BY-0694 CRFK貓腎細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) BY-0694
- 產(chǎn)地
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- 更新時(shí)間 2025/8/5 13:05:16
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細(xì)胞株和菌株、胎牛血清、標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
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CRFK貓腎細(xì)胞系
在貓?jiān)茨I臟細(xì)胞模型家族中，CRFK貓腎細(xì)胞系以其對(duì)冠狀病毒的高度敏感性，成為貓科動(dòng)物病毒研究領(lǐng)域的特色工具。與 F81 細(xì)胞系的廣譜貓病毒適應(yīng)性不同，該細(xì)胞系在貓冠狀病毒（FCoV）研究中展現(xiàn)出不可替代的優(yōu)勢(shì)，為解析冠狀病毒致病機(jī)制與疫苗開發(fā)提供了精準(zhǔn)模型。
細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
CRFK 細(xì)胞系建立于 1964 年，源自新生小貓的腎臟組織，通過(guò)yi酶消化法獲得原代細(xì)胞后，經(jīng)自然篩選形成永生化細(xì)胞系（未引入外源性永生化基因）。這一特性使其保留了原代貓腎近曲小管上皮細(xì)胞的特征，同時(shí)具備穩(wěn)定傳代能力（連續(xù)傳代超過(guò) 300 次仍保持典型表型），解決了原代貓腎細(xì)胞傳代受限（僅 6-10 代）的難題，成為貓冠狀病毒研究的標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞工具。
細(xì)胞形態(tài)呈典型的上皮樣，以多邊形為主，排列呈致密的單層結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核呈橢圓形（核質(zhì)比約 1:3.8），較 F81 細(xì)胞體積略大。在培養(yǎng)特性上，CRFK 最適體系為含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基（添加 1% 非必需氨基酸），在 37℃、5% CO?環(huán)境下貼壁生長(zhǎng)，倍增時(shí)間約 28-32 小時(shí)（稍長(zhǎng)于 F81 的 26-30 小時(shí)）。細(xì)胞融合度達(dá) 70%-80% 時(shí)需傳代，推薦比例 1:3，過(guò)度密集會(huì)誘發(fā)細(xì)胞凋亡（凋亡率上升 18%），這一特性與 F81 的形態(tài)改變有所不同。
功能鑒定顯示，CRFK 高表達(dá)腎上皮標(biāo)志物細(xì)胞角蛋白 20（CK20，98% 陽(yáng)性）、ACE2 受體（血管緊張素轉(zhuǎn)換酶 2，95% 陽(yáng)性），低表達(dá)波形蛋白（＜3%），且經(jīng)多次檢測(cè)證實(shí)無(wú)支原體及貓內(nèi)源逆轉(zhuǎn)錄病毒污染。其中 ACE2 受體的高表達(dá)（是 F81 細(xì)胞的 3.2 倍），使其成為冠狀病毒研究的天然優(yōu)勢(shì)模型。
核心應(yīng)用領(lǐng)域
貓冠狀病毒培養(yǎng)與分型研究
CRFK 對(duì)貓冠狀病毒（包括傳染性腹膜炎病毒 FIPV 和腸道冠狀病毒 FECV）具有獨(dú)te敏感性，F(xiàn)IPV 感染后 72 小時(shí)即可出現(xiàn)典型細(xì)胞病變（CPE），表現(xiàn)為細(xì)胞融合形成多核巨細(xì)胞（病變率達(dá) 90%），病毒滴度可達(dá) 10??2TCID??/mL，顯著高于 F81 細(xì)胞（10???TCID??/mL）。研究顯示，該細(xì)胞系可通過(guò)病毒復(fù)制效率差異區(qū)分 FIPV 與 FECV（前者復(fù)制能力是后者的 4.5 倍），為冠狀病毒分型提供快速檢測(cè)手段。此外，CRFK 支持貓冠狀病毒連續(xù)傳代 25 次以上（F81 僅能穩(wěn)定傳代 15 次），為病毒變異研究創(chuàng)造條件。
抗冠狀病du藥物篩選與疫苗研發(fā)
作為貓冠狀病毒疫苗生產(chǎn)的shou選細(xì)胞系，CRFK 在 FIPV 滅活疫苗研發(fā)中表現(xiàn)突出。2022 年某候選疫苗通過(guò)該細(xì)胞系培養(yǎng)，病毒抗原產(chǎn)量達(dá) 22μg/mL，是 F81 細(xì)胞的 2.3 倍，疫苗免疫后貓血清中和效價(jià)達(dá) 1:512。在藥物篩選中，CRFK 模型發(fā)現(xiàn)某核苷類似物可抑制 FIPV 復(fù)制（EC??=2.1μM），且對(duì)細(xì)胞毒性低（CC??=85μM），治療指數(shù)顯著高于 F81 模型的篩選結(jié)果。
冠狀病毒入侵機(jī)制研究
利用 CRFK 的 ACE2 高表達(dá)特性，研究證實(shí)該受體是 FIPV 入侵的關(guān)鍵分子（敲除 ACE2 后病毒感染率下降 92%）。通過(guò)蛋白質(zhì)互作分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)IPV 刺突蛋白（S 蛋白）與 CRFK 細(xì)胞 ACE2 的結(jié)合親和力達(dá) 1.8×10??M，這一結(jié)合效率是 F81 細(xì)胞的 5.6 倍。此外，該細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率達(dá) 58%（高于 F81 的 50%），為冠狀病毒蛋白功能研究提供便利，如過(guò)表達(dá) S 蛋白可誘導(dǎo) CRFK 細(xì)胞融合率提升 65%。
與 F81 細(xì)胞系的差異及互補(bǔ)性
CRFK 與 F81 雖同屬貓腎細(xì)胞系，但存在顯著功能分化：CRFK 專注于冠狀病毒研究（對(duì) FIPV 敏感性是 F81 的 12 倍），而 F81 更適合貓瘟、皰疹病毒等研究；在培養(yǎng)特性上，CRFK 對(duì)血清質(zhì)量更敏感（低質(zhì)量血清會(huì)導(dǎo)致生長(zhǎng)停滯），而 F81 適應(yīng)性更強(qiáng)；兩者共同構(gòu)成貓?jiān)床《狙芯康幕パa(bǔ)體系，如聯(lián)合使用可全面評(píng)估多病毒混合感染的病理過(guò)程。
研究意義與展望
CRFK 貓腎細(xì)胞系的獨(dú)tte價(jià)值，在于其為貓冠狀病毒研究提供了精準(zhǔn)模型，推動(dòng) FIPV 等致死性疾病的機(jī)制解析。未來(lái)通過(guò)基因編輯技術(shù)增強(qiáng)其 ACE2 表達(dá)（初步實(shí)驗(yàn)顯示可提升病毒產(chǎn)量 40%），或構(gòu)建懸浮培養(yǎng)體系（目前貼壁培養(yǎng)的病毒產(chǎn)量是懸浮培養(yǎng)的 1.3 倍），有望進(jìn)一步提高疫苗生產(chǎn)效率。作為貓冠狀病毒研究的 “金標(biāo)準(zhǔn)” 細(xì)胞系，CRFK 正為貓傳染性腹膜炎等疫病的防控提供關(guān)鍵技術(shù)支撐，助力寵物健康產(chǎn)業(yè)發(fā)展。
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