化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>行業(yè)專用試劑>生化與分子生物學(xué)用試劑> FITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(FITC Phalloidin)
FITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(FITC Phalloidin)
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號
- 產(chǎn)地 翌圣生物
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/7/16 13:14:13
- 訪問次數(shù) 4788
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 40735ES75 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏(Amanita phalloides)的環(huán)狀七肽毒素,以高親和力(Kd= 20 nM)選擇性結(jié)合于絲狀肌動(dòng)蛋白F-actin,而不會與單體肌動(dòng)蛋白G-actin結(jié)合,通常用來標(biāo)記組織切片,細(xì)胞培養(yǎng)物或無細(xì)胞體系中的F-actin,從而對F-actin進(jìn)行定性和定量分析。另外,鬼筆環(huán)肽衍生物也以相近的親和力結(jié)合于大小纖維,無論是動(dòng)植物來源的肌肉細(xì)胞或非肌肉細(xì)胞,按照每一個(gè)肌動(dòng)蛋白亞基約與一個(gè)鬼筆環(huán)肽分子的計(jì)量比結(jié)合。非特異性結(jié)合幾乎可忽略,染色區(qū)域和非染色區(qū)域辨識度非常明顯。因此,鬼筆環(huán)肽衍生物特別適合替代肌動(dòng)蛋白(Actin)抗體進(jìn)行相關(guān)研究。另外鬼筆環(huán)肽衍生物很小,直徑約12-15?,分子量<2000 Daltons,未標(biāo)記肌動(dòng)蛋白(Actin)的許多生理特性都得以維持,比如,同肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I等仍能發(fā)生反應(yīng);鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質(zhì);以及甘油抽提的肌纖維標(biāo)記后仍可收縮等。
鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)的結(jié)合阻止絲狀肌動(dòng)蛋白(微絲)的解離,穩(wěn)定微絲結(jié)構(gòu),從而破壞微絲的聚合-去聚合的動(dòng)態(tài)平衡。此特性使得肌動(dòng)蛋白聚合發(fā)生的臨界濃度(CC)降至<1 µg/mL,因此,可用作一種聚合促進(jìn)劑。此外,鬼筆環(huán)肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。
本品為FITC標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽,染色反應(yīng)特異性強(qiáng),對比性高,具有比Actin抗體更好的染色效果,適合用作F-actin的定性和定量檢測。另外,經(jīng)本品結(jié)合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學(xué)特性。且本品的結(jié)合沒有物種差異性,適用性廣泛。
我司提供儲存液形式(濃度為20 µM)的FITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽,用戶根據(jù)自身需求選擇,建議使用濃度為80~200 nM。
分子式(Molecular Formula) | C56H60N10O15S2 |
分子量(Molecular Weight) | 1177.3 |
最大激發(fā)/發(fā)射波長(Ex/Em) | 495~496/513~516 nm |
多肽序列(Sequence) | FITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3 to 6) |
外觀(Appearance) | 淡黃色至黃色溶液 |
冰袋運(yùn)輸。-20 ℃避光干燥保存,1年有效。
Q:為什么我激發(fā)后熒光很快就猝滅了?
A:可能是使用濃度過高造成,可以再適當(dāng)降低一些試劑濃度;可以在尋找視野時(shí)使用低能量的激光,待找到合適視野時(shí)使用高能量激光激發(fā)觀察。2.鬼筆環(huán)肽不能和點(diǎn)擊反應(yīng)(例:EDU)共染色,否則鬼筆環(huán)肽沒熒光信號。
Q:該試劑可以應(yīng)用于組織切片嗎?
A:石蠟切片或者冰凍切片都不建議,可能效果不好,建議使用抗肌動(dòng)蛋白的抗體。
Q:每次是添加多少試劑量(工作液)進(jìn)行熒光顯微鏡檢測?
A:建議添加的量是能夠全浸沒細(xì)胞即可,不同的細(xì)胞染色情況不同,相應(yīng)鬼筆環(huán)肽使用量也需根據(jù)不同情況而定。
Q:幾種不同的鬼筆環(huán)肽的區(qū)別是什么,如何選擇?
A:是熒光基團(tuán)的不同,激發(fā)出的熒光顏色不同,用于區(qū)分共染時(shí)其他熒光染料的熒光顏色,對于選擇需要機(jī)器滿足激發(fā)和發(fā)射波長要求。
Q:細(xì)胞處理時(shí),須用BSA 封閉嗎?
A:是的,這樣做可以降低背景色。
Q:鬼筆環(huán)肽染色存在種屬區(qū)分嗎?
A:對于對固定的細(xì)胞染色,不區(qū)分種屬。
Q:想染植物細(xì)胞微絲,鬼筆環(huán)肽能不能使用?
A:由于植物含細(xì)胞壁,因此在未破壞細(xì)胞壁時(shí)染色進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)較為困難,因此對于含細(xì)胞壁細(xì)胞染色可以去除細(xì)胞壁制備原生質(zhì)體進(jìn)行染色。
Q:染色后多久進(jìn)行上機(jī)觀察檢測,可以放置過夜嗎?
A:不推薦,染色后應(yīng)盡量在 60min 內(nèi)完成上機(jī)觀察和檢測過程。
Q:關(guān)于幾種產(chǎn)品的狀態(tài)及含量問題介紹?
A:iFluor 系列的 40737、40762、40736 均為粉末,40734 和 40735 均為液體形式提供。對于 300T
的含量不是指含有 300ul,具體的 300T 是指能檢測 300 次左右。
Q:我用鬼筆環(huán)肽染小鼠的巨噬細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)鬼筆環(huán)肽沒有進(jìn)入巨噬細(xì)胞中,而是在巨噬細(xì)胞的表面,
有什么更好的建議嘛?
A:巨噬細(xì)胞染色效果較差一些,建議延長透化時(shí)間,例如用丙酮(≤-20℃)脫水或者用 0.5% Triton X-100 溶液透化處理 10-15min。
Q:鬼筆環(huán)肽可以染活細(xì)胞,以及染色后可以用流式檢測嘛?
A: 不推薦,熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽不具有細(xì)胞透性,因此沒有被廣泛用于活細(xì)胞標(biāo)記 。
Q:我的細(xì)胞過表達(dá)G-actin,會不會影響鬼筆環(huán)肽的染色效果?
A:不會影響鬼筆環(huán)肽的染色效果。因?yàn)楣砉P環(huán)肽只選擇性結(jié)合于絲狀肌動(dòng)蛋白 F-actin,而不會與
單體肌動(dòng)蛋白 G-actin 結(jié)合。
Q:鬼筆環(huán)肽可以雙標(biāo)染色嗎?
A:可以,例如可以與 DAPI 溶液對細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染。
Q:鬼筆環(huán)肽可以跟免疫熒光同時(shí)做嗎?
A:可以和抗體共染,可以先染抗體,再做鬼筆環(huán)肽的染色。
Q:可以用那些溶液來固定細(xì)胞,要注意什么?
A:可以用溶于PBS 的 4%多聚jia醛溶液進(jìn)行細(xì)胞固定,固定時(shí)避免固定劑中含有甲醇成分,因?yàn)榧状?/span>
在固定過程中可能破壞肌動(dòng)蛋白F-actin。
Q:鬼筆環(huán)肽染色后,封片保存在 4 度冰箱一段時(shí)間后,再檢測信號可以嗎?
A:不建議這樣操作,因?yàn)榉馄蠊砉P環(huán)肽的熒光信號會逐漸減弱。建議現(xiàn)加現(xiàn)測。