T-47D人乳腺管癌細(xì)胞系
T-47D人乳腺管癌細(xì)胞系是探究激素依賴性乳腺管癌的核心模型,憑借高表達(dá)雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR),以及對(duì)激素調(diào)控的高度敏感性,在乳腺管癌的激素作用機(jī)制、內(nèi)分泌治療響應(yīng)及耐藥研究中占據(jù)重要地位,為解析該類(lèi)型癌癥的發(fā)生發(fā)展與治療提供了有力的實(shí)驗(yàn)支撐。
來(lái)源與背景:該細(xì)胞系于 1976 年從一名 54 歲女性乳腺管癌患者的胸腔積液中成功分離建立,隸屬于 luminal 型乳腺癌細(xì)胞系。乳腺管癌作為乳腺癌中最常見(jiàn)的類(lèi)型,約占所有乳腺癌的 70%,其中激素受體陽(yáng)性的病例占比較高。T-47D 細(xì)胞系因完整保留了激素受體信號(hào)通路,成為研究激素依賴性乳腺管癌的理想模型。相較于三陰性乳腺癌細(xì)胞系(如 MDA-MB-231),它更能精準(zhǔn)體現(xiàn)激素依賴的生長(zhǎng)特點(diǎn),尤其適用于研究雌激素在乳腺管癌發(fā)生過(guò)程中的作用機(jī)制,至今仍是該領(lǐng)域內(nèi)分泌治療研究的關(guān)鍵參照。
細(xì)胞特性:在形態(tài)上,呈現(xiàn)典型的上皮樣特征,貼壁生長(zhǎng)且排列緊密,呈鋪路石樣,細(xì)胞多為圓形或多邊形,細(xì)胞質(zhì)豐富,細(xì)胞核大而圓,核仁清晰可見(jiàn),核質(zhì)比約為 1:1.3,具備乳腺管癌細(xì)胞的典型形態(tài)。其核心特性主要有:高表達(dá)激素受體,免疫組化結(jié)果顯示,ER 陽(yáng)性率高達(dá) 90%,PR 陽(yáng)性率達(dá) 85%,ERα 蛋白的表達(dá)量是正常乳腺上皮細(xì)胞的 5-8 倍,對(duì)雌激素刺激極為敏感,經(jīng) 17β- 雌二醇處理后,細(xì)胞增殖速率可提升 30%;生長(zhǎng)依賴激素,在無(wú)血清培養(yǎng)基中,添加雌激素能維持細(xì)胞增殖,一旦去除雌激素或加入抗雌激素藥物(如他mo昔芬),細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)受到顯著抑制,其 IC50 值約為 0.5μM;增殖與侵襲能力,體外培養(yǎng)時(shí),倍增時(shí)間約為 60-72 小時(shí),克隆形成率約 40%,裸鼠皮下接種成瘤率達(dá) 100%,但成瘤速度較慢,6 周時(shí)腫瘤體積約為 0.8±0.2 cm3,Transwell 實(shí)驗(yàn)顯示,其穿膜細(xì)胞數(shù)遠(yuǎn)低于 MDA-MB-231,表明其侵襲轉(zhuǎn)移潛能較低。傳代時(shí),需用常規(guī)消化液處理,由于細(xì)胞貼壁較牢固,消化時(shí)間需 4-5 分鐘,傳代比例為 1:3-1:5,連續(xù)傳代 50 次后,仍能保持激素受體的高表達(dá)及激素依賴特性。
培養(yǎng)條件:最適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基,并添加 1% 抗菌劑,培養(yǎng)環(huán)境需控制在 37℃、5% CO?的飽和濕度條件下。為維持細(xì)胞的激素敏感性,可在培養(yǎng)基中加入 10μg/ml 胰島素。細(xì)胞密度應(yīng)維持在 20%-70%,若密度過(guò)高,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞接觸抑制明顯,增殖速率下降 25%。該細(xì)胞系對(duì)激素環(huán)境較為敏感,血清中雌激素水平的波動(dòng)會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)的穩(wěn)定性。傳代時(shí),需用含血清培養(yǎng)基終止消化,凍存液推薦使用含 10% DMSO 的胎牛血清,復(fù)蘇后細(xì)胞存活率可達(dá) 85% 以上,24 小時(shí)貼壁率超過(guò) 90%,細(xì)胞功能可恢復(fù)正常。
檢測(cè)鑒定:經(jīng)過(guò)微生物篩查,該細(xì)胞系無(wú)支原體、細(xì)菌、真菌及常見(jiàn)病毒污染,符合實(shí)驗(yàn)細(xì)胞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)顯示,ER、PR 呈強(qiáng)陽(yáng)性,HER2 為陰性,符合 luminal A 型乳腺癌的表型?;驕y(cè)序證實(shí)存在 PIK3CA 基因突變,該突變與約 40% 的 ER 陽(yáng)性乳腺癌患者情況一致,而 TP53 為野生型。染色體核型分析呈現(xiàn)亞三倍體核型,存在 1 號(hào)染色體長(zhǎng)臂擴(kuò)增、8 號(hào)染色體三體等異常,與 50% 的乳腺管癌患者遺傳學(xué)改變相吻合。功能驗(yàn)證中,經(jīng)他mo昔芬處理后,細(xì)胞周期 G1 期阻滯率達(dá) 60%,充分證實(shí)了其對(duì)激素治療的敏感性。
應(yīng)用領(lǐng)域:在激素機(jī)制研究中,該細(xì)胞系被廣泛用于探究雌激素通過(guò) ER 調(diào)控下游靶基因(如 Cyclin D1、c-Myc)的分子機(jī)制,為理解 “雌激素 - ER - 靶基因” 通路在乳腺管癌細(xì)胞增殖中的作用提供了堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。在內(nèi)分泌治療研究方面,常用于評(píng)估抗雌激素藥物的療效及耐藥機(jī)制,研究發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)期用他mo昔芬處理可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性,耐藥細(xì)胞中 ER 共激活因子 SRC-1 的表達(dá)上調(diào) 2 倍。在藥物研發(fā)領(lǐng)域,作為篩選新型 ER 拮抗劑的模型,近期有研究發(fā)現(xiàn),一種新型 ER 降解劑能使 T-47D 細(xì)胞的 ER 蛋白水平下降 80%,抑制率明顯高于他mo昔芬。此外,該細(xì)胞系還可用于研究激素與其他信號(hào)通路的交叉調(diào)控,研究表明,與 PI3K 抑制劑聯(lián)合使用時(shí),對(duì)細(xì)胞增殖的抑制率從單獨(dú)用藥的 40% 提升至 70%,為聯(lián)合治療方案提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
與其他乳腺癌細(xì)胞系相比,T-47D 的顯著優(yōu)勢(shì)在于其擁有完整的激素受體信號(hào)通路,且對(duì)內(nèi)分泌治療敏感,能夠真實(shí)模擬激素依賴性乳腺管癌的生物學(xué)特性,為該類(lèi)型癌癥的發(fā)病機(jī)制研究及內(nèi)分泌治療策略的開(kāi)發(fā)提供了不可替代的實(shí)驗(yàn)工具,持續(xù)推動(dòng)著乳腺管癌精準(zhǔn)診療的發(fā)展。
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