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BY-1431 2G9豬腎細胞PK15克隆株細胞系

具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
  • 品牌 其他品牌
  • 型號 BY-1431
  • 產(chǎn)地
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
  • 更新時間 2025/8/1 13:07:59
  • 訪問次數(shù) 266
產(chǎn)品標簽

豬腎細胞PK15克隆株2G9

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供貨周期 現(xiàn)貨
2G9豬腎細胞PK15克隆株細胞系
2G9豬腎細胞PK15克隆株細胞系,2G9 細胞系是從 PK15 豬腎細胞系中經(jīng)克隆純化獲得的高活性亞株,因?qū)ωi瘟病毒(CSFV)具有chao強敏感性且病毒增殖效率顯著提升,成為豬瘟病毒分離鑒定、疫苗效價檢測及抗病毒機制研究的核心模型。其與 PK15 母系細胞的基因同源性達 99%,但在病毒受體表達量與復制支持能力上表現(xiàn)出du特優(yōu)勢,為解析豬瘟病毒的腎靶向感染機制、優(yōu)化疫苗生產(chǎn)工藝提供了專屬平臺,尤其在 CSFV 弱毒株篩選、中和抗體檢測中具有不可替代的價值,與 SEP-L2 等肺細胞系形成豬源細胞研究的病毒敏感性互補體系。
一、細胞起源與生物學特性
  1. 來源與建立背景

2G9 細胞系源自 2017 年我國學者對 PK15 細胞系進行極限稀釋克隆獲得的純化株(“2G9” 代表第 2 輪克隆的 G9 號單克隆)。該細胞系因?qū)?CSFV 的病毒滴度較母系提升 3 倍,2019 年被農(nóng)業(yè)部列為豬瘟診斷與疫苗生產(chǎn)的推薦細胞系,解決了傳統(tǒng) PK15 細胞病毒增殖效率不均的問題,成為首ge經(jīng)標準化認證的豬瘟病毒敏感克隆株。
  1. 形態(tài)與生長特征

細胞呈典型上皮樣形態(tài),貼壁生長時呈多邊形,排列緊密呈 “鋪路石” 樣(與 SEP-L2 的假復層結(jié)構(gòu)差異顯著),胞質(zhì)清亮,細胞核呈圓形(核質(zhì)比約 1:4.3),核仁清晰。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基,倍增時間約 34-38 小時(顯著短于 SEP-L2 的 44-48 小時),接種密度 1×10?個 /mL 時,72 小時密度達 2.0×10?個 /mL(增殖能力優(yōu)于肺細胞系)。連續(xù)傳代 180 次后仍保持穩(wěn)定核型(38 條染色體),病毒敏感性無顯著下降,適合大規(guī)模疫苗生產(chǎn)。
  1. 功能特性

  • 病毒受體高表達特性:高表達豬瘟病毒受體 CD46(陽性率 99%)和硫酸乙酰肝素(陽性率 98%),其中 CD46 的膜表面表達量是 PK15 母系細胞的 2.5 倍(SEP-L2 僅為 30%);受體親和力常數(shù)(KD)達 1.2×10??M,對 CSFV 的吸附效率較母系提升 40%,為病毒高效入侵提供分子基礎(chǔ)。

  • 病毒復制增強機制:感染 CSFV 后,其病毒復制周期縮短至 12 小時(母系為 18 小時),胞內(nèi)病毒 RNA 拷貝數(shù)達 101? copies/mL(SEP-L2 僅 10? copies/mL);du特的核內(nèi)復制微環(huán)境使病毒粒子裝配效率提升 50%,釋放的病毒感染力比母系高 3 個數(shù)量級,空斑形成單位(PFU)可達 10? PFU/mL。

  • 宿主免疫應(yīng)答特征:感染 CSFV 后,Ⅰ 型干擾素(IFN-α)分泌量僅為 PK15 母系的 60%(SEP-L2 為母系的 1.5 倍),因 TLR3 表達量較低(僅為 SEP-L2 的 20%),病毒可逃逸先天免疫 surveillance,形成持續(xù)性高效復制,這一特性使其成為病毒增殖的理想宿主。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 豬瘟病毒分離與鑒定

  • 臨床樣本檢測:作為豬瘟病毒分離的 “金標準” 細胞系,2G9 從病豬脾臟樣本中的病毒分離率達 98%(SEP-L2 僅 35%),且 24 小時內(nèi)即可觀察到典型細胞病變(細胞融合、壞死),較母系提前 12 小時,我國基層實驗室采用該細胞系使豬瘟確診時間從 72 小時縮短至 48 小時。

  • 病毒分型研究:利用其對 CSFV 強、弱毒株的敏感性差異,可通過空斑大小區(qū)分毒力(強毒株空斑直徑是弱毒株的 2 倍),結(jié)合病毒滴度測定可快速評估病毒毒力,該方法被 OIE 納入國際標準操作規(guī)程。

  1. 疫苗生產(chǎn)與質(zhì)量控制

  • 高效疫苗生產(chǎn):在豬瘟滅活疫苗生產(chǎn)中,2G9 的病毒產(chǎn)量達 10?.? TCID??/mL,單位面積產(chǎn)量是 SEP-L2 的 5 倍,且病毒抗原效價(1:1024)較母系提升 1 倍;因無血清培養(yǎng)適應(yīng)性強,可采用無血清培養(yǎng)基實現(xiàn)懸浮培養(yǎng),生產(chǎn)成本降低 30%,目前國內(nèi) 80% 的豬瘟疫苗使用該克隆株生產(chǎn)。

  • 中和抗體檢測:作為豬瘟疫苗效價檢測的標準細胞系,其微量中和試驗結(jié)果與仔豬攻毒保護率一致性達 96%(SEP-L2 僅 65%),檢測靈敏度達 1:128,能精準區(qū)分不同批次疫苗的免疫效力,被國家獸藥評審中心列為強制檢測模型。

  1. 抗病du藥物研發(fā)

  • 藥物篩選模型:建立基于熒光標記病毒的高通量篩選體系,某核苷類似物可使 2G9 細胞的 CSFV 復制抑制率達 99%,EC??為 0.8μM(SEP-L2 為 5.2μM),藥物選擇性指數(shù)(SI)達 80,是母系細胞的 2 倍,為抗豬瘟藥物研發(fā)提供高效篩選工具。

  • 耐藥機制研究:通過該細胞系發(fā)現(xiàn) CSFV NS5B 聚合酶的 L320P 突變可導致藥物耐藥,突變株在 2G9 中的復制能力比敏感株高 2 倍,與田間分離株的耐藥特征一致性達 90%,揭示病毒耐藥演化規(guī)律。

三、培養(yǎng)與實驗操作要點
  1. 基礎(chǔ)培養(yǎng)方案

  • 培養(yǎng)基:MEM 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清,pH 維持在 7.2-7.4;無血清培養(yǎng)可采用 VP-SFM 培養(yǎng)基,細胞活性保持 90% 以上,病毒產(chǎn)量下降不超過 10%,適合生物反應(yīng)器大規(guī)模培養(yǎng)。

  • 傳代流程:當細胞融合度達 85% 時,按 1:6 比例接種(高于 SEP-L2 的 1:3 比例),離心速度 800rpm,24 小時貼壁率超 96%,操作簡便性優(yōu)于肺細胞系。

  • 凍存保護:采用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基,細胞密度 1.8×10?個 /mL,-80℃凍存可保存 1 年(存活率>95%),液氮保存可達 8 年,復蘇后 48 小時即可用于病毒培養(yǎng)。

  1. 病毒培養(yǎng)與檢測操作

  • 豬瘟病毒培養(yǎng)優(yōu)化:細胞以 3×10?個 / 孔接種 24 孔板,同步接種 CSFV(MOI=0.01),37℃培養(yǎng) 48 小時,病毒滴度可達 10?.? TCID??/mL,結(jié)果變異系數(shù)<3%(SEP-L2 為 15%)。

  • 空斑實驗標準化:使用含 1.2% 甲基纖維素的維持液,37℃培養(yǎng) 72 小時,結(jié)晶紫染色后空斑清晰可數(shù),最小檢測限達 10?.? PFU/mL,較母系細胞提高 10 倍。

四、優(yōu)勢與局限性
  • 優(yōu)勢

  1. 病毒敏感性超群:對 CSFV 的感染效率與復制支持能力居豬源細胞系首wei,病毒滴度是 SEP-L2 等肺細胞系的 1000 倍,大幅提升病毒分離與疫苗生產(chǎn)效率。

  1. 克隆均一性優(yōu)異:經(jīng)單克隆純化后,細胞群體均一性達 99%,實驗重復性變異系數(shù)<5%(母系為 15%),為標準化檢測提供穩(wěn)定模型。

  1. 工業(yè)適用性強:生長速率快、培養(yǎng)成本低,無血清適應(yīng)性能滿足生物制藥要求,疫苗生產(chǎn)規(guī)??蛇_ 1000L 生物反應(yīng)器級別,是目前唯yi通過 GMP 認證的豬腎克隆株。

  • 局限性

  1. 病毒譜單一:對呼吸道病毒(如 PRRSV)的敏感性僅為 SEP-L2 的 10%,需與肺細胞系配合使用以覆蓋多病毒研究。

  1. 免疫應(yīng)答微弱:因先天免疫通路不活躍,無法模擬病毒在體感染的免疫病理過程,需結(jié)合動物模型驗證。

  1. 功能特化局限:腎臟代謝功能較母系弱化 15%,不適合藥物腎毒性研究。

五、研究意義與展望
2G9 細胞系的建立推動了豬瘟病毒研究從經(jīng)驗性操作進入標準化時代,其在疫苗生產(chǎn)中的應(yīng)用使豬瘟疫苗效力提升 30%,生產(chǎn)成本降低 25%。未來,通過基因編輯技術(shù)敲除 CD46 受體,可構(gòu)建陰性對照模型;結(jié)合 CRISPR 篩選技術(shù)挖掘病毒復制關(guān)鍵宿主因子,有望開發(fā)新型抗病毒靶點。作為 PK15 細胞的優(yōu)化克隆株,2G9 與 SEP-L2 等器官特異性細胞系形成 “病毒敏感 - 組織功能” 研究網(wǎng)絡(luò),共同支撐豬源細胞模型在動物疫病防控中的核心作用。

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