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2024
10-15

PCR的提出和發(fā)展
一、起源PCR的發(fā)明人，一般認(rèn)為是穆里斯(K.Mullis)，他也因此獲得了1993年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。穆里斯在好些寫(xiě)作中，包括1990年在《科學(xué)美國(guó)人》上的一篇文章，及1998年的自傳《心靈luo舞》(DancingNakedintheMindField)，都曾提到PCR這個(gè)構(gòu)想的起源。然而，PCR從構(gòu)想到實(shí)現(xiàn)，真的就是穆里斯一人之功嗎?PCR究竟是在什么樣的環(huán)境下誕生的呢?穆里斯的出身是生物化學(xué)家，1972在加州大學(xué)伯克利分校取得博士學(xué)位，專(zhuān)長(zhǎng)有機(jī)合成。一早他就表現(xiàn)出桀驁不馴的性格，在那嬉皮的
2024
10-15

三一造血人血小板裂解液說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱】中文名稱：三一造血人血小板裂解液英文名稱：HumanPlateletLysate(HPL)【貨號(hào)】RC-002【規(guī)格】100mL/瓶、500mL/瓶【性狀】本產(chǎn)品為橙黃色略渾濁的液體，久置或反復(fù)凍融后，渾濁現(xiàn)象更明顯，并有絮狀沉淀產(chǎn)生。【運(yùn)輸條件】采用干冰冷凍運(yùn)輸?！举A藏條件與有效期】-20°C保存即可，長(zhǎng)期儲(chǔ)藏可置于-80°C條件下；建議收到本產(chǎn)品后，將本產(chǎn)品于4°C條件下放置過(guò)夜或37°C水浴0.5-1小時(shí)進(jìn)行化凍，然后分裝凍存；利用本產(chǎn)品配制的wan全培養(yǎng)基（例如5%添加量）可
2024
10-14

感受態(tài)細(xì)胞制備原理與舉例
一、感受態(tài)細(xì)胞即受體細(xì)胞通過(guò)理化方法處理，使其處于最適攝取和容納外來(lái)DNA的生理狀態(tài)的細(xì)胞。二、感受態(tài)細(xì)胞制備原理將快速生長(zhǎng)的大腸桿菌置于經(jīng)低溫0℃預(yù)處理的低滲氯化鈣溶液中，便會(huì)造成細(xì)胞膨脹（滲透作用），同時(shí)，Ca2+會(huì)使細(xì)胞膜磷脂雙分子層形成液晶結(jié)構(gòu)，促使細(xì)胞外膜與內(nèi)膜間隙中的部分核酸酶解離開(kāi)來(lái)，離開(kāi)所在區(qū)域，誘導(dǎo)細(xì)胞成為感受態(tài)細(xì)胞。大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞三、大腸桿菌DH5α感受態(tài)制備實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟一從-80℃冰箱中取出保種的DH5α菌株，用滅菌的槍頭吸取少量保菌液加入至合適的LB液體培
2024
10-14

單克隆抗體vs多克隆抗體
單克隆抗體與多克隆抗體在多個(gè)方面存在顯著的區(qū)別，這些區(qū)別包括它們的來(lái)源、特性、應(yīng)用以及生產(chǎn)方式等。盡管單克隆抗體和多克隆抗體在特異性、穩(wěn)定性和生產(chǎn)方式等方面存在差異，但它們?cè)谠S多情況下可以互補(bǔ)使用。一、定義與來(lái)源單克隆抗體：是指通過(guò)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成的雜交瘤細(xì)胞系所產(chǎn)生的抗體。這種抗體是由單一的B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，因此具有高度均一性和特異性。它們通常是通過(guò)雜交瘤技術(shù)從動(dòng)物細(xì)胞中獲得。多克隆抗體：則是從動(dòng)物血清中獲得的抗體，屬于多種B細(xì)胞產(chǎn)生的混合物。這些抗體可以受到多種抗原刺激，與多種
2024
10-12

在基因操作中如何選用載體？
?在基因操作中選用載體的核心原則?是確保載體能夠滿足基因工程的基本要求，包括能夠在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存在并復(fù)制、具有多個(gè)限制酶切點(diǎn)以便于目的基因的插入、帶有標(biāo)記基因以便于篩選等?。圖為質(zhì)粒構(gòu)建基本流程在基因操作中選用載體的核心原則一?能夠自主復(fù)制?：確保載體在宿主細(xì)胞內(nèi)能夠自我復(fù)制，從而增加目的基因的數(shù)量?。在基因操作中選用載體的核心原則二?遺傳標(biāo)記物?：載體應(yīng)具有兩個(gè)以上的遺傳標(biāo)記物，便于重組體的篩選和鑒定?。在基因操作中選用載體的核心原則三?克隆位點(diǎn)?：載體應(yīng)具有一個(gè)或多個(gè)特定的酶切位點(diǎn)，即多克
2024
10-12

Transwell遷移實(shí)驗(yàn)步驟
一、細(xì)胞遷移細(xì)胞遷移(cellmigration)也稱為細(xì)胞爬行、細(xì)胞移動(dòng)或細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，是指細(xì)胞在接收到遷移信號(hào)或感受到某些物質(zhì)的梯度后而產(chǎn)生的移動(dòng)。細(xì)胞遷移為細(xì)胞頭部偽足的延伸、新的黏附建立、細(xì)胞體尾部收縮在時(shí)空上的交替過(guò)程。細(xì)胞遷移是正常細(xì)胞的基本功能之一，是機(jī)體正常生長(zhǎng)發(fā)育的生理過(guò)程，也是活細(xì)胞普遍存在的一種運(yùn)動(dòng)形式。胚胎發(fā)育、血管生成、傷口愈合、免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、動(dòng)脈粥樣硬化、癌癥轉(zhuǎn)移等過(guò)程中都涉及細(xì)胞遷移。細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)是研究細(xì)胞在體外條件下移動(dòng)能力的一種實(shí)驗(yàn)方法，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、
2024
10-12

Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，也稱為T(mén)ranswell遷移或侵襲測(cè)定實(shí)驗(yàn)，是一種用于細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，用于研究細(xì)胞通過(guò)多孔膜的運(yùn)動(dòng)。前面已經(jīng)講過(guò)實(shí)驗(yàn)步驟，那實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要注意些什么呢？注意事項(xiàng)一基質(zhì)膠在室溫下容易凝固，鋪膠過(guò)程全程需要在冰上操作。注意事項(xiàng)二基質(zhì)膠濃度也是影響細(xì)胞遷移和侵襲的因素之一，所以基質(zhì)膠的濃度和稀釋比例需根據(jù)供應(yīng)商提供的信息和實(shí)驗(yàn)具體情況調(diào)整，必要時(shí)可設(shè)置預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索最佳濃度和稀釋比例。一般常用濃度為1mg/mL。注意事項(xiàng)三鋪膠時(shí)，盡量垂直小室底部在小室底
2024
10-11

三一造血STEMERY——人 γδT 細(xì)胞高效擴(kuò)增試劑盒說(shuō)明書(shū)
一、產(chǎn)品介紹【中文名稱】人γδT細(xì)胞高效擴(kuò)增試劑盒【英文名稱】HumanγδTcellrobustexpasionkit【編號(hào)】CT-004【包裝規(guī)格】2L/套【試劑盒組成】【預(yù)期用途】適用于從人新鮮外周血、濃縮白細(xì)胞來(lái)源的單個(gè)核細(xì)胞以及凍存的單個(gè)核細(xì)胞在體外擴(kuò)增成γδT細(xì)胞?！举A藏條件與有效期】GD-I，GD-II，GD-IV置于2-8°C保存，有效期為12個(gè)月；GD-III置于-20°C保存，有效期為24個(gè)月，置于2-8°C保存，有效期則為3個(gè)月，并勿反復(fù)凍融；生產(chǎn)日期，有效期至：見(jiàn)標(biāo)簽?！?
2024
10-10

ELISA的基本原理
ELISA，全稱為：酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme-linkedimmunosorbentassay)，是用于檢測(cè)體液中微量物質(zhì)的固相免疫測(cè)定方法。它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術(shù)(immunoenzymatictechniques)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新型的免疫測(cè)定技術(shù)。那讓我們一起來(lái)看看ELISA的基本原理吧！ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)
2024
10-10

液相雜交芯片與固相雜交芯片的原理及區(qū)別
液相雜交芯片和固相雜交芯片是兩種不同的基因檢測(cè)技術(shù)，它們?cè)谠?、?yīng)用、技術(shù)優(yōu)勢(shì)等方面存在一定的差異。以下是對(duì)這兩種芯片的詳細(xì)比較：一、液相雜交芯片1.基本原理液相雜交芯片技術(shù)，在農(nóng)業(yè)育種中常被稱為“液相芯片”或“靶向序列捕獲”，英文名稱為“Genotypingbytargetsequencing”。該技術(shù)最早由安捷倫公司推出，其工作原理基于目標(biāo)探針與靶向序列互補(bǔ)結(jié)合的定點(diǎn)捕獲測(cè)序。具體來(lái)說(shuō)，該技術(shù)利用生物素標(biāo)記的探針在液態(tài)中與基因組目標(biāo)區(qū)域雜交形成雙鏈，隨后通過(guò)鏈霉親和素包被的磁珠捕獲這些雙鏈，
2024
10-09

PCR DNA聚合酶都有什么？
DNA聚合酶是催化DNA或RNA為模板合成DNA的一類(lèi)酶的總稱，又稱DNA依賴的DNA聚合酶（DNA—dependentDNApolymerase，DNApol），它是以親代DNA為模板，催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一類(lèi)酶。此酶是美國(guó)科學(xué)家ArthurKomberg于1957年在大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)的，被稱為DNA聚合酶Ⅰ（DNApolymeraseⅠ，簡(jiǎn)稱polⅠ）以后陸續(xù)在其他原核生物及真核生物中找到了多種DNA聚合酶。這些聚合酶的共同特點(diǎn)是：它們都能把脫氧核糖核苷酸（dNTP）連續(xù)的
2024
10-08

瓊脂糖凝膠電泳的原理
一、瓊脂糖凝膠瓊脂糖是一種從紅藻中提取的天然線性聚合物，其基本結(jié)構(gòu)是由D-和L-半乳糖殘基通過(guò)α(1→3)和β(1→4)糖苷鍵交替連接而成的長(zhǎng)鏈。瓊脂糖在水中加熱溶解后，冷卻時(shí)能形成半固體狀的凝膠。制成的小顆粒用于凝膠過(guò)濾。適于用sephadex不能分級(jí)分離的大分子的凝膠過(guò)濾，若使用5%以下濃度的凝膠，也能夠分級(jí)分離細(xì)胞顆粒、病毒等。利用其吸附性小的特點(diǎn)，有時(shí)用它代替瓊脂、以作為免疫電泳或凝膠內(nèi)沉降反應(yīng)的支持物。瓊脂糖凝膠具有多孔性，其孔徑大小與DNA分子的雙螺旋直徑相當(dāng)，這使得它成為理想的分離
2024
10-08

丹麥SSI的血清怎么樣？
一、公司簡(jiǎn)介SSIDiagnosticaA/S是一家北歐微生物實(shí)驗(yàn)室體外診斷產(chǎn)品制造、分銷(xiāo)和技術(shù)服務(wù)公司。SSIDiagnostica為全球眾多實(shí)驗(yàn)室、診所和制藥商提供服務(wù)。在國(guó)際上，SSIDiagnostica提供快速診斷測(cè)試、疫苗產(chǎn)品、抗血清和其他幾種體外診斷產(chǎn)品的質(zhì)量控制測(cè)試。此外，SSIDiagnostica還在北歐地區(qū)銷(xiāo)售來(lái)自外部合作伙伴的精選產(chǎn)品。SSIDiagnostica的歷史可以追溯到1902年，是著名的StatensSerumInstitut的一個(gè)部門(mén)。2016年，Adeli
2024
09-29

WB實(shí)驗(yàn)之內(nèi)參蛋白的選擇
在進(jìn)行WB（WesternBlot）實(shí)驗(yàn)時(shí)，選擇合適的內(nèi)參確實(shí)至關(guān)重要。內(nèi)參的主要作用是像一把“尺子”，用來(lái)衡量和校正每個(gè)樣本的上樣量，以及在上樣過(guò)程中可能產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)誤差。這樣，我們就可以更加確信實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，因?yàn)樗鼈円呀?jīng)經(jīng)過(guò)了內(nèi)參的校正。一、選擇內(nèi)參需要遵循的原則？1.樣本種屬來(lái)源匹配性原則：內(nèi)參蛋白的選擇應(yīng)基于實(shí)驗(yàn)樣本的物種來(lái)源。對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞和組織樣本，常用的內(nèi)參包括β-actin、β-tubulin、GAPDH、LaminB等。這些蛋白在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)穩(wěn)定，適合作為內(nèi)參。跨物種
2024
09-29

為了獲得完整的全血RNA，血液采集和抽提有什么建議嗎？
首先血液通常在臨床地點(diǎn)采集，但在其他地方進(jìn)行RNA分離處理。這導(dǎo)致在運(yùn)輸和RNA純化之前需要RNA穩(wěn)定。血液含有復(fù)雜的細(xì)胞成分，含RNA的目標(biāo)細(xì)胞白細(xì)胞，占細(xì)胞質(zhì)量的1%以下。血液中含有的生化物質(zhì)會(huì)影響下游的應(yīng)用。如RNA酶、抗凝血?jiǎng)┖脱t素等，需要有專(zhuān)業(yè)的產(chǎn)品進(jìn)行純化。凱杰提出了解決方案：一、EDTA抗凝管采集的新鮮人全血，可搭配QIAampRNABloodMiniKit（貨號(hào)：52304）來(lái)提取高質(zhì)量的總RNA（＞200nt）；二、采用PAXgenBloodRNATubes（貨號(hào)：76216
2024
09-29

FUJIFILM Wako——CLEM用熒光蛋白表達(dá)載體
FUJIFILMWako推出了適用于光電關(guān)聯(lián)顯微技術(shù)（CLEM）的熒光蛋白表達(dá)載體。載體表達(dá)的熒光蛋白（CLEM-Red,CLEM-Green）可通過(guò)CLEM用熒光恢復(fù)試劑（TUKSolution,TUKSolutionformulticolor）恢復(fù)被氧化鋨淬滅的電子顯微鏡樣品中的熒光，從而實(shí)現(xiàn)使用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡觀察同一切片?！糨d體概要◆產(chǎn)品一覽購(gòu)前須知：本系列載體僅供科研使用。如有需要，請(qǐng)聯(lián)系FUJIFILMWako代理——天津益元利康生物科技有限公司！FUJIFILMWako天津代
2024
09-29

Wnt信號(hào)通路
一、Wnt信號(hào)通路簡(jiǎn)介Wnt在1982年shou次在小鼠胰腺癌中發(fā)現(xiàn)，由于此基因激活依賴小鼠乳腺癌相關(guān)病毒基因的插入，因此，當(dāng)被命名為Int-1。之后的研究表明，Int1基因在小鼠正常胚胎發(fā)育中發(fā)揮重要作用，與果蠅的無(wú)翅（Wingless）基因功能相似，均可控制胚胎的軸向發(fā)育。此后大量研究提示Int1基因在神經(jīng)系統(tǒng)胚胎發(fā)育中的重要性。因兩者基因與蛋白功能的相似性，研究者將Wingless與Int1合并，賦名為Wnt基因。人Wnt基因定位于12q13。在胚胎發(fā)育中，Wnt基因調(diào)控的重要信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)
2024
09-27

為什么CCK8鏡下趨勢(shì)是對(duì)的，測(cè)出來(lái)的OD值卻不對(duì)？？
CCK-8實(shí)驗(yàn)中，鏡下趨勢(shì)正確但測(cè)出的OD值不準(zhǔn)確的問(wèn)題可能由多種原因?qū)е?。那么影響CCK8結(jié)果的因素到底有哪些？一、細(xì)胞接種數(shù)量過(guò)多首先，細(xì)胞接種數(shù)量過(guò)多可能導(dǎo)致OD值過(guò)高。當(dāng)細(xì)胞數(shù)量過(guò)多時(shí)，它們可能會(huì)重疊生長(zhǎng)，導(dǎo)致測(cè)得的OD值偏高。此外，如果細(xì)胞密度過(guò)高，可能會(huì)影響藥物的均勻分布，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果?。二、藥物作用時(shí)間不足或鋪板細(xì)胞密度太大其次，藥物作用時(shí)間不足或鋪板細(xì)胞密度太大也可能導(dǎo)致測(cè)量不準(zhǔn)確，都可能影響到細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和最終測(cè)得的OD值?。三、誤差操作過(guò)程中的誤差也是導(dǎo)致OD值不準(zhǔn)確的
2024
09-27

植物組織蛋白質(zhì)提取方法
方法一：1.根據(jù)樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入），準(zhǔn)備提取液放在冰上。2.樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4小時(shí)）。3.用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4.提取上清夜，樣品制備完成。5.蛋白質(zhì)提取液：300ml1Mtris-HCl（PH8）45ml甘油（Glycerol）75ml聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g這種方法針對(duì)SDS-PAGE，垂直板電泳！方法二：用
2024
09-27

ROS的檢測(cè)方法
ROS在細(xì)胞生命，應(yīng)激和死亡中具介導(dǎo)作用，今天讓我們來(lái)聊下ROS吧~一、ROS簡(jiǎn)介活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）廣泛指代氧來(lái)源的自由基和非自由基，包含了超氧陰離子（O2-）、過(guò)氧化氫（H2O2）、羥自由基（OH-）、臭氧（O3）和單線態(tài)氧（1O2），由于它們含有不成對(duì)的電子，因而具有很高的化學(xué)反應(yīng)活性。在機(jī)體內(nèi)，ROS的主要來(lái)源之一是線粒體內(nèi)膜的呼吸鏈底物端，在線粒體中的電子傳遞鏈復(fù)合物將電子傳遞給O2的過(guò)程中，有一部分O2被還原，形成O2-或H2O2。其中，最為重

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