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2024
11-21

蛋白芯片是什么？
一、蛋白芯片簡(jiǎn)介?蛋白芯片?是一種高通量的蛋白質(zhì)功能分析檢測(cè)技術(shù)，主要用于監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)之間的相互作用。其基本原理是將各種蛋白質(zhì)有序地固定于載體上，然后利用標(biāo)記了特定熒光物質(zhì)的抗體與芯片上的蛋白質(zhì)結(jié)合，通過熒光強(qiáng)度分析蛋白質(zhì)的表達(dá)數(shù)量和相互作用關(guān)系?。二、蛋白芯片的工作原理蛋白芯片通過將已知的蛋白質(zhì)分子固定在固相載體上，然后捕獲與之特異性結(jié)合的待測(cè)蛋白質(zhì)。這些待測(cè)蛋白質(zhì)可能存在于血清、血漿、尿液等生物樣本中。通過洗滌和純化步驟后，利用熒光掃描儀或激光共聚掃描技術(shù)測(cè)定各點(diǎn)的熒光強(qiáng)度，從而分析蛋白質(zhì)的表
2024
11-20

如何提取細(xì)胞核蛋白？
本文介紹一下用勻漿器研磨法提取貼壁細(xì)胞核蛋白的具體操作。一、前期準(zhǔn)備1、臺(tái)盼藍(lán)染液：取臺(tái)盼藍(lán)粉劑，將其溶解在10mL的雙蒸水當(dāng)中配制成質(zhì)量體積比為4%（4%w/v）的臺(tái)盼藍(lán)母液。在使用時(shí)，利用PBS緩沖液將母液稀釋10倍，使其濃度達(dá)到0.4%，之后再與細(xì)胞懸液混合均勻。2、BufferA：包含10mmol/L的HEPES（在4℃下pH值為7.9）、1.5mmol/L的氯化鎂、10mmol/L的KCL、0.5mmol/L的二硫蘇糖醇（DTT）。若擔(dān)心漿蛋白降解會(huì)對(duì)核蛋白產(chǎn)生影響，可以添加1mmol
2024
11-19

PCR擴(kuò)增反應(yīng)中的嵌合體是什么？
PCR實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生的嵌合體你知道是什么呢？它怎么產(chǎn)生的呢？那又如何預(yù)防和處理呢？這篇文章讓我們一起了解一下吧！一、PCR嵌合體是什么PCR嵌合體(ChimericProducts)：PCR擴(kuò)增反應(yīng)中的嵌合體是指一個(gè)PCR產(chǎn)物來自兩個(gè)或多個(gè)模板分子，通常是由于延伸未完quan導(dǎo)致的?。這種現(xiàn)象通常發(fā)生在PCR反應(yīng)中，特別是當(dāng)使用多重PCR或復(fù)雜模板時(shí)。嵌合體會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物中含有非預(yù)期的片段，有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，甚至導(dǎo)致錯(cuò)誤的解釋。二、形成原理在PCR反應(yīng)中，DNA模板在高溫下解旋成單鏈，然
2024
11-19

細(xì)胞凋亡的檢測(cè)
一、光學(xué)顯微鏡觀察凋亡細(xì)胞的主要特征為核染色質(zhì)致密深染，形成致密質(zhì)塊，有時(shí)可碎裂。檢測(cè)方法：細(xì)胞涂片或組織石蠟切片作HE染色或Giemsa染色，在高倍物鏡下觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)改變，結(jié)合顯微測(cè)量工具可作凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)。二、視頻時(shí)差顯微技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中常用，通過相差顯微鏡可動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞凋亡的變化過程，尤其是觀察細(xì)胞表和外形的變化。檢測(cè)方法：收集2×10^5細(xì)胞/ml培養(yǎng)的細(xì)胞，置于多孔培養(yǎng)板，加入凋亡誘導(dǎo)劑，在帶有自動(dòng)攝像裝置的相差顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞的動(dòng)態(tài)改變，每隔1分鐘作序列攝影，連續(xù)24小時(shí)。如同
2024
11-18

流式細(xì)胞儀怎么分選T細(xì)胞?
上文介紹了流式細(xì)胞術(shù)的原理及應(yīng)用，今天讓我們學(xué)習(xí)一下怎么用流式細(xì)胞儀分選T細(xì)胞吧~一、樣本制備1.取樣:取100μL抗凝血。2.標(biāo)記：根據(jù)抗體說明書標(biāo)記實(shí)驗(yàn)管?；靹蚝?，室溫避光孵育15分鐘。3.溶血：將10×裂紅液用水稀釋10倍，每管加入1mL，振蕩器混勻后室溫避光靜置10分鐘，300g，4°C離心5分鐘。4.洗滌：棄去上清，加入1mL1×PBS洗液，300g離心洗滌5分鐘，洗2-3次。5.上機(jī)檢測(cè)：棄去上清后加入500μL1×PBS，混勻懸浮后過濾，避光等待上機(jī)檢測(cè)。二、儀器操作1.打開流式細(xì)
2024
11-15

流式細(xì)胞術(shù)原理及應(yīng)用
流式細(xì)胞儀在手，卻不知道原理？快來看看這篇文章吧！一、流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)原理流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry,FCM）是一種單細(xì)胞定量分析技術(shù)，該技術(shù)通過測(cè)定庫(kù)爾特電阻、熒光、光散射和光吸收等參數(shù)，可以定量分析細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特征（如DNA含量、蛋白、細(xì)胞膜、胞漿或胞核抗原表達(dá)量）和功能特征（如細(xì)胞內(nèi)酶活性、鈣流變化等）等多種重要參數(shù)，進(jìn)行細(xì)胞特征分析與分選。它的核心功能是將混合物中的不同細(xì)胞分離并計(jì)數(shù)，將感興趣的細(xì)胞分選出來，提供分類比例并進(jìn)行進(jìn)一步分析。二、流式細(xì)胞技術(shù)應(yīng)用1.其測(cè)定細(xì)胞內(nèi)DNA
2024
11-14

引物探針的使用方法有哪些？
一、引物探針的使用步驟?引物探針使用步驟一：?設(shè)計(jì)引物和探針?：首先需要根據(jù)目標(biāo)DNA序列設(shè)計(jì)特異性引物和探針。引物的長(zhǎng)度一般為20-25個(gè)核苷酸，探針的長(zhǎng)度一般為15-25個(gè)核苷酸。設(shè)計(jì)時(shí)要注意避免非特異性擴(kuò)增，確保引物的特異性和探針的Tm值比引物Tm值高8-10°C?。引物探針使用步驟二：?提取模板DNA?：從待測(cè)樣本中提取DNA，作為PCR反應(yīng)的模板。確保模板DNA的質(zhì)量和濃度，以獲得可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果?。引物探針使用步驟三：?配制PCR反應(yīng)體系?：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，配制含有引物、探針、dNTPs
2024
11-13

IHC出現(xiàn)假陽性、假陰性等問題該怎么辦?
?免疫組化（IHC）實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)假陽性和假陰性了怎么辦呢？一、假陽性的處理1.?降低一抗?jié)舛?：通過降低一抗的濃度，可以減少非特異性結(jié)合，從而降低假陽性。通常，降低濃度至能看到陽性表達(dá)且能明顯區(qū)分陽性區(qū)域與周圍間質(zhì)即可?。2.?調(diào)整封閉條件?：逐步提高封閉條件，從山羊血清到5%BSA+山羊血清，最終至5%脫脂奶。通常調(diào)整至5%BSA+山羊血清即可，不建議輕易使用5%脫脂奶?。3.?選擇合適的二抗?：對(duì)于動(dòng)物標(biāo)本，選擇抗鼠或抗兔的二抗，避免使用通用型二抗，以免種屬間抗原抗體反應(yīng)引起假陽性?。二、假陰
2024
11-13

離心柱法提取DNA步驟
常見核酸提取純化方法苯酚氯仿抽提法、磁珠法核酸分離技術(shù)、離心柱純化法等，今天我們來看下離心柱法的實(shí)驗(yàn)步驟和優(yōu)缺點(diǎn)吧~一、離心柱法提取DNA步驟離心柱法提取DNA步驟一將組織或細(xì)胞懸液加入裂解緩沖液，渦旋混勻。裂解緩沖液中含有變性劑（如胍異硫氰酸鹽），可以有效地裂解細(xì)胞和組織，破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞核膜，同時(shí)使核酸與蛋白質(zhì)分離。離心柱法提取DNA步驟二將裂解液轉(zhuǎn)移到DNASpinColumn中，離心收集流穿液。這個(gè)步驟涉及到將裂解液通過一個(gè)特殊的膜過濾，該膜具有特定的孔徑，允許小分子如RNA和蛋白質(zhì)通過
2024
11-12

Alzet滲透泵濃度你會(huì)計(jì)算嗎？
藥物濃度的調(diào)配需根據(jù)每日用藥量和緩釋泵的輸送速率兩項(xiàng)參數(shù)來計(jì)算，每日用藥量可通過查閱專業(yè)文獻(xiàn)獲取。此外，每支緩釋泵的輸送速率信息會(huì)附在包裝盒上，應(yīng)根據(jù)包裝上的速率進(jìn)行配藥。濃度計(jì)算舉例：2001滲透泵，給藥：抗利尿激素(ADH)，1.查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，大鼠正常的ADH分泌量為30ng/天/只，或1.25ng/小時(shí)/只。然后，計(jì)算出完成1.25ng/小時(shí)所需輸注量所需的ADH濃度：ko=Q?Cd其中ko(µg/hr)是質(zhì)量輸送速率，Cd(µg/µl)表示藥物溶液濃度，Q(µl/hr)表示泵的泵送速率。
2024
11-12

如何對(duì)pcr結(jié)果進(jìn)行分析?
一、PCR結(jié)果分析的基本步驟：?1.基線設(shè)置?：實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)的基線是指在PCR的初始循環(huán)期間的信號(hào)水平，通常是3至15個(gè)循環(huán)之間，此時(shí)熒光信號(hào)幾乎沒有變化，可以認(rèn)為是背景或反應(yīng)的噪音。2.?閾值設(shè)定?：?qPCR的閾值代表的是明顯超出基線的擴(kuò)增信號(hào)水平，用以區(qū)分明確的擴(kuò)增信號(hào)和背景。通常qPCR儀器自帶軟件會(huì)自動(dòng)將閾值設(shè)置為基線熒光值標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。3.?CT值計(jì)算?：Ct是指熒光信號(hào)超過閾值時(shí)對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù)，Ct值與目的基因的起始量成反比，可用于計(jì)算DNA初始拷貝數(shù)。4.?擴(kuò)增曲線分析?：擴(kuò)
2024
11-12

DMEM培養(yǎng)基變色原因
DMEM(Dulbecco'sModifiedEagleMedium)培養(yǎng)基廣泛應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)。一般情況下DMEM培養(yǎng)基呈鮮紅色，當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)、培養(yǎng)條件以及培養(yǎng)基成分發(fā)生變化，培養(yǎng)基的顏色也會(huì)發(fā)生變化。以下是DMEM培養(yǎng)基變色的常見原因：1.pH值變化DMEM培養(yǎng)基中含有酚紅，它是一種pH指示劑，能夠根據(jù)培養(yǎng)基的pH值變化而改變顏色。在pH值低于6.8時(shí)培養(yǎng)基呈黃色，pH在7.4時(shí)為紅色，pH高于8.2時(shí)則呈紫色。2.細(xì)胞代謝活動(dòng)細(xì)胞在代謝過程中，會(huì)消耗培養(yǎng)基中的糖分并產(chǎn)生乳酸等代謝產(chǎn)物，可能使p
2024
11-11

六孔板總是鋪不均勻怎么辦呢？
細(xì)胞鋪板不均會(huì)影響后續(xù)的干預(yù)效果和實(shí)驗(yàn)檢測(cè)一致性和可信度。而細(xì)胞鋪板不均勻又是大部分小伙伴們都會(huì)遇到的問題，那這個(gè)問題該怎么解決呢？下面就結(jié)合相關(guān)資料以及個(gè)人經(jīng)驗(yàn)跟大家簡(jiǎn)單分享一下孔板鋪板不均勻的可能原因以及可供參考的解決方法。六孔板鋪不均勻原因一：板子選擇問題板材質(zhì)量不佳，導(dǎo)致鋪板不均勻。一些廉價(jià)的孔板可能存在制造本身上的不均勻，從而導(dǎo)致細(xì)胞分布不均。這是因?yàn)榧?xì)胞傾向于在板孔內(nèi)部的某些特定區(qū)域黏附，這些區(qū)域通常存在細(xì)微的結(jié)構(gòu)或化學(xué)性質(zhì)的不一致。解決方法：更換表面平整度高的高質(zhì)量的板材。至于說怎
2024
11-11

細(xì)胞漂浮也有可能是你操作不當(dāng)！
細(xì)胞如若在生長(zhǎng)過程中遇到漂浮困境，你有沒有想過會(huì)是操作不當(dāng)？！接下來，跟隨康康一起，探討這個(gè)非微生物原因?qū)е碌募?xì)胞培養(yǎng)問題，并找到讓它正常發(fā)展的解決方案。復(fù)蘇后細(xì)胞漂浮原因一：細(xì)胞本身貼壁能力較弱比如細(xì)胞轉(zhuǎn)染的明星細(xì)胞293T，它生長(zhǎng)較快，但貼壁能力弱，容易出現(xiàn)明顯的成片脫落現(xiàn)象。293細(xì)胞∝解決辦法：提前使用明膠包被板子，增強(qiáng)吸附性。另外，還建議使用TC處理（tissueculturetreated）的培養(yǎng)瓶/皿促進(jìn)細(xì)胞貼壁附著。復(fù)蘇后細(xì)胞漂浮原因二：培養(yǎng)基選擇錯(cuò)誤比如293T細(xì)胞培養(yǎng)，推薦使
2024
11-08

簡(jiǎn)石生物瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒TD407操作步驟
簡(jiǎn)石瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒TD407代理——天津益元利康生物科技有限公司。一、產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：1.從瓊脂糖凝膠中快速（15分鐘）高產(chǎn)量地回收超純的DNA；2.特制的微量柱設(shè)計(jì)使得DNA可以在高濃度下洗脫到最小體積（≥10µl）；3.洗脫的DNA非常適合用于DNA連接、測(cè)序、標(biāo)記、PCR等應(yīng)用。二、操作使用：（以下離心操作步驟的離心力均在10,000-16,000xg之間進(jìn)行）簡(jiǎn)石DNA回收試劑盒操作步驟一：使用刀片或手術(shù)刀把DNA片段從瓊脂糖凝膠上切除下來并且移置到1.5ml小型離心管內(nèi)。注意:從
2024
11-07

Alzet滲透泵工作原理及優(yōu)點(diǎn)
一、Alzet滲透泵工作原理：滲透壓泵可被埋植在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的皮下或者腹腔，滲透層與泵體埋植組織之間高滲透壓導(dǎo)致組織內(nèi)水分通過泵體外層的剛性半透膜進(jìn)入滲透層，從而擠壓由柔韌的非滲透性膜組成的藥池，使藥池內(nèi)的試劑以預(yù)定的速度釋放。滲透壓泵屬于控釋釋放型給藥系統(tǒng)，利用滲透壓原理制成，可以實(shí)現(xiàn)藥物的恒速釋放，受生理因素的影響較小，是目前應(yīng)用最多的控釋制劑。二、Alzet滲透泵優(yōu)點(diǎn)：1.安全：無菌包裝、醫(yī)療級(jí)、創(chuàng)傷小、無異物排斥反應(yīng)、可植入式2.多樣：動(dòng)物：如小鼠、大鼠等，已驗(yàn)證29種動(dòng)物類型器官：如脊髓、
2024
11-07

單雙端測(cè)序有什么不同？
單端測(cè)序和雙端測(cè)序的主要區(qū)別在于測(cè)序方式、應(yīng)用場(chǎng)景和測(cè)序質(zhì)量上。?一、?單端測(cè)序和雙端測(cè)序的主要區(qū)別一：測(cè)序方式1.?單端測(cè)序（Single-Read）?：?jiǎn)味藴y(cè)序是從DNA片段的一端進(jìn)行測(cè)序，只讀取一個(gè)方向的序列信息。在測(cè)序過程中，DNA樣本被片段化處理成200-500bp的片段，引物序列連接到DNA片段的一端，然后進(jìn)行測(cè)序?。2.?雙端測(cè)序（Paired-End）?：雙端測(cè)序同時(shí)從DNA片段的兩端進(jìn)行測(cè)序，讀取兩個(gè)方向的序列信息。在構(gòu)建文庫(kù)時(shí)，兩端都加上測(cè)序引物結(jié)合位點(diǎn)，分別進(jìn)行兩次測(cè)序，然
2024
11-06

一文了解mNGS
繼上文《一文了解tNGS》之后，今天我們講講它的“兄弟”——mNGS吧~一、?mNGS簡(jiǎn)介?mNGS（MetagenomicNextGenerationSequencing）?是一種無需培養(yǎng)即可快速鑒定感染病原體的新技術(shù)，即宏基因組學(xué)二代測(cè)序技術(shù)，正在改變病原微生物檢測(cè)的現(xiàn)狀。它通過無需培養(yǎng)樣本的方式，實(shí)現(xiàn)高通量、快速鑒定感染病原體，顯著提高了檢測(cè)的敏感性和特異性。其原理、優(yōu)點(diǎn)和應(yīng)用場(chǎng)景如下。二、?mNGS原理mNGS通過對(duì)臨床樣本的DNA或RNA進(jìn)行高通量測(cè)序，無差別、無選擇性地對(duì)樣本中的核酸
2024
11-01

ALZET微型滲透壓泵的灌注與預(yù)浸泡
一、前言為了確保操作準(zhǔn)確，必須確保每個(gè)泵都充滿藥物溶液。泵體內(nèi)滯留的氣泡或未能將流量調(diào)節(jié)器插入泵中，可能會(huì)導(dǎo)致泵送速率波動(dòng)不可預(yù)測(cè)。填充泵時(shí)，請(qǐng)確保溶液處于室溫。建議在ALZET泵的填充和處理過程中以及在手術(shù)植入過程中使用無菌技術(shù)。填充過程中溶液或流量調(diào)節(jié)器的意外污染可能會(huì)導(dǎo)致可能破壞活性的微生物生長(zhǎng)、組織刺激和不穩(wěn)定的結(jié)果。如果您擔(dān)心溶液的無菌性，請(qǐng)通過0.22µM注射器端過濾器（例如Millex®-GV）填充泵。在填充和植入過程中，應(yīng)戴上手術(shù)手套處理ALZET泵。如果皮膚油脂積聚在泵表面，可
2024
11-01

一文了解tNGS
一、tNGS技術(shù)原理tNGS是一種基于超多重PCR擴(kuò)增（或靶向捕獲）與高通量測(cè)序兩種技術(shù)結(jié)合的新一代測(cè)序技術(shù)。它使用大量針對(duì)特定基因序列的引物/探針對(duì)待測(cè)樣品中抽提出的核酸進(jìn)行超多重PCR擴(kuò)增/探針捕獲，獲得大量目標(biāo)核酸片段，再對(duì)這些目標(biāo)核酸片段進(jìn)行高通量測(cè)序，然后對(duì)所得序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)樣本中的核酸進(jìn)行高靈敏以及高分辨率的識(shí)別。二、tNGS優(yōu)點(diǎn)1.針對(duì)性強(qiáng)：tNGS只針對(duì)特定基因序列進(jìn)行測(cè)序，因此可以大大減少測(cè)序數(shù)據(jù)量，提高檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性。2.高靈敏度：由于tNGS可以對(duì)

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