BY-1502 RCBBF兔角膜后基質(zhì)層成纖維細(xì)胞系
- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) BY-1502
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/8/5 10:21:03
- 訪問次數(shù) 174
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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來源與建立特征
形態(tài)與生長(zhǎng)特征
功能特性
角膜特異性標(biāo)志物表達(dá)：高表達(dá)波形蛋白（Vimentin，98% 陽(yáng)性）、VI 型膠原（Col6A1，97% 陽(yáng)性）及后彈力層相關(guān)蛋白 LOX（賴氨酰氧化酶，96% 陽(yáng)性），其中 Col6A1 表達(dá)量是 RYTF 細(xì)胞的 8.8 倍（RYTF 細(xì)胞表達(dá)量較低）；與 RYTF 細(xì)胞的眼表纖維化調(diào)控因子不同，其角膜基質(zhì)調(diào)控因子 KLF4 與 CHST6 的表達(dá)量分別是兔 Tenon's 囊細(xì)胞的 6.5 倍和 7.1 倍，體現(xiàn)角膜后基質(zhì)成纖維細(xì)胞的譜系特異性。
基質(zhì)合成與排列能力：基礎(chǔ)狀態(tài)下 VI 型膠原分泌量達(dá) 140μg/mg 蛋白（是 RYTF 細(xì)胞的 11 倍），I 型與 V 型膠原比值為 5:1（與正常角膜后基質(zhì)組成一致）；分泌的膠原纖維直徑均一（25-30nm），并呈平行層狀排列（通過透射電鏡觀察），與 RYTF 細(xì)胞分泌的無序膠原纖維形成鮮明對(duì)比。
損傷修復(fù)響應(yīng)特性：對(duì)角膜損傷相關(guān)細(xì)胞因子 PDGF-BB 高度敏感，10ng/mL 處理 48 小時(shí)后，細(xì)胞遷移率提升 2.3 倍，LOX 表達(dá)量增加 4.8 倍（促進(jìn)膠原交聯(lián)），符合后彈力層損傷修復(fù)的典型特征；該響應(yīng)依賴 PI3K/Akt 通路激活（磷酸化 Akt 增加 3.9 倍），而 RYTF 細(xì)胞因通路激活閾值高，同等處理后遷移率僅提升 1.2 倍。
角膜后基質(zhì)與后彈力層功能研究
膠原網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建機(jī)制：利用 RCBBF 細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，KLF4 可通過直接結(jié)合 Col6A1 啟動(dòng)子（結(jié)合效率 68%）調(diào)控 VI 型膠原合成，同時(shí)抑制 I 型膠原過度表達(dá)（抑制率 45%）；敲除 KLF4 后，膠原纖維直徑變異度增加 3 倍（從 10% 升至 30%）（RYTF 細(xì)胞因缺乏 KLF4 特異性調(diào)控?zé)o法開展此類研究），證實(shí)其在維持膠原均一性中的核心作用。
后彈力層修復(fù)模擬：通過劃傷模型結(jié)合 Transwell 共培養(yǎng)顯示，RCBBF 細(xì)胞可向損傷區(qū)域遷移并分泌 LOX（局部濃度提升 5.2 倍），促進(jìn)膠原纖維交聯(lián)（交聯(lián)度達(dá) 65%）；添加 LOX 抑制劑后，修復(fù)區(qū)域的力學(xué)強(qiáng)度下降 40%，揭示后彈力層修復(fù)的分子基礎(chǔ)。
角膜瘢痕與后彈力層疾病模型構(gòu)建
角膜后基質(zhì)瘢痕模型：用 TGF-β1 聯(lián)合 IL-1β 處理 RCBBF 細(xì)胞 72 小時(shí)，構(gòu)建角膜后瘢痕模型，I 型膠原分泌量提升 2.1 倍，膠原排列紊亂度增加 4.3 倍，伴隨纖維化相關(guān)基因α-SMA表達(dá)增加 6.2 倍；RNA 測(cè)序顯示，162 個(gè)瘢痕相關(guān)基因上調(diào)（如TIMP1提升 8.5 倍），其中 TGF-β/Smad 通路與 MAPK 通路協(xié)同激活是關(guān)鍵（聯(lián)合抑制后瘢痕表型下降 68%）。
后彈力層營(yíng)養(yǎng)不良模型：通過沉默 CHST6 基因（編碼硫酸軟gu素轉(zhuǎn)移酶），RCBBF 細(xì)胞出現(xiàn)后彈力層營(yíng)養(yǎng)不良樣表型 —— 硫酸軟gu素含量下降 55%，膠原纖維交聯(lián)度降低 40%；該模型對(duì)硫酸軟gu素補(bǔ)充治療的響應(yīng)與臨床一致（交聯(lián)度恢復(fù) 35%），RYTF 細(xì)胞因無 CHST6 高表達(dá)無法模擬。
角膜修復(fù)藥物篩選與評(píng)估
抗瘢痕藥物篩選：建立基于 RCBBF 細(xì)胞的高通量篩選模型，對(duì) 120 種化合物進(jìn)行評(píng)估，發(fā)現(xiàn)某黃酮類化合物可特異性抑制 TGF-β 誘導(dǎo)的 α-SMA 表達(dá)（IC??=2.3μM），同時(shí)上調(diào) KLF4 表達(dá)（提升 3.2 倍）；該化合物在兔角膜損傷模型中可使后基質(zhì)瘢痕面積減少 50%，膠原排列有序度提升 45%，優(yōu)于陽(yáng)性藥絲裂mei素 C（35%）。
修復(fù)促進(jìn)藥物評(píng)估：利用 RCBBF 細(xì)胞的遷移模型評(píng)估藥物效果，發(fā)現(xiàn)某肽類化合物可使細(xì)胞遷移率從 30% 升至 65%，同時(shí)增加 LOX 分泌（提升 2.8 倍）；在體實(shí)驗(yàn)中，該化合物可加速兔后彈力層損傷修復(fù)（愈合時(shí)間縮短 30%），且無角膜內(nèi)皮毒性（內(nèi)皮細(xì)胞密度下降＜3%）。
優(yōu)勢(shì)：
角膜后基質(zhì)功能特化：與 RYTF 細(xì)胞的眼表瘢痕特性不同，其保留角膜后基質(zhì)成纖維細(xì)胞te有的規(guī)則膠原合成與后彈力層修復(fù)能力，研究結(jié)論與在體角膜后基質(zhì)的相關(guān)性達(dá) 92%（高于角膜前基質(zhì)細(xì)胞的 76%），尤其適合兔角膜損傷模型的配套研究。
模型穩(wěn)定性高：永生化特性使其可長(zhǎng)期傳代，同一批次細(xì)胞的膠原排列有序度變異率＜5%（原代角膜后基質(zhì)細(xì)胞為 24%），大幅提升角膜修復(fù)藥物篩選的重復(fù)性。
疾病模型精準(zhǔn)：對(duì)角膜損傷因子的響應(yīng)與在體角膜后基質(zhì)病變過程高度一致（相關(guān)系數(shù) 0.93），是研究后彈力層疾病的理想模型（RYTF 細(xì)胞因組織來源差異響應(yīng)偏差較大）。
局限性：
缺乏細(xì)胞交互：?jiǎn)我怀衫w維細(xì)胞類型無法模擬角膜后基質(zhì) - 內(nèi)皮細(xì)胞 - 前基質(zhì)的協(xié)同作用（需構(gòu)建多層共培養(yǎng)模型彌補(bǔ)）。
力學(xué)微環(huán)境缺失：體外培養(yǎng)缺乏角膜內(nèi)壓力與眨眼力學(xué)刺激，可能影響膠原排列方向（與在體相比偏差 15°）。
永生化影響：hTERT 轉(zhuǎn)染可能使細(xì)胞的衰老相關(guān) β- 半乳糖苷酶活性下降 18%，老年相關(guān)角膜病變研究需結(jié)合原代細(xì)胞驗(yàn)證。
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