易分解變質的化學藥品和一