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紫外可見分光光度計原理是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產生的吸收光譜。由于各種物質具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。
紫外可見分光光度計原理的使用注意事項
(1)預熱是保證儀器準確穩(wěn)定的重要步驟。
(2)比色皿的清潔程度,直接影響實驗結果.因此,特別要將比色皿清洗干凈.先用自來水將用過的比色皿反復沖洗,然后用蒸餾水淋洗,倒立于濾紙片上,待干后再收回比色皿盒中.必要時,還要對比色皿進行更精細的處理,如用濃硝酸或鉻酸洗液浸泡,沖洗。
(3)比色皿與分光光度計應配套使用,否則會引起較大的實驗誤差.比色皿不能單個調換1.37200型光柵分光光度計的使用注意事項。
(4)比色皿內盛液應為其容量的2/3,過少會影響實驗結果,過多易在測量過程中外溢,污染儀器.比色皿中試樣裝入量應為2/3～3/4之間。
(5)拿放比色皿時,應持其"毛面",杜絕接觸光路通過的"光面".如比色皿外表面有液體,應用綢布拭干,以保證光路通過時不受影響。
(6)若待測液濃度過大,應選用短光徑的比色皿,一般應使吸光度讀數(shù)處于0.1～0.8范圍內為宜.由于測定空白,標準和待測溶液時使用同樣光徑的比色皿,故不必考慮因光徑變化而引起的影響。
物質的吸收光譜本質上就是物質中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。分光光度分析就是根據(jù)物質的吸收光譜研究物質的成分、結構和物質問相互作用的有效手段。
此后，紫外可見分光光度計經不斷改進，又出現(xiàn)自動記錄、自動打印、數(shù)字顯示、微機控制等各種類型的儀器，使光度法的靈敏度和準確度也不斷提高，其應用范圍也不斷擴大。紫外可見分光光度法從問世以來，在應用方面有了很大的發(fā)展，尤其是在相關學科發(fā)展的基礎上，促使分光光度計儀器的不斷創(chuàng)新，功能更加齊全，使得光度法的應用更拓寬了范圍。目前，分光光度法已為工農業(yè)各個部門和科學研究的各個領域所廣泛采用，成為人們從事生產和科研的有力測試手段。
分光光度分析就是根據(jù)物質的吸收光譜研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團的信息。可以用標準光圖譜再結合其它手段進行定性分析。
根據(jù)Lambert-Beer定律說明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說明光的吸收與溶液濃度成正比；如果同時考慮吸收層厚度和溶液濃度對光吸收率的影響，即得朗伯-比耳定律。即A=εbc，(A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)，b為液池厚度，c為溶液濃度)就可以對溶液進行定量分析。
將分析樣品和標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質，則兩者的光譜圖應*一致。如果沒有標樣，也可以和現(xiàn)成的標準譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準確，精密度高，且測定條件要相同。
實驗證明，不同的極性溶劑產生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。
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