BY-0799 BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纖維細胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-0799
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- 更新時間 2025/7/14 11:37:02
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BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纖維細胞系
BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纖維細胞系源自 BALB/c 小鼠 14 天胚齡的胚胎組織，是保留正常成纖維細胞生物學特性和接觸抑制功能的經(jīng)典細胞模型，在細胞轉(zhuǎn)化實驗、致癌機制研究及病毒增殖研究中具有不可替代的價值，為解析成纖維細胞的惡性轉(zhuǎn)化過程提供了標準化的體外研究工具。
該細胞系呈現(xiàn)典型的胚胎成纖維細胞形態(tài)與表型特征。顯微鏡下，細胞呈長梭形或多邊形，以貼壁生長為主，排列呈平行束狀或漩渦狀，細胞體積較大（長徑 25-40μm），核質(zhì)比適中，細胞核呈橢圓形，染色質(zhì)呈細顆粒狀，可見 1-2 個核仁，核分裂象每 10 個高倍視野 2-3 個，胞質(zhì)豐富，呈弱嗜堿性，可見細絲狀胞質(zhì)突起，電鏡下可見胞質(zhì)內(nèi)含有豐富的微絲和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，符合成纖維細胞的超微結(jié)構(gòu)特點。免疫表型分析顯示，細胞高表達間葉組織標志物 vimentin（陽性率 98%）和纖維連接蛋白（fibronectin，陽性率 95%），流式細胞術(shù)檢測顯示其 vimentin 表達強度顯著高于成體成纖維細胞，而不表達上皮細胞標志物 CK18 和肌細胞標志物 α-SMA，證實其純成纖維細胞特性。
體外培養(yǎng)體系中，BALB/3T3 clone A31 細胞展現(xiàn)出嚴格的接觸抑制和密度依賴性增殖特性。最適培養(yǎng)條件為含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，在 37℃、5% CO?環(huán)境下，傳代周期約 72 小時，倍增時間約 48 小時，顯著慢于腫瘤細胞系。其最xian著特點是具有完善的接觸抑制功能，當細胞匯合度達 80% 時，增殖幾乎wan全停止（增殖率下降至 5% 以下），避免細胞重疊生長，這種特性與其高表達細胞間黏附分子 E - 鈣粘蛋白相關(guān)（表達量是轉(zhuǎn)化細胞的 3 倍）。軟瓊脂克隆形成率極低（＜0.1%），證實其非惡性表型，連續(xù)傳代 30 次內(nèi)，細胞形態(tài)和增殖特性無明顯改變，超過 50 代后可能出現(xiàn)自發(fā)轉(zhuǎn)化（克隆形成率升至 5%），凍存復蘇存活率超 95%，復蘇后 48 小時即可恢復正常形態(tài)和增殖。
細胞轉(zhuǎn)化實驗中，BALB/3T3 clone A31 細胞是檢測化學致癌物和促癌劑的金標準。經(jīng)甲基膽蒽（MCA）等致癌物處理后，細胞可發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，表現(xiàn)為接觸抑制消失、形態(tài)變?yōu)槎嘟切?、排列紊亂，軟瓊脂克隆形成率升至 30%，接種裸鼠后成瘤率達 80%。轉(zhuǎn)化細胞的表型改變包括 vimentin 表達量增加 2 倍，E - 鈣粘蛋白表達下降 60%，與腫瘤細胞表型一致。該細胞系對促癌劑（如佛波酯 TPA）敏感，致癌物啟動后經(jīng) TPA 處理，轉(zhuǎn)化效率可提升 5-10 倍，這種兩階段轉(zhuǎn)化模型被廣泛用于致癌機制研究，其轉(zhuǎn)化灶形成實驗的靈敏度可達 0.1μg/mL（MCA 濃度），顯著高于其他細胞系。
病毒增殖研究證實其對多種病毒的易感特性。感染實驗顯示，該細胞可支持鼠肉瘤病毒（MSV）、多瘤病毒及水皰性口炎病毒（VSV）的復制，MSV 感染后 72 小時可觀察到典型的轉(zhuǎn)化灶（細胞堆積生長），病毒滴度達 10?PFU/mL，顯著高于其他成纖維細胞系。電鏡觀察顯示，病毒在細胞內(nèi)可完成完整的復制周期，多瘤病毒感染后可見核內(nèi)病毒顆粒裝配，與腫瘤細胞相比，其病毒釋放效率更高（約 60%），因無內(nèi)源性病毒污染，適合制備高滴度病毒懸液。
分子機制研究揭示其轉(zhuǎn)化相關(guān)的信號通路變化。正常細胞中，Ras/ERK 通路處于嚴格調(diào)控狀態(tài)，磷酸化 ERK（p-ERK）水平較低，經(jīng)致癌物處理后，Ras 基因發(fā)生突變（常見 G12V 突變），導致 p-ERK 水平升高 8 倍，細胞增殖失控。Western blot 分析顯示，轉(zhuǎn)化細胞中抑癌基因 p53 表達下降 50%，癌基因 c-Fos 表達增加 4 倍，這種分子改變與人類纖維肉瘤的基因表達譜高度相似。與其他成纖維細胞系相比，其轉(zhuǎn)化過程中的基因表達變化更穩(wěn)定，批次間差異小于 10%，適合標準化的分子機制研究。
在生物材料相容性評估中，該細胞系被用于檢測材料的細胞毒性。MTT 實驗顯示，其對毒性物質(zhì)的敏感性顯著高于其他細胞系，0.1% ben酚即可使細胞存活率下降 50%，這種高敏感性使其成為 ISO 標準推薦的生物材料 cytotoxicity 測試細胞。材料浸提液處理后，細胞形態(tài)改變和增殖抑制率可直觀反映材料的生物相容性，與體內(nèi)植入實驗結(jié)果的一致性達 85%，顯著高于其他檢測模型。
傷口愈合模型研究中，BALB/3T3 clone A31 細胞的遷移能力為研究成纖維細胞功能提供了工具。劃痕實驗顯示，細胞在損傷后 24 小時遷移距離達傷口寬度的 50%，48 小時基本完成愈合，遷移過程依賴于基質(zhì)金屬蛋白酶 - 2（MMP-2）的活性（抑制劑處理可使遷移率下降 60%）。轉(zhuǎn)化生長因子 -β1（TGF-β1）處理可使遷移率提升 40%，同時促進膠原蛋白合成（合成量增加 3 倍），模擬體內(nèi)傷口修復過程，這種特性使其可用于創(chuàng)傷修復藥物的篩選。
衰老研究中，該細胞系展現(xiàn)出典型的復制性衰老特征。連續(xù)傳代至 50 代后，細胞出現(xiàn)衰老形態(tài)（體積增大、扁平），β- 半乳糖苷酶染色陽性率達 80%，端粒長度較年輕細胞縮短 50%，p16INK4a 表達量增加 10 倍，這些衰老標志物的變化為研究細胞衰老機制提供了清晰的模型。與成體成纖維細胞相比，其衰老過程更可控，衰老相關(guān)分泌表型（SASP）更穩(wěn)定，適合衰老相關(guān)疾病的研究。
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