BY-0099 NCI-H446人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
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- 型號 BY-0099
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- 更新時間 2025/7/17 12:07:15
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NCI-H446人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系
NCI-H446人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系是研究小細(xì)胞肺癌（SCLC）的經(jīng)典模型，因具備典型的神經(jīng)內(nèi)分泌表型、高侵襲轉(zhuǎn)移性及對治療的敏感性特征，在 SCLC 發(fā)病機(jī)制、放療響應(yīng)及靶向藥物研發(fā)中應(yīng)用廣泛，為解析 SCLC 的 “快速增殖 - 早期轉(zhuǎn)移” 惡性特征提供了可靠實(shí)驗(yàn)工具。
來源與背景：該細(xì)胞系于 1982 年從一名小細(xì)胞肺癌患者的胸腔積液中分離建立，屬于廣泛期 SCLC 模型。與其他 SCLC 細(xì)胞系（如 NCI-H1688）相比，其更貼近臨床 SCLC 的神經(jīng)內(nèi)分泌分化特征及治療敏感性，尤其適合研究 SCLC 的耐藥機(jī)制，為探索 “神經(jīng)內(nèi)分泌分化 - 治療響應(yīng)關(guān)聯(lián)” 提供了理想樣本，填bu了 SCLC 轉(zhuǎn)移模型的部分空白。其明確的轉(zhuǎn)移灶來源和長期傳代穩(wěn)定性，使其成為 SCLC 基礎(chǔ)研究與臨床轉(zhuǎn)化的重要橋梁，是國際上使用zui廣泛的 SCLC 研究模型之一。
細(xì)胞特性：形態(tài)上呈圓形或短梭形，以懸浮生長為主，部分細(xì)胞聚集成團(tuán)，細(xì)胞質(zhì)少而致密，可見神經(jīng)內(nèi)分泌顆粒，細(xì)胞核呈圓形或卵圓形，核質(zhì)比高達(dá) 1:0.8，具有小細(xì)胞肺癌的典型形態(tài)特征。核心特性體現(xiàn)為強(qiáng)神經(jīng)內(nèi)分泌特征，高表達(dá)突觸素（Syn）、嗜鉻粒蛋白 A（CgA）及神經(jīng)細(xì)胞黏附分子（NCAM），經(jīng) forskolin 處理后，這些標(biāo)志物表達(dá)上調(diào) 2-3 倍，可分泌降鈣素、胃泌素釋放肽等神經(jīng)肽，模擬臨床 SCLC 的異位激素分泌現(xiàn)象；高侵襲轉(zhuǎn)移能力，體外 Transwell 實(shí)驗(yàn)中穿透基質(zhì)膜的細(xì)胞數(shù)是肺腺癌 A549 細(xì)胞的 4-6 倍，裸鼠尾靜脈注射后 3 周即可在腦、肝形成轉(zhuǎn)移灶，轉(zhuǎn)移率達(dá) 70%，是研究 SCLC 早期轉(zhuǎn)移的理想模型；增殖與治療響應(yīng)，倍增時間約 24-30 小時，克隆形成率約 65%，對相關(guān)治療藥物初始敏感性高，但易形成獲得性耐藥，耐藥株形成時間比非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系短 30%-40%。傳代時無需消化處理，直接吹打懸浮細(xì)胞團(tuán)即可，傳代比例 1:3-1:5，連續(xù)傳代 50 次后仍保持神經(jīng)內(nèi)分泌特征，但增殖速率可能略有下降。
培養(yǎng)條件：適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，添加 1% 抗菌混合液以維持細(xì)胞活性。培養(yǎng)環(huán)境需控制在 37℃、5% CO?飽和濕度，每 1-2 天更換一次培養(yǎng)基，細(xì)胞密度維持在 1×10?-8×10?個 /ml 之間，密度過高會導(dǎo)致細(xì)胞團(tuán)過大并出現(xiàn)中心壞死。與貼壁細(xì)胞系不同，其對血清質(zhì)量敏感，低質(zhì)量血清會導(dǎo)致細(xì)胞聚團(tuán)能力下降及神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)志物表達(dá)降低，傳代時通過離心（1000rpm，5 分鐘）收集細(xì)胞，用新鮮培養(yǎng)基重懸后接種，凍存液推薦含 10% DMSO 的胎牛血清，復(fù)蘇后存活率可達(dá) 85% 以上，復(fù)蘇后 12 小時即可恢復(fù)正常增殖。
檢測鑒定：經(jīng)微生物篩查，無支原體、細(xì)菌、真菌及常見病毒污染，符合實(shí)驗(yàn)細(xì)胞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。免疫熒光檢測顯示，Syn、CgA 陽性率均超過 90%，NCAM 陽性率約 85%，符合神經(jīng)內(nèi)分泌表型。染色體核型分析呈現(xiàn)近三倍體核型，存在 3 號染色體短臂缺失、5 號染色體長臂擴(kuò)增等異常，與 60% 的 SCLC 患者遺傳學(xué)改變吻合，其中 3p 缺失涉及 FHIT 等抑癌基因丟失。功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)放療處理（2Gy）后，細(xì)胞凋亡率達(dá) 35%，γ-H2AX 表達(dá)上調(diào)，證實(shí)其對放療的典型響應(yīng)特征。
應(yīng)用領(lǐng)域：在發(fā)病機(jī)制研究中，該細(xì)胞系被用于揭示 SCLC 的神經(jīng)內(nèi)分泌分化機(jī)制，研究發(fā)現(xiàn) ASCL1 轉(zhuǎn)錄因子是其神經(jīng)內(nèi)分泌表型的關(guān)鍵調(diào)控因子，沉默 ASCL1 可使 Syn、CgA 表達(dá)下降 50% 以上，同時抑制細(xì)胞增殖，為理解 SCLC 的分化起源提供了關(guān)鍵線索。在耐藥機(jī)制研究方面，通過建立耐藥亞株發(fā)現(xiàn)，DNA 修復(fù)基因（如 ERCC1）過表達(dá)及凋亡抑制蛋白（如 survivin）高表達(dá)是其獲得性耐藥的重要原因，靶向這些分子可部分逆轉(zhuǎn)耐藥。在藥物篩選領(lǐng)域，其治療敏感性特征使其成為評估 SCLC 新藥的理想模型，近期研究發(fā)現(xiàn) PARP 抑制劑與相關(guān)治療聯(lián)用可顯著延長其存活時間，協(xié)同指數(shù)達(dá) 0.7。此外，該細(xì)胞系可用于研究 SCLC 的腦轉(zhuǎn)移機(jī)制，其高表達(dá) CXCR4，與腦微環(huán)境中的 CXCL12 結(jié)合促進(jìn)腦轉(zhuǎn)移，阻斷 CXCR4 可使腦轉(zhuǎn)移灶減少 55%，為預(yù)防 SCLC 腦轉(zhuǎn)移提供潛在靶點(diǎn)。
與其他 SCLC 細(xì)胞系對比顯示，NCI-H446 在神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)志物表達(dá)強(qiáng)度及轉(zhuǎn)移效率上具有顯著優(yōu)勢，尤其適合研究神經(jīng)內(nèi)分泌特征驅(qū)動的惡性行為。其對治療的敏感性變化與臨床 SCLC 的 “初始敏感 - 快速耐藥” 病程高度吻合，使其在轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中具有不可替代的價(jià)值，為 SCLC 的精準(zhǔn)治療提供了從實(shí)驗(yàn)室到臨床的橋梁。
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