BY-0568 PC 61 5.3 小鼠雜交瘤細(xì)胞系CD25
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
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- 型號 BY-0568
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- 更新時間 2025/7/8 14:16:15
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PC 61 5.3 小鼠雜交瘤細(xì)胞系CD25
PC 61 5.3 小鼠雜交瘤細(xì)胞系CD25是由 BALB/c 小鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合而成，因能穩(wěn)定分泌抗 CD25 單克隆抗體而成為免疫學(xué)界的重要工具。CD25 即白細(xì)胞介素 - 2 受體 α 鏈，在活化 T 細(xì)胞表面高表達(dá)，是免疫調(diào)節(jié)的關(guān)鍵分子，這使得該細(xì)胞系在免疫機(jī)制研究、疾病模型構(gòu)建及藥物開發(fā)中占據(jù)du特地位。
在顯微鏡下，PC 61 5.3 細(xì)胞呈懸浮生長，形態(tài)以圓形或類圓形為主，細(xì)胞直徑約 12-18 微米，宛如散落在培養(yǎng)基中的 “免疫探針”。胞質(zhì)豐富，內(nèi)含大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體 —— 這是抗體合成與分泌的核心細(xì)胞器，通過電鏡可觀察到胞質(zhì)內(nèi)密集的抗體分泌顆粒。細(xì)胞增殖速度中等，倍增時間約 36-48 小時，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到 1×10?-2×10?個 / 毫升時需進(jìn)行傳代，傳代時按 1:3-1:5 的比例接種至新培養(yǎng)基，連續(xù)傳代 60 次以上仍能保持穩(wěn)定的抗體分泌能力。
培養(yǎng)該細(xì)胞系需模擬雜交瘤細(xì)胞的生長需求?；A(chǔ)培養(yǎng)基選用 RPMI 1640，其含有的氨基酸和維生素可滿足細(xì)胞高速代謝需求；添加 10% 熱滅活胎牛血清（FBS）提供生長因子，其中血清中的 IL-6 等細(xì)胞因子對維持細(xì)胞的抗體分泌功能至關(guān)重要。培養(yǎng)環(huán)境需嚴(yán)格控制在 37℃、5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱中，pH 值穩(wěn)定在 7.2-7.4，通過培養(yǎng)基中的酚紅指示劑可直觀監(jiān)測酸堿變化。特別注意，該細(xì)胞對滲透壓敏感，換液時需保證新舊培養(yǎng)基溫度一致，避免因環(huán)境波動導(dǎo)致抗體分泌量下降。
PC 61 5.3 細(xì)胞分泌的抗 CD25 單克隆抗體具有高度特異性，可精準(zhǔn)識別小鼠 CD25 分子的胞外結(jié)構(gòu)域，解離常數(shù)（Kd）約為 10??M，屬于高親和力抗體。該抗體為 IgG1 亞型，能通過 Fc 段與免疫細(xì)胞表面的 Fc 受體結(jié)合，在流式細(xì)胞術(shù)檢測中，可清晰區(qū)分活化 T 細(xì)胞（CD25?）與靜息 T 細(xì)胞（CD25?），熒光強(qiáng)度比背景信號高 10-20 倍，是分選和鑒定活化 T 細(xì)胞的 “金標(biāo)準(zhǔn)” 試劑。
在免疫調(diào)節(jié)機(jī)制研究中，該細(xì)胞系分泌的抗體是解析 CD25 功能的關(guān)鍵工具。CD25 與 IL-2 結(jié)合后可激活下游信號通路（如 JAK-STAT5），促進(jìn) T 細(xì)胞增殖與分化。用 PC 61 5.3 抗體阻斷 CD25 后，可顯著抑制活化 T 細(xì)胞的增殖，同時減少 IL-2、IFN-γ 等細(xì)胞因子的分泌，這一特性被廣泛用于研究 T 細(xì)胞耐受與自身免疫的平衡機(jī)制。例如，在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）模型中，注射該抗體可降低 T 細(xì)胞浸潤中樞神經(jīng)系統(tǒng)的數(shù)量，緩解炎癥癥狀，為多發(fā)性硬化癥的免疫干預(yù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
在腫瘤免疫研究中，PC 61 5.3 抗體可用于調(diào)控調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞（Treg）功能。Treg 細(xì)胞高表達(dá) CD25，通過分泌 IL-10 等抑制性細(xì)胞因子抑制抗腫瘤免疫。用該抗體清除 Treg 細(xì)胞后，荷瘤小鼠的腫瘤生長速度顯著減慢，效應(yīng) T 細(xì)胞的浸潤和細(xì)胞毒性增強(qiáng) 3-5 倍，這一發(fā)現(xiàn)為腫瘤免yi治療中的 “去抑制” 策略提供了直接證據(jù)。目前，基于抗 CD25 抗體的聯(lián)合療法（如與 PD-1 抑制劑聯(lián)用）已在動物實(shí)驗(yàn)中顯示出協(xié)同抗腫瘤效果，為臨床轉(zhuǎn)化奠定基礎(chǔ)。
在抗體藥物開發(fā)領(lǐng)域，該細(xì)胞系是抗 CD25 抗體人源化的原始模板。通過克隆其抗體可變區(qū)基因，與人類 IgG 恒定區(qū)融合，可構(gòu)建人 - 鼠嵌合抗體，降低臨床應(yīng)用中的免疫原性。例如，抗 CD25 單抗達(dá)克珠單抗的研發(fā)就源于類似雜交瘤細(xì)胞系的抗體序列，該藥物通過阻斷 IL-2 信號抑制 T 細(xì)胞活化，已用于器官yi植后的抗排斥治療。
培養(yǎng)過程中，PC 61 5.3 細(xì)胞對營養(yǎng)條件較為苛刻。除基礎(chǔ)培養(yǎng)基和血清外，需添加 1% 谷an酰胺以維持抗體合成相關(guān)酶的活性，同時避免培養(yǎng)基中內(nèi)毒素含量過高（需 < 0.1EU/ml），否則會導(dǎo)致細(xì)胞分泌抗體的親和力下降。細(xì)胞凍存時需使用含 10% DMSO 的血清凍存液，梯度降溫至 - 80℃后轉(zhuǎn)入液氮保存，復(fù)蘇存活率可達(dá) 80% 以上，確保細(xì)胞系的長期穩(wěn)定供應(yīng)。
前沿研究中，該細(xì)胞系的應(yīng)用持續(xù)拓展。在單細(xì)胞測序輔助下，通過解析其抗體可變區(qū)的基因突變模式，可揭示抗體親和力成熟的分子機(jī)制，為篩選更高親和力的抗 CD25 抗體提供新策略；在基因編輯技術(shù)中，利用 CRISPR-Cas9 改造該細(xì)胞系，使其分泌的抗體攜帶熒光標(biāo)簽，可實(shí)時追蹤抗體與 CD25 的結(jié)合動態(tài)，為研究免疫突觸的形成提供可視化工具。
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