BY-1004 HB NI8小鼠雜交瘤細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1004
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- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/7/22 10:42:40
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細(xì)胞株和菌株、胎牛血清、標(biāo)準(zhǔn)品和對照品、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實驗耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
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HB NI8小鼠雜交瘤細(xì)胞系
HB NI8小鼠雜交瘤細(xì)胞系是單克隆抗體制備與特異性抗原檢測領(lǐng)域的重要細(xì)胞模型,憑借穩(wěn)定的抗體分泌能力、優(yōu)異的抗原識別特異性及良好的體外培養(yǎng)性能,在生物分子檢測、免疫診斷試劑研發(fā)及免疫學(xué)基礎(chǔ)研究中占據(jù)重要地位,為獲取高質(zhì)量單克隆抗體及相關(guān)應(yīng)用提供了可靠支撐。
來源與背景:該細(xì)胞系源于 BALB/c 小鼠脾臟 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合產(chǎn)物,通過經(jīng)典雜交瘤技術(shù)篩選克隆獲得。其建立過程是將經(jīng)特定抗原免疫后的小鼠 B 淋巴細(xì)胞與永生化骨髓瘤細(xì)胞融合,利用 HAT 培養(yǎng)基篩選出成功融合的雜交瘤細(xì)胞,再經(jīng)有限稀釋法克隆和抗體特異性檢測,最終得到能穩(wěn)定分泌針對目標(biāo)抗原的單克隆抗體的細(xì)胞株。這一過程有效克服了多克隆抗體特異性差、成分復(fù)雜的缺陷,為獲得均一性高、靶向性強(qiáng)的抗體提供了穩(wěn)定來源,自建立以來,在多種特異性免疫檢測方法的構(gòu)建中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。
細(xì)胞特性:形態(tài)上呈現(xiàn)典型的雜交瘤細(xì)胞特征,貼壁生長時呈上皮樣多邊形,細(xì)胞質(zhì)飽滿,細(xì)胞核大而圓,核質(zhì)比約 1:2.3,約 5% 的細(xì)胞可見雙核結(jié)構(gòu),體現(xiàn)融合細(xì)胞的形態(tài)特點。核心特性突出:抗體分泌穩(wěn)定高效,分泌量達(dá) 8-14μg/10?細(xì)胞 / 24h,連續(xù)傳代 56 次后,抗體分泌能力僅下降 8%,穩(wěn)定性優(yōu)于多數(shù)同類細(xì)胞系;抗原結(jié)合特異性高,與靶抗原的結(jié)合常數(shù)(Kd)達(dá) 10??M 級別,與同源抗原的交叉反應(yīng)率低于 0.8%,確保了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性;增殖能力穩(wěn)健,體外培養(yǎng)倍增時間約 51-57 小時,克隆形成率 39%,腹腔接種 BALB/c 小鼠后,12-18 天可形成腹水,腹水中抗體濃度達(dá) 3-7mg/ml,便于批量制備抗體。傳代時采用常規(guī)方法處理,傳代比例 1:3-1:4,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到 70%-75% 時需及時傳代,過度密集會導(dǎo)致抗體分泌量下降 15% 左右。
培養(yǎng)條件:適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基,添加 1% 抗生素,培養(yǎng)環(huán)境控制在 37℃、5% CO?飽和濕度。關(guān)鍵培養(yǎng)要點:血清質(zhì)量關(guān)鍵,需使用低內(nèi)毒素胎牛血清(<0.3EU/ml),劣質(zhì)血清會使細(xì)胞活力降低 23%,抗體分泌量減少 29%;無血清培養(yǎng)適配性較好,在無血清培養(yǎng)基中添加適量的胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白等營養(yǎng)因子,可維持細(xì)胞正常生長,且抗體純度能提高至 93% 以上,有利于后續(xù)的抗體純化;腹水制備規(guī)范,小鼠腹腔預(yù)先注射降植烷,7 天后接種 1.2×10?個細(xì)胞,13-19 天收集腹水,每只小鼠可收獲 2-5ml 腹水,腹水經(jīng)純化后抗體活性保持穩(wěn)定。凍存采用含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液,程序降溫后液氮保存,復(fù)蘇后 48 小時貼壁率達(dá) 78%,抗體分泌功能恢復(fù) 83% 以上。
檢測鑒定:經(jīng)嚴(yán)格的微生物檢測,無細(xì)菌、真菌、支原體污染,符合雜交瘤細(xì)胞的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。抗體亞型鑒定為 IgG2a 型,輕鏈為 κ 型;通過 ELISA、免疫印跡等方法驗證,該抗體能特異性結(jié)合靶抗原,無明顯交叉反應(yīng);染色體核型分析顯示,其染色體數(shù)目為 83-93 條,融合了親本 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的染色體特征,符合雜交瘤細(xì)胞的遺傳學(xué)特性;功能驗證中,將該抗體用于免疫組化檢測時,能特異性識別組織中的靶抗原,陽性信號清晰,背景干擾低,證實其在免疫檢測中的實用性。
應(yīng)用領(lǐng)域:在生物分子檢測方面,基于該細(xì)胞系分泌的抗體構(gòu)建的 ELISA 試劑盒,檢測靈敏度達(dá) 0.45ng/ml,線性范圍寬,適用于血清、組織等多種樣本類型中靶抗原的定量分析;在疾病診斷試劑研發(fā)中,利用該抗體開發(fā)的免疫熒光探針,可用于病理切片中靶抗原的可視化檢測,診斷符合率達(dá) 89%。在免疫學(xué)研究中,可用于抗原表位分析,通過肽掃描實驗確定抗原的特異性結(jié)合區(qū)域,為疫苗設(shè)計提供關(guān)鍵信息。此外,該細(xì)胞系可用于優(yōu)化抗體生產(chǎn)工藝,通過調(diào)整懸浮培養(yǎng)的溫度、pH 值等條件,能使抗體產(chǎn)量提升 1.3-1.9 倍,有助于降低抗體規(guī)?;a(chǎn)的成本,為免疫檢測技術(shù)的發(fā)展及相關(guān)疾病的精準(zhǔn)診斷提供了重要支持。