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ZYM-SVEC01豬靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞系

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  • 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
  • 品牌 其他品牌
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  • 更新時間 2025/7/27 20:37:23
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ZYM-SVEC01豬靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞系
ZYM-SVEC01豬靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞系,ZYM-SVEC01 細(xì)胞系是從豬靜脈血管內(nèi)皮分離建立的上皮樣細(xì)胞系,因保留靜脈內(nèi)皮的特異性表型與功能,成為靜脈生物學(xué)研究、血栓形成機(jī)制解析及靜脈相關(guān)疾病模型構(gòu)建的核心工具。其與豬靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的基因同源性達(dá) 97%,在靜脈血管生成、抗凝功能模擬上表現(xiàn)突出,為解析靜脈疾病發(fā)病機(jī)制、開發(fā)靶向藥物提供了接近在體狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)平臺,尤其在深靜脈血栓、豬圓環(huán)病毒靜脈嗜性研究中具有不可替代的價值,與 PIEC 動脈內(nèi)皮細(xì)胞系形成血管研究的互補(bǔ)體系。
一、細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
  1. 來源與建立背景

ZYM-SVEC01 細(xì)胞系源自 2000 年我國學(xué)者從健康豬腸系膜靜脈分離的原代內(nèi)皮細(xì)胞,經(jīng)連續(xù)傳代獲得永生化表型(“ZYM-SVEC01” 中 “SVEC” 代表豬靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,“01” 為第 1 代克隆純化株)。該細(xì)胞系因能穩(wěn)定表達(dá)靜脈內(nèi)皮特異性標(biāo)志物,2005 年被確立為靜脈內(nèi)皮研究的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系,解決了原代靜脈內(nèi)皮細(xì)胞體外存活時間短、功能易丟失的問題,成為首ge能模擬靜脈內(nèi)皮功能的豬源細(xì)胞系。
  1. 形態(tài)與生長特征

細(xì)胞呈典型靜脈內(nèi)皮形態(tài),貼壁生長時呈短梭形或多邊形,排列較 PIEC 細(xì)胞疏松,胞質(zhì)富含囊泡結(jié)構(gòu),可見局部聚集形成的靜脈竇樣結(jié)構(gòu),細(xì)胞核呈橢圓形(核質(zhì)比約 1:4.2),核仁較 PIEC 細(xì)胞更明顯。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基,倍增時間約 32-36 小時(快于 PIEC 細(xì)胞),傳代比例 1:4 至 1:6,每周換液 2 次以維持細(xì)胞融合度在 60%-70%。細(xì)胞凍存復(fù)蘇存活率超 90%,連續(xù)傳代 150 次后仍保持穩(wěn)定核型(38 條染色體),靜脈內(nèi)皮功能標(biāo)志物表達(dá)無顯著下降,適合長期功能實(shí)驗(yàn)。
  1. 功能特性

  • 靜脈特異性標(biāo)志物與功能蛋白:高表達(dá)靜脈內(nèi)皮特異性標(biāo)志物,如 EphB4(陽性率 96%)、血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(VE-cadherin,陽性率 94%),其 EphB4 表達(dá)量是 PIEC 細(xì)胞的 4 倍,是靜脈表型的關(guān)鍵分子;同時表達(dá)組織型纖溶酶原激活物(t-PA,陽性率 90%)和血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM,陽性率 88%),抗凝功能活性顯著高于 PIEC 細(xì)胞(t-PA 分泌量達(dá) 12μg/10?細(xì)胞 / 天,是 PIEC 的 2.5 倍),能模擬靜脈內(nèi)皮的抗凝優(yōu)勢。

  • 血管生成與屏障功能:在 Matrigel 基質(zhì)上 48 小時內(nèi)形成分支較少的管狀結(jié)構(gòu),管腔直徑較 PIEC 細(xì)胞大 30%(模擬靜脈血管特征),血管生成速率雖慢于 PIEC 細(xì)胞,但對缺氧的敏感性更高(缺氧條件下 VEGF 分泌量提升 6 倍);體外構(gòu)建的內(nèi)皮屏障跨上皮電阻(TEER)值達(dá) 150Ω?cm2,通透性高于 PIEC 細(xì)胞,符合靜脈內(nèi)皮的生理特征。

  • 病原體敏感性:對豬圓環(huán)病毒 2 型、豬流行性腹瀉病毒等具有高度敏感性,豬圓環(huán)病毒 2 型感染后 72 小時出現(xiàn)典型細(xì)胞病變(胞質(zhì)內(nèi)包涵體、細(xì)胞聚集成團(tuán)),病毒滴度達(dá) 10?.? TCID??/mL,且病毒可通過靜脈內(nèi)皮細(xì)胞向周圍組織擴(kuò)散,模擬病毒在靜脈系統(tǒng)的播散過程。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 靜脈疾病機(jī)制研究

  • 深靜脈血栓模型:在低血流剪切力(5 dyn/cm2)條件下,ZYM-SVEC01 細(xì)胞的血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子 1(PECAM-1)表達(dá)量下降 40%,凝xue酶生成量增加 3 倍,同時纖維蛋白沉積明顯,模擬深靜脈血栓形成的早期病理變化,其血栓形成相關(guān)指標(biāo)與豬體內(nèi)模型的一致性達(dá) 90%,顯著高于 PIEC 細(xì)胞系。

  • 靜脈瓣膜功能研究:通過該細(xì)胞系研究靜脈瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞的特性,發(fā)現(xiàn)瓣膜區(qū)細(xì)胞的 EphB4 表達(dá)量是非瓣膜區(qū)的 2 倍,且對剪切力的耐受性更強(qiáng),為靜脈瓣膜功能不全的機(jī)制解析提供關(guān)鍵模型。

  1. 抗病毒研究與疫苗開發(fā)

  • 病毒靜脈嗜性研究:利用其對豬圓環(huán)病毒 2 型的敏感性,發(fā)現(xiàn)病毒通過結(jié)合細(xì)胞表面的硫suan軟骨素 A 進(jìn)入細(xì)胞,感染后可使靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 t-PA 分泌量下降 60%,抗凝功能受損,揭示病毒導(dǎo)致靜脈血栓的分子機(jī)制。

  • 疫苗效力評價:作為豬流行性腹瀉病毒疫苗的效力檢測細(xì)胞系,其病毒中和試驗(yàn)結(jié)果與仔豬攻毒保護(hù)率一致性達(dá) 85%,較 PIEC 細(xì)胞提升 10%,被用于評估疫苗對腸道靜脈內(nèi)皮的保護(hù)效果。

  1. 藥物研發(fā)與安全性評價

  • 抗靜脈血栓藥物篩選:基于其抗凝功能特性建立高通量藥物篩選體系,日均可檢測 150 種化合物。篩選出的新型 t-PA 激活劑可使 ZYM-SVEC01 細(xì)胞的纖溶活性提升 2 倍,在動物模型中能顯著溶解已形成的靜脈血栓,為深靜脈血栓治療提供候選藥物。

  • 靜脈毒性評價:用于評估藥物對靜脈內(nèi)皮的損傷,某靜脈注射hua療藥物在該模型中的半數(shù)毒性濃度(TC??)與豬體內(nèi)靜脈炎發(fā)生率的相關(guān)性達(dá) 88%,顯著高于 PIEC 細(xì)胞系,為藥物靜脈毒性早期評價提供可靠工具。

三、培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)
  1. 基礎(chǔ)培養(yǎng)方案

  • 培養(yǎng)基:DMEM 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸,pH 維持在 7.2-7.4;為促進(jìn)靜脈表型維持,可添加 10ng/mL 血管內(nèi)皮生長因子 C(VEGF-C),使 EphB4 表達(dá)量提升 35%。

  • 傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 70% 時,消化處理后按 1:5 比例接種,離心速度 800rpm,24 小時貼壁率超 95%,避免過度融合(>80% 會導(dǎo)致靜脈特異性功能下降)。

  • 凍存保護(hù):采用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基,細(xì)胞密度 1.5×10?個 /mL,程序降溫至 - 80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮,復(fù)蘇時 37℃水浴 1 分鐘,接種至預(yù)涂纖維連接蛋白的培養(yǎng)瓶,存活率可達(dá) 90%。

  1. 功能實(shí)驗(yàn)操作

  • 靜脈血管生成檢測:細(xì)胞以 4×10?個 / 孔接種至 Matrigel 包被的 24 孔板,培養(yǎng) 48 小時后通過 ImageJ 軟件定量分析管腔直徑與分支數(shù)(靜脈血管特征為大管腔、少分支),結(jié)果變異系數(shù)<10%。

  • 抗凝功能檢測:采用發(fā)色底物法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清中 t-PA 活性,或通過凝xue酶原時間(PT)檢測評估細(xì)胞表面抗凝物質(zhì)的活性,與豬靜脈組織的相關(guān)性達(dá) 85%。

四、優(yōu)勢與局限性
  • 優(yōu)勢

  1. 靜脈內(nèi)皮特異性:是唯yi能穩(wěn)定模擬豬靜脈內(nèi)皮功能的細(xì)胞系,靜脈標(biāo)志物表達(dá)與抗凝功能顯著優(yōu)于 PIEC 等動脈內(nèi)皮細(xì)胞系,為靜脈疾病研究提供專屬模型。

  1. 疾病模型精準(zhǔn)度高:在深靜脈血栓等靜脈疾病模擬中的生理相關(guān)性達(dá) 90%,遠(yuǎn)高于通用內(nèi)皮細(xì)胞系,被國際靜脈學(xué)會列為推薦模型。

  1. 與動脈細(xì)胞系互補(bǔ):與 PIEC 細(xì)胞系形成血管研究的完整體系,可同時模擬動脈與靜脈的差異功能,為血管系統(tǒng)整體研究提供便利。

  • 局限性

  1. 血管類型局限:源自腸系膜靜脈,對大靜脈(如下腔靜脈)功能的模擬有限,需結(jié)合不同部位靜脈細(xì)胞系使用。

  1. 傳代穩(wěn)定性較差:連續(xù)傳代超過 80 代后靜脈特異性標(biāo)志物表達(dá)下降 15%,需嚴(yán)格控制傳代次數(shù)以保持功能穩(wěn)定。

  1. 培養(yǎng)成本較高:對纖維連接蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)依賴性強(qiáng),培養(yǎng)成本是 PIEC 細(xì)胞的 1.3 倍,限制大規(guī)模應(yīng)用。

五、研究意義與展望
ZYM-SVEC01 細(xì)胞系的建立填bu了豬靜脈內(nèi)皮研究模型的空白,其在深靜脈血栓、病毒靜脈嗜性研究中的應(yīng)用,推動了人類對靜脈疾病與病毒感染機(jī)制的認(rèn)知。未來,通過基因編輯技術(shù)引入人類靜脈特異性基因(如凝血調(diào)節(jié)因子),可提升其在人類疾病研究中的適用性;結(jié)合微流控技術(shù)構(gòu)建 “動靜脈交互芯片” 模型,有望模擬體內(nèi)動靜脈吻合處的復(fù)雜微環(huán)境,為血管系統(tǒng)協(xié)同研究提供更強(qiáng)大的平臺。作為豬源靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的代表,ZYM-SVEC01 與 PIEC 動脈內(nèi)皮細(xì)胞系形成功能互補(bǔ),共同推動血管生物學(xué)與疾病研究的發(fā)展。

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