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2xLab SuperHiFi PCR Master Mix(含染料)

2025-07-24

產(chǎn)      地:
暫無
所在地區(qū):
北京北京市
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2xLab SuperHiFi PCR Master Mix(含染料)

貨號:T1212

儲存條件:-20℃

產(chǎn)品組成:

組分

規(guī)格 S

規(guī)格 M

規(guī)格 L

2× Lab SuperHF PCR Master Mix(含染料)

1 ml

5×1 ml

20×1 ml

2.5× PCR Enhancer

1 ml

1 ml

5×1 ml

產(chǎn)品簡介:

2xLab SuperHiFi PCR Master Mix(含染料)是即用型2×預混合溶液,包含Lab Super High-Fidelity DNA Polymerase、dNTPs 和精心優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液,只需加入模板、引物和水即可進行高保真PCR反應(yīng)。本產(chǎn)品適用于以基因組DNA、cDNA、質(zhì)粒以及粗品為模板的PCR反應(yīng)。預混液中包含紅色和黃色示蹤染料,可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳。預混液中的紅色染料與1500 bp 雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近;黃色染料與10 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

產(chǎn)品特點:

1. 保真度高,擴增速度快:保真度是普通Taq酶的70倍,擴增速度是Pfu的5倍。

2. 擴增片段長度長:使用λDNA、質(zhì)粒等簡單模板時,以輕松擴增長達20 kb的片段;而使用基因組DNA等復雜模板時,能有效擴增長達12 kb的片段。

3. 2× Lab SuperHF PCR Master Mix對PCR抑制劑具有良好的耐受能力,對粗提樣本也能進行很好的擴增。


反應(yīng)體系:                                      

試劑

使用量

2× Lab SuperHF PCR Master Mix(含染料)

25 μl

2.5× PCR Enhancer(可選)

10 μla

上游引物 (10 μM)

1 μl

下游引物 (10 μM)

1 μl

模板

x μl

ddH2O

Up to 50 μl

模板用量:

模板種類

推薦用量

基因組DNA

10~200 ng

質(zhì)?;虿《綝NA

10 pg~50 ng

cDNA

1~5 μl (不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10)

粗品

1~5 μl (不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10)

a. 當擴增片段 GC 含量 >60% 且優(yōu)化條件也無法正常擴增時,推薦使用 2.5×PCR Enhancer來優(yōu)化 PCR 反應(yīng)。與無染料的2× S705 HiFi Master Mix(T1211)相比,T1212所需的PCR Enhancer更少,請避免加入過量Enhancer導致擴增失敗程序推薦:Touchdown PCR(降落 PCR)程序。


反應(yīng)程序:


①三步法:

步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

預變性b

95oC

3-5 min

1

變性

95oC

10 s

30-35

退火c

55~72oC

15s

延伸d

72oC

30 s/ kb

終延伸

72oC

5 min

1


4-8oC

Hold


b. 對于普通模板,預變性可縮短至30~60 s;對于復雜模板,例如高 GC 序列,推薦延長預變性時間到3~5 min 以充分變性;

c. 根據(jù)引物 Tm 值設(shè)置退火溫度。如引物Tm值≥72℃,可刪除退火步驟,直接進行后續(xù)的延伸步驟(兩步法PCR)。如果需要,可以建立一個溫度梯度尋找引物與模板結(jié)合的最適溫度。此外,退火溫度直接決定擴增特異性。如發(fā)現(xiàn)擴增特異性差,可適當提高退火溫度;

d. 對于大多數(shù)模板,30s/kb即可有效擴增; 對于一些復雜模板,可延長延伸時間至30~60 s/kb。

②兩步法e

步驟

溫度

時間


循環(huán)數(shù)

預變性

95oC

3-5 min

1

變性

95oC

10 s

30-35

退火&延伸

65~68oC

30 s/ kb

終延伸

72oC

5 min

1


4-8oC

Hold


e. 通常情況下使用兩步法和三步法進行 PCR 擴增,性能無顯著差異,可以根據(jù)操作習慣自行選擇。但對于一些復雜模板(如長片段,Tm 分布不均勻,特殊結(jié)構(gòu)模板),可以嘗試兩步法或者Touchdown PCR (降落PCR)法。此外,使用質(zhì)粒為模板進行點突變時,也建議使用兩步法。

③Touchdown PCR(降落 PCR)f法:

步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

預變性

95oC

3-5 min

1

變性

95oC

10 s


30-40

退火

68℃ (-0.2℃/cycle)

15s

延伸

72oC

30 s/ kb

終延伸

72oC

5 min

1


4-8oC

Hold


f. 該程序僅供參考,Touchdown PCR (降落PCR)有多種程序可靈活調(diào)整,請根據(jù)實驗需求與習慣自行決定是否采用。


注意事項

1. 請不要使用含尿mi啶的引物和模板。

2. Lab Super High-Fidelity DNA Polymerase具有較強的校正活性,產(chǎn)生的擴增產(chǎn)物是平末端,如果用于下一步克隆實驗,建議使用平末端克隆。如果擴增產(chǎn)物需要用于TA克隆,加A之前須*行DNA純化。

3. 為了提高擴增成功率和產(chǎn)量,請使用高質(zhì)量的模板。

4. 請設(shè)置PCR儀程序時選擇“Tube”而不是“Block”模式,部分機型兩種模式升降溫差異較大,“Block”模式可能導致復雜模板擴增失敗。




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