BY-0796 CTLL-2 CTLL2小鼠T淋巴細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
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- 型號 BY-0796
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- 更新時間 2025/7/14 11:06:50
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CTLL-2 [CTLL2]小鼠T淋巴細(xì)胞系
CTLL-2 [CTLL2]小鼠T淋巴細(xì)胞系源自 C57BL/6 小鼠的細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞（CTL），是保留 T 細(xì)胞免疫特性和 IL-2 依賴性增殖特征的經(jīng)典免疫細(xì)胞模型，在 T 細(xì)胞活化機制、細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)及免疫調(diào)節(jié)劑篩選研究中具有重要價值，為解析 T 細(xì)胞的增殖調(diào)控和細(xì)胞毒性功能提供了理想工具。
該細(xì)胞系呈現(xiàn)典型的 T 淋巴細(xì)胞形態(tài)與表型特征。顯微鏡下，細(xì)胞呈圓形或橢圓形，以懸浮生長為主，偶見少量細(xì)胞聚集，單個細(xì)胞直徑約 10-12μm，核質(zhì)比高，細(xì)胞核呈圓形，染色質(zhì)呈粗網(wǎng)狀，可見 1-2 個清晰核仁，核分裂象每 10 個高倍視野 4-6 個，胞質(zhì)少而嗜堿性，可見少量嗜天青顆粒（類似細(xì)胞毒性顆粒）。電鏡下可見胞質(zhì)內(nèi)有較多游離核糖體和少量線粒體，部分細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)存在電子致密顆粒（含穿孔素和顆粒酶），符合細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)特點。免疫表型分析顯示，細(xì)胞高表達(dá) T 細(xì)胞特異性標(biāo)志物 CD3（陽性率 95%）、CD8（陽性率 90%），流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示 CD3?CD8?雙陽性細(xì)胞比例顯著高于其他 T 細(xì)胞系，而 CD4 表達(dá)陰性，證實其細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞（CD8?）的表型特征，同時表達(dá) IL-2 受體 α 鏈（CD25，陽性率 85%），為其 IL-2 依賴性增殖提供分子基礎(chǔ)。
體外培養(yǎng)體系中，CTLL-2 細(xì)胞展現(xiàn)出嚴(yán)格的 IL-2 依賴性增殖特性與穩(wěn)定的功能活性。最適培養(yǎng)條件為含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)基，添加 20U/mL 重組 IL-2，在 37℃、5% CO?環(huán)境下，傳代周期約 48 小時，倍增時間約 30 小時，顯著快于原代 T 細(xì)胞。其顯著特點是脫離 IL-2 后 24 小時即停止增殖，48 小時開始凋亡（凋亡率達(dá) 60%），這種嚴(yán)格的細(xì)胞因子依賴性使其成為檢測 IL-2 活性的金標(biāo)準(zhǔn)。增殖動力學(xué)研究顯示，IL-2 濃度在 1-100U/mL 范圍內(nèi)時，細(xì)胞增殖率與 IL-2 濃度呈正相關(guān)（相關(guān)系數(shù) r=0.92），100U/mL 時達(dá)到增殖平臺期，這種劑量依賴性為細(xì)胞因子活性測定提供了量化依據(jù)。軟瓊脂克隆形成實驗顯示，僅在含 IL-2 的培養(yǎng)基中可形成克?。ㄐ纬陕?25%），無 IL-2 時克隆形成率為 0，連續(xù)傳代 50 次后，CD3?CD8?表型及 IL-2 依賴性無明顯改變，凍存復(fù)蘇存活率超 90%。
功能研究證實其保留細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞的核心活性。靶細(xì)胞殺傷實驗顯示，經(jīng)抗原肽刺激后，CTLL-2 細(xì)胞可特異性識別并殺傷表達(dá)同源 MHC-Ⅰ 類分子的靶細(xì)胞（如 EL-4 細(xì)胞），殺傷率隨效靶比升高而增加，效靶比為 50:1 時殺傷率達(dá) 75%，這種細(xì)胞毒性依賴于穿孔素和顆粒酶 B 的釋放（刺激后分泌量分別增加 4 倍和 5 倍）。脫顆粒實驗顯示，CD107a（溶酶體相關(guān)膜蛋白 1）在刺激后表達(dá)上調(diào) 3 倍，證實其顆粒釋放功能正常。與原代 CTL 相比，其細(xì)胞毒性更穩(wěn)定，批次間差異小于 10%，適合標(biāo)準(zhǔn)化的免疫功能實驗。
信號傳導(dǎo)機制研究揭示其 IL-2 受體通路的核心作用。Western blot 分析顯示，IL-2 刺激后 15 分鐘，細(xì)胞內(nèi) STAT5 磷酸化水平升高 8 倍，PI3K/Akt 通路激活（p-Akt 增加 6 倍），MAPK/ERK 通路亦被激活（p-ERK 增加 4 倍），這三條通路共同調(diào)控細(xì)胞增殖與存活，STAT5 抑制劑處理可使 IL-2 誘導(dǎo)的增殖率下降 70%，顯著高于其他通路抑制劑，證實 STAT5 是核心調(diào)控分子。與其他 T 細(xì)胞系相比，其 IL-2 受體 β 鏈（CD122）表達(dá)量更高（是 Jurkat 細(xì)胞的 3 倍），這一特性使其對 IL-2 的敏感性顯著增強（半數(shù)有效濃度僅為 Jurkat 細(xì)胞的 1/5）。
在免疫研究應(yīng)用中，CTLL-2 細(xì)胞是多領(lǐng)域研究的關(guān)鍵工具。在細(xì)胞因子檢測方面，其 IL-2 依賴性增殖特性被用于生物活性測定，可量化檢測血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清中的 IL-2 濃度，靈敏度達(dá) 1U/mL，較 ELISA 法更能反映生物活性。在免疫調(diào)節(jié)劑篩選中，該細(xì)胞系可評估藥物對 T 細(xì)胞增殖的影響，某新型免疫增強劑可使 IL-2 誘導(dǎo)的增殖率提升 40%，而免疫抑制劑環(huán)bao素 A 在 100ng/mL 濃度時可wan全阻斷其增殖。在腫瘤免疫研究中，經(jīng)基因修飾表達(dá)嵌合抗原受體（CAR）的 CTLL-2 細(xì)胞，可特異性識別腫瘤抗原并增強殺傷活性（殺傷率提升至 90%），為 CAR-T 細(xì)胞療法研究提供簡化模型。
動物模型研究中，該細(xì)胞系可用于評估體內(nèi) T 細(xì)胞功能。將 1×10?個 CFSE 標(biāo)記的 CTLL-2 細(xì)胞靜脈注射免疫缺陷小鼠，在 IL-2 腹腔注射組中，細(xì)胞可在脾臟和淋巴結(jié)存活并增殖（7 天細(xì)胞數(shù)量增加 10 倍），而無 IL-2 組細(xì)胞在 3 天內(nèi)幾乎wan全清除，這種體內(nèi)增殖特性與體外結(jié)果一致。聯(lián)合腫瘤模型實驗顯示，CTLL-2 細(xì)胞可抑制同源腫瘤細(xì)胞（如 B16 黑色素瘤）的生長，使腫瘤體積縮小 50%，生存期延長 30%，證實其體內(nèi)抗腫瘤活性。
在自身免疫病研究中，CTLL-2 細(xì)胞被用于模擬異常活化的 T 細(xì)胞。實驗顯示，在高濃度 IL-2 環(huán)境下，細(xì)胞可突破免疫耐受，對自身組織來源的靶細(xì)胞產(chǎn)生殺傷活性（殺傷率 35%），這種異常活性可被糖皮質(zhì)激素抑制（1μM 地塞mi松使殺傷率下降 60%），為自身免疫病的藥物篩選提供模型。與其他 T 細(xì)胞系相比，其對免疫抑制藥物的反應(yīng)更接近原代 T 細(xì)胞，半數(shù)抑制濃度差異小于 2 倍。
代謝特征研究揭示其活化 T 細(xì)胞的代謝表型。 Seahorse 能量代謝分析顯示，IL-2 刺激后，細(xì)胞的糖酵解速率增加 3 倍，氧化磷酸化水平提升 2 倍，呈現(xiàn) “混合代謝” 特征，這種代謝重編程與其高表達(dá)葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白 GLUT1（IL-2 刺激后上調(diào) 3 倍）相關(guān)。谷an酰胺消耗速率亦增加 2 倍，谷an酰胺酶抑制劑處理可使 IL-2 誘導(dǎo)的增殖率下降 45%，證實谷an酰胺代謝在其增殖中的重要作用，為靶向 T 細(xì)胞代謝的免疫調(diào)節(jié)研究提供線索。
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