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有關(guān)抗原抗體小課堂2021/09/24
1.抗原:引起人體產(chǎn)生抗體的物質(zhì)叫做抗原。(1)抗原(antigen,縮寫Ag)為任何可誘發(fā)免疫反應(yīng)的物質(zhì)。外來分子可經(jīng)過B細胞上免疫球蛋白的辨識或經(jīng)抗原呈現(xiàn)細胞的處理并與主要組織相容性復(fù)合體結(jié)合成復(fù)合物再活化T細胞,引發(fā)連續(xù)的免疫反應(yīng)。(2)抗原反應(yīng)所謂抗原的反應(yīng)原性是指能與由它刺激所產(chǎn)生的抗體或致敏淋巴細胞發(fā)生特異性反應(yīng)。具備免疫原性和反應(yīng)原性兩種能力的物質(zhì)稱為*抗原,如病原體、異種動物血清等。只具有反應(yīng)原性而沒有免疫原性的物質(zhì),稱為半抗原,如青霉素、磺胺等半抗原沒有免疫。原性,不會引起免疫
ELISA實驗洗板的兩種方法2021/09/15
在做ELISA實驗時,洗板有兩種方法:手工法洗板和洗板機洗板。二者沒有本質(zhì)的差別,只要操作合乎要求,均能得到正確、可靠的結(jié)果。手工洗板是每次反應(yīng)溫育后,將反應(yīng)液吸出或甩干,然后在板孔中加滿洗液,放置2~3min后,將洗液吸出或甩干再在吸水紙上拍干。重復(fù)上述洗滌步驟3~4次,最后在吸水紙上拍干即可。手工洗板人為因素比較大,實驗人員必須經(jīng)驗豐富,洗滌次數(shù)要足夠,沖擊力又不要太大,加入的洗液量以剛滿反應(yīng)孔為限,防止孔口內(nèi)有游離酶未能洗凈,同時防止孔與孔之間液體交叉。洗滌結(jié)束后扣干亦非常重要,否則易造成
幾種常用免疫組織化學(xué)技術(shù)的原理2021/09/07
免疫組化技術(shù)的優(yōu)點1、特異性強免疫學(xué)的基本原理決定了抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性,因此,免疫組化從理論上講也是組織細胞中抗原的特定顯示,如角蛋白(keratin)顯示上皮成分,LCA顯示淋巴細胞成分。只有當(dāng)組織細胞中存在交叉抗原時才會出現(xiàn)交叉反應(yīng)。2、敏感性高在應(yīng)用免疫組化的起始階段,由于技術(shù)上的限制,只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù),那時的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍;現(xiàn)在由于ABC法或SP法的出現(xiàn),使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細胞中與抗原結(jié)合,這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)
免疫熒光試劑盒檢測貼壁細胞與懸浮細胞操作指南2021/09/02
細胞,生物學(xué)名詞。構(gòu)成生物體的基本單位。體形極微,在顯微鏡下始能窺見。形狀多種多樣。主要由細胞核與細胞質(zhì)構(gòu)成,表面有薄膜。動植物細胞結(jié)構(gòu)大致相同。植物細胞質(zhì)膜外有細胞壁,細胞壁中常有質(zhì)體,動物細胞質(zhì)中常有中心體,而高等植物細胞中則無。細胞有運動、營養(yǎng)和繁殖等機能。貼壁細胞:1.取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間,無菌超凈臺內(nèi)吹干或用細胞培養(yǎng)級PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍,再用細胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內(nèi),種入細胞培養(yǎng)過夜,使約為50%-80%滿。2.按照特定
探討有關(guān)標準品溶解問題2021/08/25
標準品(Standard),即標準物品,是中藥標準對照品研究中心代理的作為一種衡量標準;用做藥物方面,則為含量測定中的標準含量。標準品包括化學(xué)計量標準品、冶金標準品和藥檢標準品。標準品溶解度溶解度:是指一定溫度下,溶解于一定體積的溶劑中的溶質(zhì)的質(zhì)量。通常認為溶解度良好或者溶解充分,是指溶液澄清無肉眼可見的不溶物質(zhì)。影響溶解度的因素主要有3點:1、溶質(zhì)(即所選標準物質(zhì))對于選定的標準品,溶質(zhì)基本就是確定的(如果是混標的話,可能要考慮不同組分之間的干擾問題)。2、溶劑在選擇溶劑時要注意溶劑對于標準物
標記基因和報告基因分辨指南2021/08/19
一、標記基因和報告基因的概念標記基因(markergene),是一種已知功能或已知序列的基因,能夠起著特異性標記的作用。標記基因是選擇標記基因的簡稱,是指其編碼產(chǎn)物能夠使轉(zhuǎn)化的細胞、組織具有對抗生素等的抗性,或者使轉(zhuǎn)化細胞、組織具有代謝的*性。在培養(yǎng)基中加入抗生素等選擇試劑的條件下,非轉(zhuǎn)化的細胞死亡或生長受到抑制,而轉(zhuǎn)化的細胞能夠繼續(xù)存活,從而將轉(zhuǎn)化的細胞、組織從大量的細胞或組織中篩選出來的一類基因。在基因工程意義上來說,它是重組DNA載體的重要標記,通常用來檢驗轉(zhuǎn)化成功與否;在基因定位意義上來
Elisa常見樣本處理方法2021/08/11
Elisa是一種快速、靈敏、準確可靠的定量分析方法。樣本的處理對于Elisa實驗的成功有舉足輕重的作用。利用ELISA進行檢測的樣本類型包括:血液(血清、血漿),組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清,皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、陰道分泌物等。下面我們就常見的樣本處理方法:血液采取后應(yīng)盡快進行處理,使血清(漿)從與血細胞接觸的全血中分離出來。Q:血清與血漿的區(qū)別?A:血清是血液凝固后缺少纖維蛋原的血漿,故血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均等同于血清。
標準物質(zhì)特性和基本要求2021/08/03
標準物質(zhì)(RM)referencematerial(RM):是一種已經(jīng)確定了具有一個或多個足夠均勻的特性值的物質(zhì)或材料,作為分析測量行業(yè)中的"量具",在校準測量儀器和裝置、評價測量分析方法、測量物質(zhì)或材料特性值和考核分析人員的操作技術(shù)水平,以及在過程中產(chǎn)品的質(zhì)量控制等領(lǐng)域起著*的作用。從定義可以看出標準物質(zhì)具有三個顯著特點:(1)具有特性量值的準確性、均勻性、穩(wěn)定性;(2)量值具有傳遞性;(3)實物形式的計量標準。準確性、均勻性和穩(wěn)定性是標準物質(zhì)量值的特性和基本要求:(1)準確性通常標準物質(zhì)證書
八種抗體知識課堂2021/07/28
1、流式抗體流式抗體是經(jīng)過流式實驗驗證的,一般是針對單一種屬的直接帶熒光標記的單克隆抗體,檢測的是單細胞懸液,結(jié)果通過流式細胞儀分析。2、免疫熒光抗體免疫熒光抗體是經(jīng)過免疫熒光實驗驗證的單克隆或者多克隆抗體,抗體通常情況下一般不帶標記,通過FITC、CY3等熒光標記二抗顯色,結(jié)果通過熒光顯微鏡觀察。3、免疫組化抗體免疫組化抗體是經(jīng)過免疫組化實驗驗證的單克隆或者多克隆抗體,抗體通常情況下一般不帶標記,通過酶標二抗催化底物顯色,結(jié)果通過普通光學(xué)顯微鏡觀察。4、熒光標記抗體熒光標記抗體一般指的是帶FI
培養(yǎng)基制備的操作方法2021/07/21
培養(yǎng)基制備的操作方法:1、培養(yǎng)基配方的選定同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此,除所用的是標準方法,應(yīng)嚴格按其規(guī)定進行配制外,一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料,加以比較核對,再依據(jù)自己的使用目的,加以選用,記錄其來源。2、培養(yǎng)基的制備記錄每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄,包括培養(yǎng)基名稱,配方及其來源,和各種成份的牌號,最終pH值、消毒的溫度和時間制備的日期和制備者等,記錄應(yīng)復(fù)制一份,原記錄保存?zhèn)洳?,?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。3、培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注
免疫熒光技術(shù)特點及常見問題分析2021/07/14
免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescencetechnique)又稱熒光抗體技術(shù),是標記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。很早以來就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合,利用抗原抗體反應(yīng)進行組織或細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。技術(shù)特點:該技術(shù)的主要特點是:特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是:非特異性染色問題尚未解決,結(jié)果判定的客觀性不足,技術(shù)程序也還比較復(fù)雜。熒光免疫法按反應(yīng)體系及定量方法不同,還可進一步分做若干種。與放射免疫法相比,
大腸桿菌轉(zhuǎn)化實驗步驟2021/07/07
實驗材料準備:1.器材旋渦混合器,微量移液取樣器,移液器吸頭,1.5ml微量離心管,雙面微量離心管架,干式恒溫氣浴(或恒溫水浴鍋),制冰機,恒溫搖床,培養(yǎng)皿(已鋪好固體LB-Amp),超凈工作臺,酒精燈,玻璃涂棒,恒溫培養(yǎng)箱。2.試劑培養(yǎng)基(不加抗菌素),LB培養(yǎng)基(加抗菌素),無菌ddH2O,IPTG,X-gal。3.材料處理無菌ddH2O,1.5ml離心管裝入鋁制飯盒(滅菌)、移液器吸頭裝入相應(yīng)的吸頭盒(滅菌),20%IPTG(M/V),2%X-gal(M/V,用N,N-二甲基甲酰胺配)。操
避免ELISA實驗失敗可注意以下七點2021/07/01
在實驗前閱讀并充分了解產(chǎn)品說明書,可以一定程度上避免出現(xiàn)意想不到的結(jié)果。參考以下提示來避免實驗出現(xiàn)問題。1.檢查試劑盒的保質(zhì)期,保證所有試劑按說明書上的建議正確保存;2.檢查試劑溶液是否存在不穩(wěn)定或降解跡象,如沉淀或變色等;3.底物溶液應(yīng)為無色;4.試劑制備和保存時應(yīng)使用干凈的一次性塑料吸量管、槍頭和容器。每次加液(樣品、標準品及其他試劑)時,及時更換槍頭,避免交叉污染;5.確保孵育時間和溫度與規(guī)定的高度一致;6.盒中試劑不能用其他試劑替代;7.建議樣本和標準品都做復(fù)孔,以提高實驗結(jié)果的準確性。
菌種的復(fù)蘇與保存2021/06/23
菌種的復(fù)蘇與保存應(yīng)在超凈工作臺或生物安全柜內(nèi)進行。一、菌種的復(fù)蘇把凍干菌種管、滅菌1mL滴管、雙碟、鑷子、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂斜面數(shù)支,移入超凈工作臺或生物安全柜。先用砂輪將凍干菌種安瓶頸部挫出刻痕,再將凍干菌種管外壁用dian酒擦洗消毒、稍干,用75%乙醇棉擦凈,放在滅菌雙碟內(nèi),待干。點燃酒精燈,將菌種管的封口一端在火焰上,燒灼紅熱,用滅菌滴管吸取營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,滴在灼熱的菌種管封口一端,使驟冷而炸裂。取滅菌鑷子,在火焰旁,將炸裂的管口打開,放入滅菌雙碟內(nèi),另取1支滅菌滴管,在火焰旁吸取營
如何區(qū)別標準滴定液和標準溶液2021/06/17
一般來說標準溶液與標準滴定溶液并不嚴格區(qū)分的,兩者都是已知準確濃度的溶液,只要是已知準確濃度的溶液都可以稱標準溶液,它包括了標準滴定溶液。標準滴定溶液是指已知準確濃度的用于滴定分析的溶液,標準滴定度是指每1mL某摩爾濃度的滴定液(標準溶液)所相當(dāng)?shù)谋粶y藥物的質(zhì)量(g/mL)。計算公式:滴定度TB/A每毫升標準溶液相當(dāng)于被測物質(zhì)的質(zhì)量單位是g/ml或mg/mlTB/A=mA/VB(B指標液,A指被測物)物質(zhì)的量濃度與滴定度之間的換算B的濃度=b/a乘以T再乘以1000再除以A的摩爾質(zhì)量(a,b是反
ELISA實驗過程中的常見問題解答2021/06/09
科研ELISA實驗中會遇到很多問題,不是這有點小問題,就是那有點小問題。以下七點是我們在多年的實驗過程中遇到問題的總結(jié):1、標曲不顯色或顯色很弱,樣本顯色溶解標準品以及倍比稀釋時,未渦旋震蕩或不夠充分。標準品溶解、倍比稀釋時均需要渦旋震蕩以保證充分混勻。單純依靠移液器反復(fù)吹打,效率較低、效果也不一定最佳。2、標曲和樣本均不顯色在孵育階段靜置在桌面上,這樣非常不利于抗原抗體之間的充分接觸,導(dǎo)致顯色偏弱,推薦孵育階段,使用ELISA專用的微孔板振蕩器,調(diào)至合適的頻率,使抗原抗體充分接觸,保證結(jié)合效果
ELISA實驗中造成假陽性的主要四點錯誤操作2021/05/26
ELISA實驗中造成假陽性的主要四點錯誤操作:1、加樣對于間接ELISA標本一般都要進行稀釋,如果加樣不準就會造成誤差,尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時,很小的誤差,會導(dǎo)致較大的相對誤差,使陰性(或弱陽性)標本呈陽性(或陰性)。加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。目前,大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統(tǒng)處理標本,可較好地避免以上誤差。2、洗滌在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步,應(yīng)引起操作者重視。無論是手工操作還是機器操作,得出不正確的
ELISA試劑盒實驗前準備工作2021/05/17
為了使終究的ELISA試劑盒實驗效果就要較高的可靠性,應(yīng)在實驗開端前有必要好的前期準備作業(yè)包括對實驗所需的儀器進行質(zhì)控。使儀器堅持*作業(yè)狀況,應(yīng)建立維護和校對儀器的標準操作程序,zui常見需求操控的儀器包括:移液器(加樣槍)、溫箱、洗板機和酶標儀。具體質(zhì)控操作請參閱我司技能整理的如下要求:1)洗板機:每個設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)矩,一般不逾越2μl;人工扣板時,墊紙不濕;守時檢查管孔是否阻塞。2)酶標儀:常常維護其光學(xué)部分,防止濾光片霉變,守時檢測校對,使其堅持出色的作業(yè)功能。3)移液器:E
其它類ELISA試劑盒操作步驟及優(yōu)勢2021/04/28
其它類ELISA試劑盒操作步驟:1.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。2.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用3.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。4.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。5、底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。其它類ELISA試劑盒優(yōu)勢:1、先進的優(yōu)化方案----重復(fù)性高,可靠性強2、規(guī)范包被操作----吸附均勻,吸附性好,空白值低,孔底透明度高3、*抗體----高效、靈敏、
其它源細胞培養(yǎng)傳代及凍存方法2021/04/27
其它源細胞培養(yǎng)傳代及凍存:?細胞的復(fù)蘇培養(yǎng):從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,同時不斷搖動使之迅速融化,然后用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液,以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。?細胞傳代:原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打
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