2xLab SuperHiFi PCR Master Mix(含染料)
2025-07-24
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2xLab SuperHiFi PCR Master Mix(含染料)
貨號:T1212
儲存條件:-20℃
產(chǎn)品組成:
組分 | 規(guī)格 S | 規(guī)格 M | 規(guī)格 L |
2× Lab SuperHF PCR Master Mix(含染料) | 1 ml | 5×1 ml | 20×1 ml |
2.5× PCR Enhancer | 1 ml | 1 ml | 5×1 ml |
產(chǎn)品簡介:
2xLab SuperHiFi PCR Master Mix(含染料)是即用型2×預混合溶液,包含Lab Super High-Fidelity DNA Polymerase、dNTPs 和精心優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液,只需加入模板、引物和水即可進行高保真PCR反應(yīng)。本產(chǎn)品適用于以基因組DNA、cDNA、質(zhì)粒以及粗品為模板的PCR反應(yīng)。預混液中包含紅色和黃色示蹤染料,可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳。預混液中的紅色染料與1500 bp 雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近;黃色染料與10 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。
產(chǎn)品特點:
1. 保真度高,擴增速度快:保真度是普通Taq酶的70倍,擴增速度是Pfu的5倍。
2. 擴增片段長度長:使用λDNA、質(zhì)粒等簡單模板時,可以輕松擴增長達20 kb的片段;而使用基因組DNA等復雜模板時,能有效擴增長達12 kb的片段。
3. 2× Lab SuperHF PCR Master Mix對PCR抑制劑具有良好的耐受能力,對粗提樣本也能進行很好的擴增。
反應(yīng)體系:
試劑 | 使用量 |
2× Lab SuperHF PCR Master Mix(含染料) | 25 μl |
2.5× PCR Enhancer(可選) | 10 μla |
上游引物 (10 μM) | 1 μl |
下游引物 (10 μM) | 1 μl |
模板 | x μl |
ddH2O | Up to 50 μl |
模板用量:
模板種類 | 推薦用量 |
基因組DNA | 10~200 ng |
質(zhì)?;虿《綝NA | 10 pg~50 ng |
cDNA | 1~5 μl (不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10) |
粗品 | 1~5 μl (不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10) |
a. 當擴增片段 GC 含量 >60% 且優(yōu)化條件也無法正常擴增時,推薦使用 2.5×PCR Enhancer來優(yōu)化 PCR 反應(yīng)。與無染料的2× S705 HiFi Master Mix(T1211)相比,T1212所需的PCR Enhancer更少,請避免加入過量Enhancer導致擴增失敗程序推薦:Touchdown PCR(降落 PCR)程序。
反應(yīng)程序:
①三步法:
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性b | 95oC | 3-5 min | 1 |
變性 | 95oC | 10 s |
30-35 |
退火c | 55~72oC | 15s | |
延伸d | 72oC | 30 s/ kb | |
終延伸 | 72oC | 5 min | 1 |
4-8oC | Hold |
b. 對于普通模板,預變性可縮短至30~60 s;對于復雜模板,例如高 GC 序列,推薦延長預變性時間到3~5 min 以充分變性;
c. 根據(jù)引物 Tm 值設(shè)置退火溫度。如引物Tm值≥72℃,可刪除退火步驟,直接進行后續(xù)的延伸步驟(兩步法PCR)。如果需要,可以建立一個溫度梯度尋找引物與模板結(jié)合的最適溫度。此外,退火溫度直接決定擴增特異性。如發(fā)現(xiàn)擴增特異性差,可適當提高退火溫度;
d. 對于大多數(shù)模板,30s/kb即可有效擴增; 對于一些復雜模板,可延長延伸時間至30~60 s/kb。
②兩步法e:
步驟 | 溫度 | 時間 |
|
預變性 | 95oC | 3-5 min | 1 |
變性 | 95oC | 10 s | 30-35 |
退火&延伸 | 65~68oC | 30 s/ kb | |
終延伸 | 72oC | 5 min | 1 |
4-8oC | Hold |
e. 通常情況下使用兩步法和三步法進行 PCR 擴增,性能無顯著差異,可以根據(jù)操作習慣自行選擇。但對于一些復雜模板(如長片段,Tm 分布不均勻,特殊結(jié)構(gòu)模板),可以嘗試兩步法或者Touchdown PCR (降落PCR)法。此外,使用質(zhì)粒為模板進行點突變時,也建議使用兩步法。
③Touchdown PCR(降落 PCR)f法:
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 95oC | 3-5 min | 1 |
變性 | 95oC | 10 s |
30-40 |
退火 | 68℃ (-0.2℃/cycle) | 15s | |
延伸 | 72oC | 30 s/ kb | |
終延伸 | 72oC | 5 min | 1 |
4-8oC | Hold |
f. 該程序僅供參考,Touchdown PCR (降落PCR)有多種程序可靈活調(diào)整,請根據(jù)實驗需求與習慣自行決定是否采用。
注意事項:
1. 請不要使用含尿mi啶的引物和模板。
2. Lab Super High-Fidelity DNA Polymerase具有較強的校正活性,產(chǎn)生的擴增產(chǎn)物是平末端,如果用于下一步克隆實驗,建議使用平末端克隆。如果擴增產(chǎn)物需要用于TA克隆,加A之前須*行DNA純化。
3. 為了提高擴增成功率和產(chǎn)量,請使用高質(zhì)量的模板。
4. 請設(shè)置PCR儀程序時選擇“Tube”而不是“Block”模式,部分機型兩種模式升降溫差異較大,“Block”模式可能導致復雜模板擴增失敗。
北京蘭博利德商貿(mào)有限公司
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