細胞周期阻滯特征：流式細胞術(shù)顯示，G?/M 期細胞比例達 30%（母系 15%，shRNA2 為 45%），S 期比例降至 20%（母系 30%，shRNA2 為 10%），呈現(xiàn)中度 G?/M 期阻滯；cyclinB1 表達量代償性提升 25%（低于 shRNA2 的 40%），p21 等蛋白無顯著變化，證實阻滯程度與 cyclinA 表達量正相關(guān)。

增殖相關(guān)功能變化：Ki-67 陽性率降至 45%（母系 80%，shRNA2 為 25%），DNA 合成速率下降 40%（3H-TdR 摻入法，介于母系與 shRNA2 之間）；上皮標(biāo)志物 CK18 陽性率保持 96% 以上，確保上皮功能完整性。

病毒受體保留情況：豬細小病毒受體整合素 αvβ3（陽性率 93%）、豬圓環(huán)病毒受體硫酸乙酰肝素（陽性率 91%）表達量與母系及 shRNA2 相當(dāng)，為病毒感染的平行對比研究提供一致背景。

cyclinA 功能梯度解析：通過與 shRNA2 對比，證實 cyclinA 表達量與 G?/M 期阻滯程度呈線性相關(guān)（R2=0.92），且當(dāng) cyclinA 下降 50% 時，CDC25C 磷酸化水平下降 30%（shRNA2 為 50%），紡錘體異常率達 20%（shRNA2 為 35%），揭示 cyclinA 的劑量依賴性功能。

周期轉(zhuǎn)換動力學(xué)研究：采用活細胞成像技術(shù)，發(fā)現(xiàn)該細胞系的 G?期時長較母系延長 6 小時（shRNA2 延長 12 小時），證實 cyclinA 表達量與細胞周期進程呈負(fù)相關(guān)，為解析周期調(diào)控的精細機制提供量化數(shù)據(jù)。

DNA 病毒敏感性差異：豬細小病毒在該細胞系中復(fù)制效率下降 35%（病毒滴度從母系的 10? TCID??/mL 降至 10?.? TCID??/mL，shRNA2 下降 60%），NS1 表達量下降 30%（shRNA2 為 50%），證實該病毒復(fù)制對 cyclinA 存在劑量依賴性需求，且存在 50% 的功能閾值。

病毒適應(yīng)機制對比：豬圓環(huán)病毒 2 型在該細胞系中復(fù)制效率下降 8%（shRNA2 下降 15%），其 Cap 蛋白與 cyclinB1 的結(jié)合能力較在 shRNA2 中弱 20%，揭示病毒代償機制的效率與 cyclinA 下調(diào)程度相關(guān)。

細胞周期藥物劑量篩選：建立基于梯度阻滯表型的篩選體系，發(fā)現(xiàn)某 cyclinA 抑制劑在 2μM 時可模擬該細胞系表型（G?/M 期 32%），5μM 時接近 shRNA2 表型，為藥物劑量優(yōu)化提供參考。

抗病du藥物的效能分級：利用該細胞系與 shRNA2 的梯度模型，發(fā)現(xiàn)某核苷類似物對豬細小病毒的抑制效果隨 cyclinA 下調(diào)程度增強而提升（EC??在母系中 1.2μM，該細胞系 0.8μM，shRNA2 中 0.4μM），證實藥物與細胞周期的協(xié)同作用。

培養(yǎng)基：同 shRNA2，采用含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基，避免 EGF 等促增殖因子；為維持梯度表型，需與母系、shRNA2 同步培養(yǎng)，確保實驗條件一致。

傳代流程：當(dāng)細胞融合度達 65% 時，按 1:3 比例接種（介于母系 1:3-1:5 與 shRNA2 1:2 之間），離心速度 1000rpm，24 小時貼壁率超 92%，避免融合度＞75%（凋亡率較 shRNA2 低 5%）。

凍存保護：同 shRNA2，細胞密度 3×10?個 /mL，復(fù)蘇存活率達 88%，需與 shRNA2 同時凍存以保證批次一致性。

細胞周期檢測：流式細胞術(shù)分析時，需同時設(shè)置母系與 shRNA2 對照，G?/M 期比例變異系數(shù)＜6%；PH3 陽性率達 25%（母系 10%，shRNA2 40%），適合量化分析。

病毒感染實驗：接種豬細小病毒（MOI=0.1）后 72 小時，病毒滴度檢測需采用三聯(lián)對照（母系、該細胞系、shRNA2），以明確 cyclinA 依賴程度。

優(yōu)勢：

局限性：