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2024
10-16

RAW 264.7細胞復(fù)蘇
要復(fù)蘇RAW264.7巨噬細胞，首先需要將含有1mL細胞懸液的凍存管從液氮中取出并快速解凍于37℃水浴中，然后將其轉(zhuǎn)移到1mL新鮮培養(yǎng)基的無菌管中，并ce底混合均勻。接下來，使用1000rpm的離心速度離心5分鐘，將上清液倒掉，隨后再加入1mL培養(yǎng)基并充分重懸細胞。將懸液加入含有適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿或瓶中（10ml/10cm皿），并將其放置在培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)（37℃，5%CO2）。第二天檢查細胞的生長狀態(tài)和密度，以確定是否需要進行傳代操作。通過這些步驟，可以有效地復(fù)蘇RAW264.7巨噬細胞，并為
2024
10-15

PCR-SBT基本原理
1.PCR擴增PCR-SBT技術(shù)首先是對待測DNA進行PCR擴增，以擴增出分型區(qū)域。PCR，即聚合酶鏈反應(yīng)，是一種在體外快速擴增特定DNA片段的方法。在PCR過程中，需要設(shè)計特定的引物，它們能夠與待擴增的DNA片段兩端互補結(jié)合。然后，在DNA聚合酶的作用下，以dNTP為原料，按照堿基互補配對的原則，合成新的DNA鏈。通過多次循環(huán)的變性、退火和延伸步驟，待測DNA片段得以大量擴增。在PCR-SBT技術(shù)中，為了擴增出HLA基因的多態(tài)性區(qū)域，通常需要設(shè)計多個引物對。這些引物對能夠覆蓋HLA基因的所有可
2024
10-15

PCR的提出和發(fā)展
一、起源PCR的發(fā)明人，一般認為是穆里斯(K.Mullis)，他也因此獲得了1993年的諾貝爾化學(xué)獎。穆里斯在好些寫作中，包括1990年在《科學(xué)美國人》上的一篇文章，及1998年的自傳《心靈luo舞》(DancingNakedintheMindField)，都曾提到PCR這個構(gòu)想的起源。然而，PCR從構(gòu)想到實現(xiàn)，真的就是穆里斯一人之功嗎?PCR究竟是在什么樣的環(huán)境下誕生的呢?穆里斯的出身是生物化學(xué)家，1972在加州大學(xué)伯克利分校取得博士學(xué)位，專長有機合成。一早他就表現(xiàn)出桀驁不馴的性格，在那嬉皮的
2024
10-15

三一造血人血小板裂解液說明書
【產(chǎn)品名稱】中文名稱：三一造血人血小板裂解液英文名稱：HumanPlateletLysate(HPL)【貨號】RC-002【規(guī)格】100mL/瓶、500mL/瓶【性狀】本產(chǎn)品為橙黃色略渾濁的液體，久置或反復(fù)凍融后，渾濁現(xiàn)象更明顯，并有絮狀沉淀產(chǎn)生。【運輸條件】采用干冰冷凍運輸。【貯藏條件與有效期】-20°C保存即可，長期儲藏可置于-80°C條件下；建議收到本產(chǎn)品后，將本產(chǎn)品于4°C條件下放置過夜或37°C水浴0.5-1小時進行化凍，然后分裝凍存；利用本產(chǎn)品配制的wan全培養(yǎng)基（例如5%添加量）可
2024
10-14

感受態(tài)細胞制備原理與舉例
一、感受態(tài)細胞即受體細胞通過理化方法處理，使其處于最適攝取和容納外來DNA的生理狀態(tài)的細胞。二、感受態(tài)細胞制備原理將快速生長的大腸桿菌置于經(jīng)低溫0℃預(yù)處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹（滲透作用），同時，Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結(jié)構(gòu)，促使細胞外膜與內(nèi)膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區(qū)域，誘導(dǎo)細胞成為感受態(tài)細胞。大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞三、大腸桿菌DH5α感受態(tài)制備實驗步驟實驗步驟一從-80℃冰箱中取出保種的DH5α菌株，用滅菌的槍頭吸取少量保菌液加入至合適的LB液體培
2024
10-14

單克隆抗體vs多克隆抗體
單克隆抗體與多克隆抗體在多個方面存在顯著的區(qū)別，這些區(qū)別包括它們的來源、特性、應(yīng)用以及生產(chǎn)方式等。盡管單克隆抗體和多克隆抗體在特異性、穩(wěn)定性和生產(chǎn)方式等方面存在差異，但它們在許多情況下可以互補使用。一、定義與來源單克隆抗體：是指通過B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合形成的雜交瘤細胞系所產(chǎn)生的抗體。這種抗體是由單一的B細胞克隆產(chǎn)生的，因此具有高度均一性和特異性。它們通常是通過雜交瘤技術(shù)從動物細胞中獲得。多克隆抗體：則是從動物血清中獲得的抗體，屬于多種B細胞產(chǎn)生的混合物。這些抗體可以受到多種抗原刺激，與多種
2024
10-12

在基因操作中如何選用載體？
?在基因操作中選用載體的核心原則?是確保載體能夠滿足基因工程的基本要求，包括能夠在宿主細胞內(nèi)穩(wěn)定存在并復(fù)制、具有多個限制酶切點以便于目的基因的插入、帶有標(biāo)記基因以便于篩選等?。圖為質(zhì)粒構(gòu)建基本流程在基因操作中選用載體的核心原則一?能夠自主復(fù)制?：確保載體在宿主細胞內(nèi)能夠自我復(fù)制，從而增加目的基因的數(shù)量?。在基因操作中選用載體的核心原則二?遺傳標(biāo)記物?：載體應(yīng)具有兩個以上的遺傳標(biāo)記物，便于重組體的篩選和鑒定?。在基因操作中選用載體的核心原則三?克隆位點?：載體應(yīng)具有一個或多個特定的酶切位點，即多克
2024
10-12

Transwell遷移實驗步驟
一、細胞遷移細胞遷移(cellmigration)也稱為細胞爬行、細胞移動或細胞運動，是指細胞在接收到遷移信號或感受到某些物質(zhì)的梯度后而產(chǎn)生的移動。細胞遷移為細胞頭部偽足的延伸、新的黏附建立、細胞體尾部收縮在時空上的交替過程。細胞遷移是正常細胞的基本功能之一，是機體正常生長發(fā)育的生理過程，也是活細胞普遍存在的一種運動形式。胚胎發(fā)育、血管生成、傷口愈合、免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、動脈粥樣硬化、癌癥轉(zhuǎn)移等過程中都涉及細胞遷移。細胞遷移實驗是研究細胞在體外條件下移動能力的一種實驗方法，廣泛應(yīng)用于細胞生物學(xué)、
2024
10-12

Transwell細胞遷移實驗注意事項
Transwell細胞遷移實驗，也稱為Transwell遷移或侵襲測定實驗，是一種用于細胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的實驗室技術(shù)，用于研究細胞通過多孔膜的運動。前面已經(jīng)講過實驗步驟，那實驗過程中需要注意些什么呢？注意事項一基質(zhì)膠在室溫下容易凝固，鋪膠過程全程需要在冰上操作。注意事項二基質(zhì)膠濃度也是影響細胞遷移和侵襲的因素之一，所以基質(zhì)膠的濃度和稀釋比例需根據(jù)供應(yīng)商提供的信息和實驗具體情況調(diào)整，必要時可設(shè)置預(yù)實驗摸索最佳濃度和稀釋比例。一般常用濃度為1mg/mL。注意事項三鋪膠時，盡量垂直小室底部在小室底
2024
10-11

三一造血STEMERY——人 γδT 細胞高效擴增試劑盒說明書
一、產(chǎn)品介紹【中文名稱】人γδT細胞高效擴增試劑盒【英文名稱】HumanγδTcellrobustexpasionkit【編號】CT-004【包裝規(guī)格】2L/套【試劑盒組成】【預(yù)期用途】適用于從人新鮮外周血、濃縮白細胞來源的單個核細胞以及凍存的單個核細胞在體外擴增成γδT細胞。【貯藏條件與有效期】GD-I，GD-II，GD-IV置于2-8°C保存，有效期為12個月；GD-III置于-20°C保存，有效期為24個月，置于2-8°C保存，有效期則為3個月，并勿反復(fù)凍融；生產(chǎn)日期，有效期至：見標(biāo)簽?！?
2024
10-10

ELISA的基本原理
ELISA，全稱為：酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme-linkedimmunosorbentassay)，是用于檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法。它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術(shù)(immunoenzymatictechniques)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù)。那讓我們一起來看看ELISA的基本原理吧！ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時
2024
10-10

液相雜交芯片與固相雜交芯片的原理及區(qū)別
液相雜交芯片和固相雜交芯片是兩種不同的基因檢測技術(shù)，它們在原理、應(yīng)用、技術(shù)優(yōu)勢等方面存在一定的差異。以下是對這兩種芯片的詳細比較：一、液相雜交芯片1.基本原理液相雜交芯片技術(shù)，在農(nóng)業(yè)育種中常被稱為“液相芯片”或“靶向序列捕獲”，英文名稱為“Genotypingbytargetsequencing”。該技術(shù)最早由安捷倫公司推出，其工作原理基于目標(biāo)探針與靶向序列互補結(jié)合的定點捕獲測序。具體來說，該技術(shù)利用生物素標(biāo)記的探針在液態(tài)中與基因組目標(biāo)區(qū)域雜交形成雙鏈，隨后通過鏈霉親和素包被的磁珠捕獲這些雙鏈，
2024
10-09

PCR DNA聚合酶都有什么？
DNA聚合酶是催化DNA或RNA為模板合成DNA的一類酶的總稱，又稱DNA依賴的DNA聚合酶（DNA—dependentDNApolymerase，DNApol），它是以親代DNA為模板，催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一類酶。此酶是美國科學(xué)家ArthurKomberg于1957年在大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)的，被稱為DNA聚合酶Ⅰ（DNApolymeraseⅠ，簡稱polⅠ）以后陸續(xù)在其他原核生物及真核生物中找到了多種DNA聚合酶。這些聚合酶的共同特點是：它們都能把脫氧核糖核苷酸（dNTP）連續(xù)的
2024
10-08

瓊脂糖凝膠電泳的原理
一、瓊脂糖凝膠瓊脂糖是一種從紅藻中提取的天然線性聚合物，其基本結(jié)構(gòu)是由D-和L-半乳糖殘基通過α(1→3)和β(1→4)糖苷鍵交替連接而成的長鏈。瓊脂糖在水中加熱溶解后，冷卻時能形成半固體狀的凝膠。制成的小顆粒用于凝膠過濾。適于用sephadex不能分級分離的大分子的凝膠過濾，若使用5%以下濃度的凝膠，也能夠分級分離細胞顆粒、病毒等。利用其吸附性小的特點，有時用它代替瓊脂、以作為免疫電泳或凝膠內(nèi)沉降反應(yīng)的支持物。瓊脂糖凝膠具有多孔性，其孔徑大小與DNA分子的雙螺旋直徑相當(dāng)，這使得它成為理想的分離
2024
10-08

丹麥SSI的血清怎么樣？
一、公司簡介SSIDiagnosticaA/S是一家北歐微生物實驗室體外診斷產(chǎn)品制造、分銷和技術(shù)服務(wù)公司。SSIDiagnostica為全球眾多實驗室、診所和制藥商提供服務(wù)。在國際上，SSIDiagnostica提供快速診斷測試、疫苗產(chǎn)品、抗血清和其他幾種體外診斷產(chǎn)品的質(zhì)量控制測試。此外，SSIDiagnostica還在北歐地區(qū)銷售來自外部合作伙伴的精選產(chǎn)品。SSIDiagnostica的歷史可以追溯到1902年，是著名的StatensSerumInstitut的一個部門。2016年，Adeli
2024
09-29

WB實驗之內(nèi)參蛋白的選擇
在進行WB（WesternBlot）實驗時，選擇合適的內(nèi)參確實至關(guān)重要。內(nèi)參的主要作用是像一把“尺子”，用來衡量和校正每個樣本的上樣量，以及在上樣過程中可能產(chǎn)生的實驗誤差。這樣，我們就可以更加確信實驗結(jié)果的準確性，因為它們已經(jīng)經(jīng)過了內(nèi)參的校正。一、選擇內(nèi)參需要遵循的原則？1.樣本種屬來源匹配性原則：內(nèi)參蛋白的選擇應(yīng)基于實驗樣本的物種來源。對于哺乳動物細胞和組織樣本，常用的內(nèi)參包括β-actin、β-tubulin、GAPDH、LaminB等。這些蛋白在哺乳動物細胞中表達穩(wěn)定，適合作為內(nèi)參?？缥锓N
2024
09-29

為了獲得完整的全血RNA，血液采集和抽提有什么建議嗎？
首先血液通常在臨床地點采集，但在其他地方進行RNA分離處理。這導(dǎo)致在運輸和RNA純化之前需要RNA穩(wěn)定。血液含有復(fù)雜的細胞成分，含RNA的目標(biāo)細胞白細胞，占細胞質(zhì)量的1%以下。血液中含有的生化物質(zhì)會影響下游的應(yīng)用。如RNA酶、抗凝血劑和血紅素等，需要有專業(yè)的產(chǎn)品進行純化。凱杰提出了解決方案：一、EDTA抗凝管采集的新鮮人全血，可搭配QIAampRNABloodMiniKit（貨號：52304）來提取高質(zhì)量的總RNA（＞200nt）；二、采用PAXgenBloodRNATubes（貨號：76216
2024
09-29

FUJIFILM Wako——CLEM用熒光蛋白表達載體
FUJIFILMWako推出了適用于光電關(guān)聯(lián)顯微技術(shù)（CLEM）的熒光蛋白表達載體。載體表達的熒光蛋白（CLEM-Red,CLEM-Green）可通過CLEM用熒光恢復(fù)試劑（TUKSolution,TUKSolutionformulticolor）恢復(fù)被氧化鋨淬滅的電子顯微鏡樣品中的熒光，從而實現(xiàn)使用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡觀察同一切片。◆載體概要◆產(chǎn)品一覽購前須知：本系列載體僅供科研使用。如有需要，請聯(lián)系FUJIFILMWako代理——天津益元利康生物科技有限公司！FUJIFILMWako天津代
2024
09-29

Wnt信號通路
一、Wnt信號通路簡介Wnt在1982年shou次在小鼠胰腺癌中發(fā)現(xiàn)，由于此基因激活依賴小鼠乳腺癌相關(guān)病毒基因的插入，因此，當(dāng)被命名為Int-1。之后的研究表明，Int1基因在小鼠正常胚胎發(fā)育中發(fā)揮重要作用，與果蠅的無翅（Wingless）基因功能相似，均可控制胚胎的軸向發(fā)育。此后大量研究提示Int1基因在神經(jīng)系統(tǒng)胚胎發(fā)育中的重要性。因兩者基因與蛋白功能的相似性，研究者將Wingless與Int1合并，賦名為Wnt基因。人Wnt基因定位于12q13。在胚胎發(fā)育中，Wnt基因調(diào)控的重要信號傳導(dǎo)系統(tǒng)
2024
09-27

為什么CCK8鏡下趨勢是對的，測出來的OD值卻不對？？
CCK-8實驗中，鏡下趨勢正確但測出的OD值不準確的問題可能由多種原因?qū)е?。那么影響CCK8結(jié)果的因素到底有哪些？一、細胞接種數(shù)量過多首先，細胞接種數(shù)量過多可能導(dǎo)致OD值過高。當(dāng)細胞數(shù)量過多時，它們可能會重疊生長，導(dǎo)致測得的OD值偏高。此外，如果細胞密度過高，可能會影響藥物的均勻分布，從而影響實驗結(jié)果?。二、藥物作用時間不足或鋪板細胞密度太大其次，藥物作用時間不足或鋪板細胞密度太大也可能導(dǎo)致測量不準確，都可能影響到細胞的生長狀態(tài)和最終測得的OD值?。三、誤差操作過程中的誤差也是導(dǎo)致OD值不準確的

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