BY-0790 SC-1小鼠胚胎細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
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- 更新時間 2025/7/14 10:47:48
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SC-1小鼠胚胎細(xì)胞系
SC-1小鼠胚胎細(xì)胞系源自 BALB/c 小鼠 12.5 天胚齡的胚胎組織，是保留早期胚胎細(xì)胞多向分化潛能和穩(wěn)定增殖特性的經(jīng)典胚胎模型，在胚胎發(fā)育機(jī)制、細(xì)胞分化調(diào)控及轉(zhuǎn)基因研究中具有重要價值，為解析哺乳動物早期胚胎發(fā)生過程提供了理想的體外研究工具。
該細(xì)胞系呈現(xiàn)典型的胚胎成纖維樣細(xì)胞形態(tài)與干細(xì)胞特性。顯微鏡下，細(xì)胞呈長梭形或多邊形，以貼壁生長為主，排列呈漩渦狀或放射狀，細(xì)胞體積中等（長徑 25-35μm），核質(zhì)比適中，細(xì)胞核呈橢圓形，染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀，可見 1-2 個核仁，核分裂象每 10 個高倍視野 3-5 個，胞質(zhì)豐富，呈弱嗜堿性，可見細(xì)絲狀胞質(zhì)突起，電鏡下可見胞質(zhì)內(nèi)含有豐富的微絲和線粒體，符合胚胎間充質(zhì)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)特點。免疫表型分析顯示，細(xì)胞高表達(dá)胚胎干細(xì)胞標(biāo)志物 Oct4 和 Sox2（陽性率分別為 85% 和 82%），同時表達(dá)間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物 vimentin（陽性率 90%），但不表達(dá)分化細(xì)胞標(biāo)志物如 CK18（上皮）和 α-SMA（肌細(xì)胞），證實其未分化狀態(tài)和多向分化潛能。
體外培養(yǎng)體系中，SC-1 細(xì)胞展現(xiàn)出穩(wěn)定的增殖能力與可塑性。最適培養(yǎng)條件為含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，添加 10ng/mL LIF（白血病抑制因子），在 37℃、5% CO?環(huán)境下，傳代周期約 48 小時，倍增時間約 36 小時，顯著快于成體成纖維細(xì)胞。其顯著特點是體外可維持未分化狀態(tài)超過 50 代，細(xì)胞形態(tài)和增殖速率無明顯改變，這種穩(wěn)定性與其端粒酶活性較高相關(guān)（活性是成體成纖維細(xì)胞的 3 倍）?？寺⌒纬蓪嶒烇@示，單個細(xì)胞接種后 7 天形成的克隆中，80% 為緊密型未分化克隆，20% 為松散型開始分化的克隆，這種分化異質(zhì)性使其可同時研究未分化與分化狀態(tài)的細(xì)胞特性。凍存復(fù)蘇性能優(yōu)異，液氮凍存后復(fù)蘇存活率超 95%，復(fù)蘇后 24 小時即可恢復(fù)正常增殖。
在分化潛能研究中，SC-1 細(xì)胞展現(xiàn)出向三胚層分化的能力。誘導(dǎo)實驗顯示，在含 1μM 維甲酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 14 天，可分化為神經(jīng)樣細(xì)胞，表達(dá)神經(jīng)元標(biāo)志物 β-Ⅲ tubulin（陽性率 70%）和膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物 GFAP（陽性率 30%）；在含 10% 馬血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 21 天，可分化為肌樣細(xì)胞，形成多核肌管，表達(dá)肌動蛋白（陽性率 65%）；在含肝細(xì)胞生長因子（HGF）的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 28 天，可分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞，表達(dá)白蛋白（陽性率 55%），證實其向外胚層、中胚層和內(nèi)胚層的分化潛能。分化過程中，Oct4 表達(dá)量下降 80%，而各胚層特異性轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)上調(diào)，如神經(jīng)分化中 NeuroD1 上調(diào) 5 倍，肌分化中 MyoD 上調(diào) 6 倍。
分子機(jī)制研究揭示其du特的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)?；蛐酒治鲲@示，SC-1 細(xì)胞中與多能性維持相關(guān)的基因網(wǎng)絡(luò)高度活躍，包括 Oct4-Sox2-Nanog 核心通路，ChIP 實驗證實 Oct4 可直接結(jié)合 Sox2 和 Nanog 的啟動子區(qū)域，促進(jìn)其表達(dá)。與胚胎干細(xì)胞相比，SC-1 細(xì)胞中 Wnt 通路活性較低（β-catenin 核定位減少 40%），這可能是其更易向間充質(zhì)方向分化的原因，激活 Wnt 通路可使神經(jīng)分化效率提高 2 倍。此外，細(xì)胞中表觀遺傳修飾具有可塑性，H3K4me3（激活型修飾）在多能性基因啟動子區(qū)域富集，而 H3K27me3（抑制型修飾）在分化基因啟動子區(qū)域富集，這種修飾模式隨分化進(jìn)程動態(tài)變化。
在胚胎發(fā)育研究中，SC-1 細(xì)胞可模擬早期胚胎的細(xì)胞相互作用。與內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞共培養(yǎng)時，SC-1 細(xì)胞可分泌 FGF4，促進(jìn)內(nèi)細(xì)胞團(tuán)增殖（數(shù)量增加 1.5 倍），而內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分泌的 BMP4 可誘導(dǎo) SC-1 細(xì)胞向中胚層分化，形成類似胚胎中胚層的細(xì)胞群。體外三維培養(yǎng)實驗顯示，SC-1 細(xì)胞在 Matrigel 中可形成類胚體結(jié)構(gòu)，中心為 Oct4 陽性細(xì)胞，外圍為 vimentin 陽性細(xì)胞，模擬早期胚胎的細(xì)胞分層現(xiàn)象，類胚體直徑在培養(yǎng) 7 天時可達(dá) 150μm，表達(dá)早期胚胎發(fā)育相關(guān)基因如 Brachyury（中胚層標(biāo)志）和 Gata6（內(nèi)胚層標(biāo)志）。
在應(yīng)用研究中，SC-1 細(xì)胞是轉(zhuǎn)基因和基因編輯的理想載體。因其增殖穩(wěn)定且轉(zhuǎn)染效率高（脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率達(dá) 40%），常被用于制備轉(zhuǎn)基因細(xì)胞模型，如穩(wěn)定表達(dá) GFP 的 SC-1 細(xì)胞可用于追蹤細(xì)胞分化過程，熒光強(qiáng)度在分化前后無明顯變化。CRISPR/Cas9 基因編輯實驗顯示，其靶向敲除效率達(dá) 35%，敲除 Oct4 基因后，細(xì)胞失去克隆形成能力，分化標(biāo)志物提前表達(dá)，證實該基因在維持其特性中的核心作用。此外，SC-1 細(xì)胞可作為飼養(yǎng)層細(xì)胞支持胚胎干細(xì)胞的生長，其分泌的 LIF 和膠原蛋白可使胚胎干細(xì)胞維持未分化狀態(tài)超過 20 代。
在毒理學(xué)研究中，SC-1 細(xì)胞展現(xiàn)出對致畸物的敏感性。測試顯示，環(huán)lin酰胺（致畸劑）在 0.5μM 濃度時即可顯著抑制其增殖（抑制率 40%），并誘導(dǎo)分化異常（神經(jīng)分化比例下降 50%），而相同濃度對成體成纖維細(xì)胞影響較小（抑制率 15%）。這種敏感性使其可用于胚胎毒性篩選，某新型化合物通過 SC-1 細(xì)胞測試顯示，在 1μM 濃度時即出現(xiàn)類似致畸劑的效應(yīng)，提示其潛在胚胎毒性。
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