通用性DAB 染色試劑盒（鏈霉卵白素-生物素法）RT-SK004

 英文名稱：Universal DAB Detection Kit（Streptavidin-Biotin）

商品名稱：Splink DAB

【包裝規(guī)格】

RT-SK004：60人份；

通用性DAB 染色試劑盒（鏈霉卵白素-生物素法）RT-SK004

【預(yù)期用途】

本司生產(chǎn)的 DAB 染色試劑盒（鏈霉卵白素-生物素法）適用于檢測小鼠或兔源性一抗，對常規(guī)經(jīng)福爾馬林固定的石蠟切片、冷凍切片及細(xì)胞涂片、爬片中的靶抗原進(jìn)行檢測，適用于生物顯微鏡下觀察。

【檢驗(yàn)原理】

DAB 染色液（鏈霉卵白素-生物素法）使用生物素化、高親和力的二抗與一抗結(jié)合，過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素與生物素標(biāo)記的二抗結(jié)合。該復(fù)合物的過氧化物酶可以催化 DAB 底物，在所識別的抗原位置發(fā)生反應(yīng)生成棕黃色的沉淀。

【主要組成成份】

不同批號染色液各組成成份不可互換使用

本產(chǎn)品未提供如下試劑：二甲苯、乙醇（無水、95%、85%）、蒸餾水、中性樹膠、一抗、陽性質(zhì)控片、蘇木素、PBS 緩沖液。

【儲存條件及有效期】

2-8℃避光保存,不得凍存。自檢定合格之日起有效期為 12 個月。 使用時(shí)，采取單支試劑即拿即用的原則，盒中其余組分在 2-8℃的冰箱保存。單支試劑

在每次使用后，應(yīng)立即放回盒中。

【樣本要求】

新鮮活檢或外科樣本組織，中性福爾馬林固定或合適固定劑，固定時(shí)間8~24小時(shí)，參照《臨床技術(shù)操作規(guī)范 病理學(xué)分冊》要求取材、脫水、石蠟包埋并制成蠟塊。 組織切片厚度為 3–5 μm 黏附在防脫處理玻片上，放入 56–60°C 干燥箱中拷片兩個小時(shí)后，移出放置冷卻至室溫。

【檢驗(yàn)方法】

1 檢驗(yàn)所需儀器、設(shè)備

 移液器、免疫組化油筆、干燥箱、計(jì)時(shí)器、孵育盒、染色架、蓋玻片、生物顯微鏡、洗瓶

2 溶液配置

DAB顯色液：DAB顯色液需要在使用前配制。配制方法：在配備的小試管中依次滴加穩(wěn)定型DAB緩沖液1ml，穩(wěn)定型DAB底物50-100μl，穩(wěn)定型DAB色原50-100μl，以配制DAB顯 色液。配置好的DAB顯色液避光存放，24小時(shí)內(nèi)有效。

3 試驗(yàn)溫度條件：18-28℃

4 試驗(yàn)步驟

a) 脫蠟和水化

石蠟切片置于新鮮的二甲苯中，浸泡10分鐘×2次，

除去多余的液體后，置無水乙醇中，浸泡5分鐘×2次；

除去多余的液體后，置95%乙醇中，浸泡2分鐘；

除去多余的液體后，置85%乙醇中，浸泡2分鐘；

自來水沖洗1分鐘； PBS溶液沖洗1分鐘。

b) 抗原修復(fù)：參照一抗說明書進(jìn)行。

c）阻斷內(nèi)源性過氧化物酶

將抗原修復(fù)后的切片用自來水沖洗1分鐘，用油筆圈定玻片上的待測組織區(qū)域，PBS溶液沖洗1分鐘×1次。 除去PBS溶液，在油筆圈定的區(qū)域內(nèi)加100μl內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑，室溫下孵育10分鐘； PBS溶液沖洗1分鐘×3次。

d) 加非特異染色阻斷劑

除去PBS溶液，加100μl非特異染色阻斷劑，室溫下孵育10分鐘。

e) 加抗體

除去非特異染色阻斷劑，加100μl一抗，室溫下孵育60分鐘。 PBS溶液沖洗3分鐘×3次。

f) 加酶標(biāo)羊抗小鼠/兔IgG聚合物

除去PBS溶液，加100μl酶標(biāo)羊抗小鼠/兔IgG聚合物，室溫下孵育15分鐘。 PBS溶液沖洗3分鐘×3次。

g) 顯色

除去PBS溶液，加100-200μl新鮮配制的DAB顯色液，室溫下孵育3-5分鐘。

h) 復(fù)染

自來水沖洗，加100-200μl蘇木素體細(xì)胞染色液（我司產(chǎn)品：RT-S003）孵育10-30秒，或自行配制的蘇木素染色至細(xì)胞核淺藍(lán)色； PBS溶液或自來水沖洗返藍(lán)。

i) 脫水、透明、封片

置85%乙醇中，浸泡3分鐘； 置95%乙醇中，浸泡3分鐘； 置無水乙醇中，浸泡3分鐘； 二甲苯透明；中性樹膠和蓋玻片封片

j）生物顯微鏡閱片

5 結(jié)果判斷

該染色液會在相應(yīng)的抗原存在區(qū)域沉淀，出現(xiàn)棕黃色物質(zhì)。染色結(jié)果要由有資質(zhì)的病理醫(yī)生在生物顯微鏡下對染色后切片進(jìn)行觀察并進(jìn)行判斷。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1 抗原修復(fù)、孵育時(shí)間、溫度的修改或使用其他方法均有可能得出錯誤結(jié)果。 

2 在每一次染色過程中，必須有對照實(shí)驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行。

3 如果陽性組織對照不能顯示適當(dāng)?shù)年栃匀旧?，使用者?yīng)認(rèn)為該批次實(shí)驗(yàn)測試樣本的結(jié)果無效。

4 若酶標(biāo)羊抗小鼠/兔IgG聚合物孵育溫度過高或孵育時(shí)間過長，可能導(dǎo)致染色過強(qiáng)及背景染色。

【檢驗(yàn)方法的局限性】

 染色前，實(shí)驗(yàn)中的任一環(huán)節(jié)的不當(dāng)操作都有可能影響zui終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1 pH 值：非特異染色阻斷劑和酶標(biāo)羊抗小鼠/兔 IgG 聚合物 pH 值為 7.4±0.2；穩(wěn)定型 DAB緩沖液 pH 值為 7.6±0.2。

2 染色效果：用六種不同的一抗，配合相應(yīng)的陽性對照片進(jìn)行染色，六張陽性片中的特定細(xì)胞位置應(yīng)觀察到黃色或棕黃色著色，且無背景染色。同時(shí)，不使用一抗，直接使用染色液在以上六張陽性片上進(jìn)行染色，六張陽性片上未觀察到任何黃色或棕黃色著色。

3 批內(nèi)差：取同一批次的產(chǎn)品，檢測以上六種抗體同一來源的陽性對照片，同一來源的三份陽性對照片中特定細(xì)胞位置上觀察到黃色或棕黃色著色，且顏色無明顯差異，同時(shí)無背景染色。

【注意事項(xiàng)】

1 本染色液僅用于染色，不做其它用途。

2 本染色液*專業(yè)人員使用。

3 應(yīng)用適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)措施，以避免試劑同皮膚和眼睛接觸。

4 染色液中的 DAB 色原為可疑致癌物質(zhì)，操作中應(yīng)采用合理的防護(hù)措施。

6 若將本染色液中的組分與其他公司的產(chǎn)品混合使用，在染色過程中可能出現(xiàn)異常情況。

7 超過有效期的試劑活性可能降低，因此不得使用過期的染色液。

8 脫蠟不*，容易影響染色結(jié)果，建議免疫組化切片脫蠟與常規(guī)HE脫蠟分開。

9 為防止可能出現(xiàn)的假陽性、假陰性結(jié)果，在實(shí)驗(yàn)過程中需設(shè)置陽性與陰性對照。

10 操作中滴加試劑時(shí)，過多的PBS緩沖液未瀝干致使試劑被稀釋，將引起染色強(qiáng)度變?nèi)酰?/span> 因此，滴加試劑前應(yīng)除去多余的緩沖液。

11 使用中所產(chǎn)生的各種廢棄物都應(yīng)按《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》處理